藥理學實驗的基本知識課件

藥理學實驗概述

一、藥理學實驗課的目的在實驗過程中使學生初步掌握藥理學實驗的基本操作技術(shù)驗證和鞏固藥理學的基本理論。通過實驗培養(yǎng)學生具有科學的思維方法和科學的工作態(tài)度。藥理學實驗的特點

藥理學實驗一般以活體為對象，包括其正常功能、整體的動物和離體的器官或組織均在具有活性的前提下用于實驗。小心、規(guī)范地操作注意保護動物或標本于最佳活性狀態(tài)。（二）實驗時保持實驗室的整齊、清潔，保持實驗室安靜，不要高聲談笑，不得進行與實驗無關(guān)的活動。愛護公共財物,各組儀器和器材由各組使用按照實驗步驟，認真操作，注意保護實驗動物和標本，節(jié)省實驗器材和藥品。仔細、耐心地觀察實驗過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象，真實客觀地記錄實驗結(jié)果，并加上必要的文字注釋，有時還需要繪制圖形或曲線進行分析。

（三）實驗后

將實驗用具整理就緒，所用器械沖洗干凈后，交還借用的器械。如果器械有損壞或短少，應(yīng)立即報告負責教師。動物尸體、標本、紙片和廢品應(yīng)放到指定地點。搞好實驗室的清潔衛(wèi)生工作，離開實驗室前應(yīng)關(guān)燈，關(guān)窗，關(guān)水龍頭。認真整理實驗結(jié)果并撰寫實驗報告。實驗報告的書寫每次實驗，均要求寫出實驗報告。實驗報告應(yīng)注意文字簡練，通順，書寫清楚，整潔，正確使用標點符號。動物實驗的基本操作技術(shù)實驗動物是指人工飼養(yǎng)，對其攜帶的微生物實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚的動物。這些個體具有較好的遺傳均一性、對外來刺激的敏感性和較好的重復(fù)性。1．青蛙與蟾蜍2．小白鼠3．大白鼠4．豚鼠：性情溫順，膽小怕驚嚇，對組胺敏感。常用于免疫學研究和過敏性疾病模型5．家兔：耳大，血管清晰，便于靜脈注射和取血。眼大易觀察，常用于眼科研究。因其體溫變化較敏感，也常用于體溫實驗及熱原檢查。6．貓：貓的血壓比較穩(wěn)定，較大鼠、家兔等小動物更接近于人體，且與人相似，故可用于循環(huán)藥理研究。7．狗：是醫(yī)學實驗中最常用的大動物。血液、循環(huán)、消化和神經(jīng)系統(tǒng)均很發(fā)達、與人類較接近。適用于藥理學、毒理學和藥物代謝、營養(yǎng)學和藥理學研究。8、小型豬：毛發(fā)、皮膚厚薄，形態(tài)學和增殖動力學與人非常相似。理想的燒傷模型9、猴：最相似的生物學和行為學特征（2）標記規(guī)則：根據(jù)實驗動物被毛顏色的不同選擇不同化學藥品涂染動物。A、兔、貓、狗等動物的標記方法：用毛筆蘸取不同顏色的染料溶液直接在動物背部涂寫號碼。若用硝酸銀溶液涂寫，則需在日光下暴露1分鐘。B、大鼠、小鼠的標記：通常在動物不同部位涂上有色斑點來表示不同的號碼。常規(guī)的涂染順序是從左到右、從上到下。左前肢為1號、左側(cè)腹部2號、左后肢3號、頭部4號、背部5號、尾根部6號、右前肢為7、右側(cè)腹部8號、右后肢9號、不作染色標記為10號。在每組實驗動物不超過10只的情況下適用。

雙色涂染法是采用兩種顏色同時進行染色標記的方法。雙色法色法可標記100位以內(nèi)的號碼。例如用苦味酸（黃色）染色標記作為個位數(shù)，用品紅（紅色）染色標記作為十位數(shù)。個位數(shù)的染色標記方法同單色涂染法；十位數(shù)的染色標記方法參照單色涂染法，即左前肢為10號、左側(cè)腹部20號、左后肢30號、頭部40號、背部50號、尾根部60號、右前肢70號、右側(cè)腹部80號、右后肢90號，第100號不作染色標記。比如標記第12號實驗動物，在其左前肢涂染品紅（紅色），在其左側(cè)腹部涂上苦味酸（黃色）即可。2．穿耳打孔法：用專門的打孔器在動物耳朵的不同部位打孔或缺口來表示一定號碼。此法是小鼠常用的標記方法之一。3．掛牌編號法：常用于狗、猴、貓等大動物的編號。實驗前將之固定于動物的頸圈或耳上4．人工針刺號碼法：先將動物被毛去除，用針在動物皮膚上刺出號碼，再用酒精墨汁涂染即可大鼠的抓取固定方法

大鼠的抓取斯基本同小鼠，只不過大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用襲擊方式抓取，否則會被咬傷手指，抓取時為避免咬傷，可帶上帆布手套。動物的抓取實驗動物的給藥方法

經(jīng)消化道給藥1．小鼠灌胃法灌胃法

12~16號注射針頭，尖端部磨鈍，針頭長4~5cm進針2~3cm后。灌藥量一般為0.1~0.3ml/10g體重豚鼠灌胃法豚鼠體重<200g以下時，灌胃方法可與大鼠相同；體重>200g以上時，應(yīng)用木制開口器和導(dǎo)尿管灌胃。

插管完畢后，先回抽注射器針栓，無空氣抽出時，再慢慢推注藥液。如回抽出空氣，說明可能插入氣管，應(yīng)拔出重插。藥物注完后應(yīng)再注入生理鹽水2ml，將管內(nèi)殘存藥物沖入兔灌胃法：用兔固定箱，可一人操作。右手將開口器固定于兔口中，舌壓在開口器下面，慢慢沿兔口腔上腭壁插入食道約15～18cm。插管完畢將胃管的外口端放入水杯中，切忌伸入水過深。如有氣泡從胃管逸出，說明不在食道內(nèi)而是在氣管內(nèi)，應(yīng)拔出來重插。如無氣泡逸出，則可將藥推入并以少量清水沖洗導(dǎo)尿管保證管內(nèi)藥液全部進入胃內(nèi)。二、注射給藥法小鼠皮下注射

通常在背部皮下注射。注射時以左手拇指和中指將小鼠頸背部皮膚輕輕提起，食指輕按其皮膚，使其形成一個三角形小窩，右手持注射器從三角窩下部刺入皮下，輕輕擺動針頭，如易擺動時則表明針尖在皮下，此時可將藥液注入，針頭拔出后，以左手在針刺部位輕輕捏住皮膚片刻，以防藥液流出。藥量一般為0.1ml—0.3ml/10g體重。豚鼠皮下注射通常在大腿部內(nèi)側(cè)面注射。固定豚鼠后，左手固定注射側(cè)的后肢并充分提起皮膚，右手持注射器，針頭與皮膚呈45度角的方向刺入，確定針頭在皮下后推入藥液。注射完畢后應(yīng)指壓刺入部位并輕輕揉之。兔皮下注射法可在背部或頸部注射，方法參照小鼠皮下注射法。給藥量一般為0.5~1.0ml/kg體重。

3．肌肉注射法小鼠、大鼠、豚鼠肌肉注射一般因肌肉少，不作肌肉注射，如需要時，可將動物固定后，一手拉直動物左或右側(cè)后肢，將針頭刺入后肢大腿外側(cè)肌肉內(nèi)，小鼠一側(cè)藥液注射少于0.4ml，針頭選用5～7號。兔肌肉注射可選兩臂或股部。靜脈注射法

小鼠大鼠一般采用尾靜脈注射。注射前先將動物固定于固定器內(nèi)（可采用鐵絲籠、金屬筒或底部有小孔的玻璃筒），使其整個尾部外露，以右手食指輕彈尾尖部，必要時可用45～50℃的溫水浸泡尾部1～2分鐘或用75％乙醇擦拭尾部，或者將小鼠先放在40~50℃左右的加熱板上做運動，使其全部血管擴張充血。以拇指與食指捏住尾根部兩側(cè)，無名指和小指夾持尾尖部，中指從下托起尾巴固定之。選擇一根最為充盈的血管，右手持4號針頭使其與尾部呈30度角刺入靜脈，針頭在靜脈內(nèi)平行推進少許，左手三指連針頭和鼠尾一起捏住固定，以防動物活動時針頭脫出。回抽見血，且推動藥液無阻力、并可見沿靜脈血管出現(xiàn)一條白線說明針頭在血管內(nèi)，可注藥。如遇到阻力較大，局部發(fā)白變硬時，說明針頭不在靜脈內(nèi)，需拔出針頭重新穿刺。注射完畢后拔出針頭，輕按注射部止血。一般選擇尾兩側(cè)靜脈，針刺宜從尾尖端開始，漸向尾根部移動，以備反復(fù)應(yīng)用。一般一次注射量為0.05～0.2ml/10g體重。大鼠亦可舌下靜脈注射或待其麻醉后，切開其大腿內(nèi)側(cè)皮膚進行股靜脈注射，也可頸外靜脈注射。豚鼠：可選用前肢皮下頭靜脈、耳殼靜脈、外頸靜脈、或腳背中足靜脈等多部位進行注射。偶還可心內(nèi)注射。家兔：家兔靜脈注射一般采用耳緣靜脈。注射前先剪除其表面皮膚上的毛并用水濕潤局部，血管即顯現(xiàn)出來。可先輕彈或用酒精棉球揉擦耳尖部并用左手食指和中指輕壓耳根部，拇指小指夾住耳邊緣部分，以左手無名指放在其下作墊，待靜脈顯著充盈后，右手持帶有6~8號針頭的注射器刺入靜脈（第一次進針點要盡可能靠遠心端，以備反復(fù)應(yīng)用），順著血管平行方向深入1厘米后，放松對耳根處血管的壓迫，左手拇指和食指移至針頭刺入部位，將針頭與兔耳固定針頭刺入血管后再稍向前推進，輕輕推動針栓，若無阻力和局部皮膚發(fā)白、隆起現(xiàn)象，即可進行藥物注射，實驗動物的麻醉1.局部麻醉浸潤麻醉、阻滯麻醉、和椎管麻醉常用0.5～1％普魯卡因，表面麻醉宜選用2%丁卡因溶液。2.全身麻醉（1）吸入麻醉小鼠、大鼠和兔常用乙醚吸入麻醉。將浸過乙醚的脫脂棉花鋪在麻醉用的玻璃容器底部，實驗動物置于容器內(nèi)，容器加蓋。乙醚具揮發(fā)性，經(jīng)呼吸道進入肺泡后對動物進行麻醉，吸入后約15～20分鐘開始發(fā)揮作用，適用于時間短的手術(shù)過程或?qū)嶒灐?nèi)放置乙醚棉球可追加麻醉時間。但在麻醉初期，動物常出現(xiàn)強烈興奮的現(xiàn)象，因其對呼吸道有較強的刺激作用，可使粘液分泌增多以致堵塞呼吸道。另外，乙醚易燃、易爆，故需要專人管理。使用時應(yīng)避火、通風、注意安全。（2）注射麻醉

適用于多種動物，注射方法不一。不同動物對注射麻醉藥的反應(yīng)不盡相同，故需根據(jù)實驗的目的針對不同的實驗動物選用合適的麻醉藥種類和劑量。表3-6-1注射麻醉藥的劑量與給藥途徑藥物（常用濃度）動物給藥法劑量（mg/kg）維持時間（小時）備注戊巴比妥鈉（1～5％）犬貓兔豚鼠大鼠小鼠I.V.I.P.I.H.I.P.I.P.I.P.31～21～21～21～21～21～2硫噴妥鈉（5％）犬、貓兔、大鼠I.V.I.P.I.V.I.P.20～3030～500.25～0.50.25～0.5抑制呼吸，I.V.宜慢，應(yīng)臨用時配烏拉坦（20％）貓、兔大鼠、小鼠蛙I.V.I.P.I.M.淋巴囊90～12～42～42～4毒性小，較安全氯醛糖（2％）貓、兔大鼠I.V.I.P.I.V.I.P.80805～65～6安全，肌松不全氯烏合劑貓兔I.V.I.P.氯75烏7505～6I.V.靜脈注射I.P.腹腔注射I.M.肌肉注射I.H.皮下注射*氯:氯醛糖烏：烏拉坦在麻醉過程中，除參照上述一般藥物用量標準外，還必須密切注意動物的狀態(tài)，以決定麻醉藥的用量。麻醉的深淺，可根據(jù)呼吸的深度和快慢、角膜反射的靈敏度、四肢及腹壁肌肉的緊張性以及皮膚夾捏反應(yīng)等進行判斷。當呼吸突然變深變慢、角膜反射的靈敏度明顯下降或消失，四肢和腹壁肌肉松弛，皮膚夾捏無明顯疼痛反應(yīng)時，應(yīng)立即停止給藥。靜脈注藥時應(yīng)堅持先快后慢的原則，避免動物因麻醉過深而死亡。實驗動物的處死方法1.頸椎脫臼法：本法最常用于小鼠。用拇指和食指壓住小鼠頭的后部，另一手捏住小鼠尾巴，用力向后上方牽拉，使之頸椎脫臼，延腦與脊髓離斷而死亡。處死大鼠也可用此法，但需較大力氣。2.空氣栓塞法：主要用于大動物的處死。用注射器將空氣快速注入靜脈或心臟，使動物發(fā)生靜脈空氣栓塞，特別是肺動脈栓塞而致死。兔一般選用耳緣靜脈，狗由前肢或后肢皮下靜脈注射。一般兔與貓可注入空氣10