微生物與人類健康十-診斷課件

一、微生物疾病的診斷病癥觀察顯微鏡檢查生物化學(xué)檢驗(yàn)微生物培養(yǎng)免疫學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)方法一、微生物疾病的診斷病癥觀察1、病癥觀察了解癥狀分析感染部位推測(cè)感染病原1、病癥觀察了解癥狀病癥觀察：各種皮疹的比較萊姆病麻疹單純皰疹病毒水痘病癥觀察：各種皮疹的比較萊姆病麻疹單純皰疹病毒水痘2、顯微鏡檢查取樣觀察病原的形態(tài)特征，確定病原的性質(zhì)，了解感染的情況觀察免疫細(xì)胞的數(shù)量，了解體內(nèi)炎癥情況陰道分泌物涂片，顯示奈氏淋球菌感染2、顯微鏡檢查取樣觀察病原的形態(tài)特征，確定病原的性質(zhì)，了解感3、微生物培養(yǎng)從樣品中分離微生物，進(jìn)行培養(yǎng)，了解微生物的：營(yíng)養(yǎng)需要、代謝特征，宿主上、中：微生物對(duì)糖的利用下：微生物對(duì)檸檬酸的利用3、微生物培養(yǎng)從樣品中分離微生物，進(jìn)行培養(yǎng)，了解微生物的：上用于快速診斷的培養(yǎng)基試劑盒用于快速診斷的培養(yǎng)基試劑盒4、生物化學(xué)檢驗(yàn)有些感染會(huì)造成生理代謝變化，產(chǎn)生特征性的物質(zhì)，可以作為診斷的工具舉例：肝炎病毒感染造成血液中轉(zhuǎn)氨酶水平上升，可用于診斷自動(dòng)生化分析儀4、生物化學(xué)檢驗(yàn)有些感染會(huì)造成生理代謝變化，產(chǎn)生特征性的物質(zhì)5、免疫學(xué)技術(shù)利用抗原-抗體反應(yīng)的特異性來(lái)診斷特定的病原感染。對(duì)于顯微鏡下難以看見的病毒等微生物的感染尤其有用。主要針對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)5、免疫學(xué)技術(shù)利用抗原-抗體反應(yīng)的特異性來(lái)診斷特定的病原感染準(zhǔn)備抗體抗原（細(xì)菌、病毒或其組成部分）分離純化注射采血分離抗體標(biāo)記抗體準(zhǔn)備抗體抗原（細(xì)菌、病毒或其組成部分）分離純化注射采血分離抗標(biāo)記抗體標(biāo)記物：酶：加入合適的試劑后可顯色熒光分子：可發(fā)出熒光放射性同位素：產(chǎn)生射線標(biāo)記抗體標(biāo)記物：檢測(cè)病原體采樣(血、組織）抗原包被加入抗體洗去多余抗體定量讀數(shù)顯色檢測(cè)病原體采樣抗原包被加入抗體洗去多余抗體定量讀數(shù)顯色免疫熒光技術(shù)用產(chǎn)生熒光的分子代替酶免疫熒光技術(shù)用產(chǎn)生熒光的分子代替酶免疫學(xué)技術(shù)應(yīng)用舉例舉例：乙肝病毒感染主要指標(biāo)有（二對(duì)半）：表面抗原，表面抗原的抗體，e抗原，e抗原的抗體，核心抗原的抗體免疫學(xué)技術(shù)應(yīng)用舉例舉例：乙肝病毒感染乙肝病毒感染的免疫學(xué)檢測(cè)情況之一：表面抗原的抗體陽(yáng)性，余皆為陰性——免疫接種產(chǎn)生效果情況之二（大三陽(yáng)）：表面抗原，e抗原，核心抗原的抗體——病毒活躍復(fù)制情況之三（小三陽(yáng)）：表面抗原，e抗體，核心抗原的抗體——病毒復(fù)制不活躍，傳染性較小情況之四：表面抗原，表面抗原抗體，核心抗原抗體陽(yáng)性——病毒急性感染已結(jié)束乙肝病毒感染的免疫學(xué)檢測(cè)情況之一：表面抗原的抗體陽(yáng)性，余皆為其他免疫學(xué)方法凝血試驗(yàn)溶血試驗(yàn)....其他免疫學(xué)方法凝血試驗(yàn)6、分子生物學(xué)方法核酸雜交生物芯片PCR核酸序列分析6、分子生物學(xué)方法核酸雜交核酸雜交利用核苷酸間的特異性配對(duì)進(jìn)行檢測(cè)將DNA點(diǎn)在膜上將雙鏈DNA變性為單鏈DNA加入根據(jù)特殊檢測(cè)要求設(shè)計(jì)的標(biāo)記探針斑點(diǎn)雜交核酸雜交利用核苷酸間的特異性配對(duì)進(jìn)行檢測(cè)將DNA點(diǎn)在膜上將雙DNA轉(zhuǎn)移雜交（SouthernBlot）電泳將DNA片段分開將DNA從膠轉(zhuǎn)移到膜在膜上進(jìn)行雜交、顯色得到有關(guān)基因位置的信息吸水紙DNA轉(zhuǎn)移雜交（SouthernBlot）電泳將DNA片段生物芯片——高度密集的核酸雜交借助微量精密操作技術(shù)高效率地檢測(cè)不同基因的表達(dá)一般過(guò)程：將不同的基因探針點(diǎn)在介質(zhì)（玻璃，高分子材料等）上從細(xì)胞中提取總RNA，并用熒光或同位素標(biāo)記將細(xì)胞RNA與介質(zhì)上的基因（DNA）進(jìn)行雜交，洗去未雜交的RNA用生物芯片掃描儀測(cè)定每一點(diǎn)上的信號(hào)，確定細(xì)胞中是否有特定的RNA及RNA的水平生物芯片——高度密集的核酸雜交借助微量精密操作技術(shù)生物芯片6400點(diǎn)的芯片（12x14mm）生物芯片6400點(diǎn)的芯片生物芯片生物芯片生物芯片生物芯片生物芯片在微生物疾病診斷中的應(yīng)用一次試驗(yàn)診斷所有病原體和疾病蛋白質(zhì)芯片：用類似的技術(shù)結(jié)合抗原-抗體反應(yīng)原理，進(jìn)行高效率的免疫學(xué)檢測(cè)生物芯片在微生物疾病診斷中的應(yīng)用一次試驗(yàn)診斷所有病原體和疾病多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）通過(guò)將微量的核酸擴(kuò)增來(lái)檢測(cè)病原材料：模板：樣品中原有的核酸引物：DNA復(fù)制必須要有一小段DNA作為先導(dǎo)物，可以設(shè)計(jì)特殊引物來(lái)擴(kuò)增特定的DNA序列高溫多聚酶：能在高溫下保持活性的酶原理：高溫下雙鏈DNA變性成單鏈降低溫度讓引物和模板配對(duì)高溫聚合酶合成新的DNA如此循環(huán)往復(fù)多次多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）通過(guò)將微量的核酸擴(kuò)增來(lái)檢測(cè)病原PCR反應(yīng)的反應(yīng)物模板引物1，2（過(guò)量）其他： 核苷酸、高溫聚合酶等PCR反應(yīng)的反應(yīng)物模板引物1，2其他： 核苷酸、高溫聚合酶PCR反應(yīng)：第一輪第一步：加熱變性第二步：降溫配對(duì)第三步：新鏈合成PCR反應(yīng)：第一輪第一步：加熱變性第二步：降溫配對(duì)第三步：新PCR反應(yīng)：第二輪第三步：新鏈合成第一步：加熱變性第二步：降溫配對(duì)PCR反應(yīng)：第二輪第三步：新鏈合成第一步：加熱變性第二步：降PCR反應(yīng)：第三十輪共230=1,073,741,824PCR反應(yīng)：第三十輪共230=1,073,741,8PCRPCRKaryB.Mullis

1993年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)IwasworkingforCetus,makingoligonucleotides.Theywereheadytimes.BiotechnologywasinflowerandonespringnightwhiletheCaliforniabuckeyeswerealsoinflowerIcameacrossthepolymerasechainreaction.IwasdrivingwithJenniferBarnetttoacabinIhadbeenbuildinginnorthernCalifornia.SheandIhadworkedandlivedtogetherfortwoyears.Shewasaninspirationtomeduringthattimeasonlyawomanwithbrains,inthebloomofherwomanhood,canbe.Thatmorningshehadnoideawhathadjusthappened.Ihadaninkling.Itwasthefirstdayoftherestofmylife.KaryB.Mullis1993年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)IwaCaliforniaBuckeyeTreeCaliforniaBuckeyeTreePCR：快速檢測(cè)的基礎(chǔ)只要知道病原體的部分特征性核酸序列，就可以設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR檢測(cè)數(shù)小時(shí)之內(nèi)可完成檢測(cè)新的技術(shù)：定量檢測(cè)PCR：快速檢測(cè)的基礎(chǔ)只要知道病原體的部分特征性