重醫(yī)免疫學(xué)思考題解析

1、臨床檢驗免疫學(xué)-思考題答案抗原抗體反應(yīng)一、抗原抗體反應(yīng)的原理1. ） Ag、Ab能特異性結(jié)合：（內(nèi)因）Ag、Ab能特異性結(jié)合，是由于Ag表位（抗原決定簇）和Ab Fab段（V區(qū)）之間的特異性結(jié) 合，二者在空間結(jié)構(gòu)上是嚴格互補的。1.）Ag、Ab結(jié)合的動力：（外因）靜電引力（又稱庫侖引力）：它是指抗原和抗體分子上帶有相反電荷-NH3+或-COCT之間的相互吸引力。例如Ab分子上賴氨酸離解層中含有 -NH3+ , Ag分子上天門冬氨酸離后含有-COO-，這兩者之間就可相互吸引而產(chǎn)生靜電引力。該力的大小與兩個電荷間距離的平方成反比。距離越近，靜電引力就越強。范得華力（又稱電子云力）：該力是原子與原子

2、、分子與分子間所具有的一種吸引力。 當(dāng)Ag、 Ab兩分子外層軌道上的電子相互作用時， 電子云由于偶極擺動而產(chǎn)生吸引力， 從而促使Ag、 Ab的結(jié)合。 該力大小小于靜電引力。氫鍵：該力是由于分子中的 H原子和電負性較大的 O、N、S原子間的相互吸引而形成的。 氫鍵對于維持生物大分子（AgAb ）的形態(tài)和結(jié)構(gòu)有很大作用。它的大小大于范得華力。疏水作用力：Ab是蛋白質(zhì)，Ag少數(shù)是多糖，多數(shù)也是蛋白質(zhì)，那么它們就是膠體物質(zhì)，在水溶液中就帶有-NH3+或-COCT極性基團，從而帶上正電或負電，成為親水膠體。當(dāng)Ag表位和Ab Fab段相互靠近時，親水層消失，排斥掉兩者間的H2O分子，促進Ag、Ab的結(jié)合。

3、疏水作用力在整個 Ag、Ab反應(yīng)中提供的作用最大二、抗原抗體反應(yīng)的特點1） .特異性：Ag、Ab的結(jié)合實質(zhì)上是抗原表位和抗體可變區(qū)之間的結(jié)合。Ab可變區(qū)可形 成一個平穴槽，Ag則楔狀嵌入，由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)上的互補，使得它們的結(jié)合具有特異性。這種結(jié)合如同鑰匙與鎖的關(guān)系，一把鑰匙只能開相應(yīng)的一把鎖2）.最適比例：Ag、Ab的結(jié)合并不是在任何比例下都進行得充分、完全的。要形成我們?nèi)庋劭梢姷姆磻?yīng)（如沉淀、凝集現(xiàn)象等），就涉及到最適比例問題。3）.可逆性：Ag、Ab結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，這一過程是一個動態(tài)平衡，在一定的條件下，反應(yīng)是可逆的： Ag + Ab tAgAb，其主要原因為 Ag、

4、Ab結(jié)合是非共價鍵結(jié)合，不為 化學(xué)反應(yīng)。三、影響抗原抗體反應(yīng)的主要因素自身因素：1） Ag :與Ag的理化性質(zhì)、抗原表位的數(shù)目及種類有關(guān)；2） Ab :與Ab的來源有關(guān)：是 R型抗體或H 型抗體；與Ab的特異性、親合性有關(guān)；與Ab的濃度有關(guān)。外界環(huán)境條件：1） .電解質(zhì)：一般實驗室所用電解質(zhì)都是生理鹽水（0.9% NaCl）,濃度不能過高。濃度過高， 會使Ab蛋白質(zhì)優(yōu)先沉淀而出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。2） . PH : 一般為PH 6-8,當(dāng)PH<3時，可出現(xiàn)顆粒性的非特異性凝集，稱酸凝集。當(dāng)PH過 高，可堿變性。3） .溫度：抗原抗體反應(yīng)的常用溫度為37 °。四、抗原抗體反應(yīng)分哪些種類？

5、沉淀反應(yīng)；凝集反應(yīng)；補體參與的溶血反應(yīng)、補體結(jié)合試驗；中和試驗；免疫標記技術(shù)。五、什么是交叉反應(yīng)，有無特異性，為什么？在臨床上有何意義？1）交叉反應(yīng)（cross-reaction）-抗體對具有相同或相似抗原表位的不同抗原的反應(yīng)稱為交 叉反應(yīng)。2）有特異性。（交叉反應(yīng)并沒有違背 Ag、Ab特異性結(jié)合的原則，其產(chǎn)生的先決條件是存 在共同Ag表位。）3）交叉反應(yīng)的意義： 免疫學(xué)診斷：（利用交叉反應(yīng)）eg外斐氏反應(yīng)等：用變形桿菌 0X19、0X2、OXk 作抗原查血清抗體，診斷斑疹傷寒（立克次氏體感染所致） 可造成免疫病理損害：eg鏈球菌感染后易導(dǎo)致腎小球腎炎，其原因為鏈球菌與人 體腎小球基底膜有共同

6、 Ag表位所致。沉淀反應(yīng)、免疫電泳、雙擴、單擴、對流免疫電泳、免疫電泳實驗的原理，方法，用途雙擴單擴對流免疫免疫電泳原理可溶性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在下， 在瓊脂基質(zhì)中擴散，當(dāng)兩者相遇，比例恰 當(dāng)時結(jié)合，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀線。定向加速的免疫雙擴（雙擴+電場，使抗原、抗體相對泳動）Ag區(qū)帶電泳+雙擴結(jié)合方法1、制瓊脂板（3ml1.5%NS 瓊脂）2打孔（雙孔型/三 角孔型/梅花孔型 加樣（平孔沿加滿） 擴散（37C、24 h觀 察結(jié)果）1. 已知抗體+瓊脂制 板、打孔2. 在瓊脂板小孔中 加梯度抗原3. 抗原向四周擴散 形成沉淀環(huán)4. 抗原濃度與沉淀 環(huán)直徑呈線性關(guān)系 繪制標準曲線5. 從標

7、準曲線上查 出并計算出待測標 本含量抗原、抗體分別在瓊 脂板上不同孔內(nèi)，抗 原在負極端，抗體在 正極端，電泳。電壓：46v/cm（瓊脂長 度）電泳時間：45分鐘1 小時1. Ag電泳分出 區(qū)帶2. Ag、Ab 免疫雙擴用途1已知Ag或Ab測 未知Ab或Ag :雙 孔型2抗原性質(zhì)分析：三 角孔型3測Ag有效稀釋 度：梅花孔型定量測定，如測IgG、IgA、IgM、C3等含量用于HBsAg、AFP等檢測1、常用于分析 復(fù)雜Ag的組 分。（如人全血 清組分的分析）2、多發(fā)性骨髓 瘤等疾病的測疋二、影響電泳的因素有哪些？ 影響電泳的因素：1與溶液的pH有關(guān)：常用pH89,蛋白質(zhì)帶負電2. 與溶液離子強度

8、有關(guān)：愈高，泳動慢，一般0.020.2M3. 與電場強度有關(guān)：愈高，愈快，一般 46v/cm （瓊脂長），約40v左右4電滲作用的影響電滲作用：電場中液體對于一固體的固定相對移動的現(xiàn)象電滲方向與電泳方向相反。凝集反應(yīng)、玻片凝集試驗和試管凝集試驗的區(qū)別方法用途玻 片 法用已知抗體檢 測未知抗原于玻片上先加已知抗體，再加入待測 物（未知抗原），混勻。如發(fā)生凝聚， 說明待測物中有與抗體相對應(yīng)的抗原ABO血型鑒定 菌種鑒定試 管 法用已知抗原測 未知抗體的效 價屬半疋里試驗19號試管分別加不同稀釋度待檢血 清（容量相同，Ab），10號加NS（對 照），各管再加定量（濃度、容量一樣） 的Ag。結(jié)果：以出

9、現(xiàn)明顯凝集的血清最高稀 釋度（即可以判為+者）作為該血清（Ab）的凝集效價。舉例：1. 肥達氏反應(yīng)（Widal test）2. 外斐氏試驗（Weil-Felix test）二、反向間接凝集試驗、間接凝集抑制試驗的原理及實例1、反向間接凝集試驗原理：將已知抗體吸附于顆粒性載體上，檢測未知抗原實例：反向間接血凝檢測 HBsAg、AFP等2、間接凝集抑制試驗原理：待測樣本（可溶性 Ag ? ） +已知Ab - +已知致敏Ag顆粒（已成為顆粒 性Ag）-觀察是否有凝集現(xiàn)象 不凝集為陽性，凝集為陰性。實例：用膠乳凝集抑制試驗檢測小便中絨毛膜促性腺激素（HCG）三、協(xié)同凝集試驗的原理原理：實質(zhì)為反向間接凝

10、集反應(yīng)葡萄球菌A蛋白（Staphylococcus protein A, SPA能非特異地與IgG的Fc段結(jié)合, 當(dāng)與特異性抗原相遇時，IgG的Fab段與抗原結(jié)合，出現(xiàn)金葡菌的凝集現(xiàn)象（屬 特殊間接凝集試驗）協(xié)同凝集試驗實際是用已知抗體檢測未知抗原，可用于多種抗原的檢測四、比較沉淀試驗和凝集試驗的異同沉淀試驗?zāi)囼灴乖再|(zhì)可溶性Ag顆粒性Ag稀釋對象抗原抗體結(jié)果現(xiàn)象沉淀現(xiàn)象凝集現(xiàn)象敏感性低高免疫熒光技術(shù)一、免疫標記技術(shù)的原理原理：用熒光素標記抗原或抗體，與待測標本中相應(yīng)抗體或抗原結(jié)合，通過檢測熒光，確定標本中有無待測的抗體或抗原。二、免疫熒光技術(shù)中最常用的熒光素是什么？1. 異硫氰酸熒光黃（

11、Fluorescein isothiocyanate , FITC）可發(fā)出黃綠色熒光2. 四乙基羅丹明（rhodamine, RB200）發(fā)出橘紅色熒光3. 四甲基異硫氰酸羅丹明（tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC）發(fā)出橙紅色熒光、免疫熒光顯微染色的各種方法及優(yōu)缺點方法特點直 接 法待測標本固定（Ag?） + Ab-洗滌-AgAb快、直接、干擾因素少用于檢測抗原 每檢測一種抗原要標記相應(yīng)熒光抗體，較麻煩間接法第一步：熒光素標記抗抗體（如熒光標記的羊抗人IgG）；第二步：已知Ag固定+待測 標本（Ab?）洗，+熒光標記的抗抗體洗，熒光顯微鏡鏡檢優(yōu)點

12、：制備一種熒光標記二抗（抗抗體）可用 于多種Ab檢測靈敏度咼補 體 法第一步：熒光素標記抗補體； 第二步：已知Ag固定+待測 標本（Ab ? ） +補體洗，+熒光標記的抗補體 洗，熒光顯微鏡鏡檢特點：靈敏度咼，制備一種熒光抗補體用于多 種檢測干擾因素多，補體不穩(wěn)定，易失活，該法少用免疫熒光顯微技術(shù)優(yōu)缺點優(yōu)點：1特異性、敏感性高 2.快速3可定位4既可測Ag又可測Ab缺點:1需要熒光顯微鏡2存在非特異熒光干擾（產(chǎn)生原因：自發(fā)、抗體不純、交叉反應(yīng)、技術(shù)問題）3. 定性測定、判斷結(jié)果不客觀4. 制備片子難保存（熒光猝滅）免疫酶技術(shù)一、ELISA的原理、方法（以間接法測抗體和雙抗夾心法為例）及影響因素

13、。原理:將酶分子與 Ab或Ag連接成一酶結(jié)合物（酶標記物），當(dāng)它與固相載體中相應(yīng)Ag或Ab相遇，形成酶標記的 AgAb復(fù)合物，加入底物，酶催化底物，生成有色產(chǎn)物，根 據(jù)顏色深淺可測出溶液中Ag或Ab的量。方法：雙抗體夾心法：包被已知Ab 洗滌加待測標本，（測Ag ？） 洗滌加酶標AbT 洗滌t 加底物t加終止液T觀察結(jié)果間接法：包被已知Ag +待測標本（測Ab ? '反應(yīng)一段時間后，洗滌 加酶標抗抗體（酶標羊抗人IgG） T洗滌T加底物T加終止液，觀察結(jié)果。（該法主要用于測抗體；酶標記一種抗抗體可以用于多種抗體的檢測） 影響因素：（一）固相載體：常用固相載體材料：聚苯乙烯。其特點為吸附

14、Ag或Ab的能力強，一但吸附后，不能被洗脫。（二）抗原、抗體Ag:需純化Ab :需效價高、親和力強、純化（三）試驗條件1. 包被：一般用 pH 9.6 CB（carbonate buffer） ，0.05M,有利于蛋白質(zhì)吸附包被濃度：0.1100 g/ml，一般常用10 g/ml包被時間、溫度：4 C過夜或37 C 1-3h包被量：100ul封閉：用0.15%牛血清白蛋白緩沖液浸泡0.5小時2. 抗原抗體反應(yīng)的條件（1） 微堿性有利于抗原抗體結(jié)合，故用pH 7.4 PBS（phosphate buffer saline）洗滌（2）去污劑有利于 AgAb形成，洗液中加 0.05% Tween-2

15、0（3）Ag、Ab反應(yīng)時間、溫度： 一般37C、40min3. 洗滌采用PH7.2-7.4PBS洗滌，規(guī)一化，每次浸泡12min，拍干，共洗滌 34次4. 酶促反應(yīng)條件溫度 37 C 時間10mi npH 5.5底物量 一致5. 排除干擾：多設(shè)對照二、ELISA試驗應(yīng)設(shè)哪些對照，為什么？陽性對照；陰性對照；酶結(jié)合物對照；底物對照；空白對照 三、判斷ELISA試驗結(jié)果的方法。1若待檢孔顯色淺于陰性對照則判定為陰性；2若待檢孔顯色深于或等于陽性對照孔則判定為陽性；3若待檢孔顯色介于陰性對照孔和陽性對照孔之間則判定為弱陽性。免疫血清的制備一、免疫血清制備的主要程序。免疫程序：注射抗原 > 試血

16、和放血）鑒定、保存試血和放血：試血：末次Ag注射后，測定血清中Ab的效價，叫試血。若Ab達到所需效價, 即可放血。若未達到，繼續(xù)追加免疫 Ag 一次。試血：可溶性Ag :用雙擴（梅花孔型）；顆粒性Ag :用直接凝集試驗（試管法） 放血：直接頸動脈放血或直接心臟穿刺抽血。然后分離出血清，即可得到 Ab二、佐劑概念、作用機理、福氏不完全/完全佐劑的組成。.佐劑（adjuvant）:同Ag 一起或預(yù)先注入機體，能增強機體對該Ag的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)。作用機理：組成：1福氏不完全佐劑（FIA）：組成：羊毛脂+石臘油，二者比例為4 ： 12福氏完全佐劑（FCA）：組成：羊毛脂+石臘油+卡介

17、苗免疫效果更好，因為進一步提高、加強了免疫反應(yīng)，并使免疫反應(yīng)發(fā)生質(zhì)的改變。免疫球蛋白的分離提純分離提純免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？方法原理鹽析法在不同濃度的中性鹽中蛋白質(zhì)會脫水，降低帶電電勢，親水性變?yōu)槭杷裕?分子間相互凝聚而沉淀（鹽析作用）。離子父換 層析法利用不冋的蛋白質(zhì)在緩沖溶液中所帶電荷不冋，與某一載體上的具有相反電 荷的離子基團進行吸附，然后進行解脫，達到純化蛋白質(zhì)目的。凝膠過濾法凝膠顆粒是網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)， 當(dāng)分子大小不同的混合物通過凝膠柱時，分子大的先下來，分子小的嵌入凝膠顆粒的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中后下來，從而將分子大小不同的物質(zhì)分離開來，即為分子篩的作用。親和層析 法利用抗原抗體的結(jié)合

18、具有特異性、可逆性，將純化抗原先交聯(lián)（吸附）到載體（瓊脂糖珠）上，制成親和層析柱，當(dāng)Ab （Ig）通過時，與抗原特異性結(jié)合于柱上，Ab中雜質(zhì)流出。然后通過改變緩沖液pH、離子強度，使Ab解脫下來。單克隆抗體及應(yīng)用一、單克隆抗體概念針對Ag分子表面某一抗原決定簇（又稱表位）而產(chǎn)生的抗體分子，稱McAb單克隆抗體一一由一個B細胞克隆產(chǎn)生的識別單一抗原表位的同源抗體。二、雜交瘤技術(shù)制備單抗的原理及簡要步驟原理：1、B細胞（漿細胞）特點：1）能產(chǎn)生抗體 2）但不能在體外長期培養(yǎng) 3）細胞內(nèi)含HGPRT酶（次黃嘌呤鳥 嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶）和TK酶（胸腺嘧啶核苷激酶），可通過旁路途徑合成DNA2、骨髓瘤細

19、胞1）能在體外長期培養(yǎng) 2）不含HGPRT和TK酶3、雜交瘤細胞具有以上兩種細胞的共性：既能產(chǎn)生抗體、在體外能長期培養(yǎng)；同時含有 HGPRT和TK酶，可通過旁路途 徑合成DNA4、HAT培養(yǎng)液篩選出雜交瘤細胞（次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）:氨基蝶呤是抗代謝的藥物，能阻斷內(nèi)源性合成 DNA （合成DNA的主要途徑）。 簡要步驟：1制備能產(chǎn)生單抗的雜交瘤細胞2克隆化雜交瘤細胞3篩選雜交瘤細胞4.擴大培養(yǎng)單克隆雜交瘤細胞5收集單抗并鑒定6. 純化單抗（具體的步驟可以參考 ppt）三、HAT培 養(yǎng)基 的作用篩選出雜交瘤細胞四、人源單克隆抗體概念：單克隆抗體為人IgG五、基因工程抗體、嵌合抗體概念，嵌

20、合抗體優(yōu)點基因工程抗體：在基因水平上對編碼抗體的基因進行切割、拼接或修飾，甚至人工合成，然后導(dǎo)入受體細胞內(nèi)表達而產(chǎn)生的抗體（單克隆抗體）。嵌合抗體概念：用DNA重組技術(shù)將鼠源單抗基因的可變區(qū)（V區(qū)）基因與產(chǎn)生人lg的恒定區(qū)（C區(qū)）基因相連接，構(gòu)成嵌合基因，導(dǎo)入受體細胞（骨髓瘤細胞），表達出嵌合抗體。嵌合抗體優(yōu)點：a. 免疫原性低，有利于用于人體b. 在人體內(nèi)半衰期較鼠單抗長c. 在人體內(nèi)生物學(xué)作用（如 CDC、ADCC ）較鼠單抗強d. 與人/人雜交瘤比，體外傳代更穩(wěn)定補體的檢測與應(yīng)用一、補體的定義、組成及性質(zhì)定義：補體是存在于人和動物血清中的一組具有酶活性的球蛋白，一般情況下處于未 激活狀態(tài)

21、。組成：1補體的固有成分：C1-C9,其中C1又包括C1q、C1r、C1s,共9種成分11種蛋白分子。其 中C9的分子量最小、C3的含量最高；2補體的調(diào)節(jié)蛋白：如 C4調(diào)節(jié)蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3補體受體；女口 C1qR、C3aR等；性質(zhì)：穩(wěn)定性差，各種理化因素都可使之失活：如酸、堿、紫外線照射、劇烈震蕩等二、CH50實驗的原理、正常值及意義原理：a組成和功能完整的補體系統(tǒng)能使致敏羊紅細胞發(fā)生溶血；b. 羊紅細胞的溶血程度與補體的活性成正比；（S型）c. 在50%溶血附近（30% 70%之間），稍微改變補體量，溶血程度變化明顯，因此以50%溶血率來判定終點較 100%更為敏感，所以該試驗

22、稱為50%溶血試驗（CH50）。正常值：50 100U/ml意義：1補體量T :多見于急性炎癥感染、組織損傷、癌腫；2補體量見于補體消耗f:體內(nèi)有Ag、Ab反應(yīng)，如SLE、RA等；補體合成J：肝臟疾患； 補體先天性缺乏：具有遺傳性和家族史三、補體結(jié)合實驗的原理、結(jié)果判斷及評價原理：補體可與任何一組 AgAb復(fù)合物結(jié)合；一旦與某一 AgAb復(fù)合物結(jié)合后，便不 再與另一復(fù)合物結(jié)合。結(jié)果判斷：不溶血為陽性，即待測物中有相應(yīng)的Ab或Ag ；溶血為陰性，即待測物中無相應(yīng)的Ab或Ag.評價:優(yōu)點缺點1、該試驗既可測 Ag、又可測Ab ；2、Ag既可以是顆粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是塊狀物，因此檢

23、測Ag的范圍廣；3、可以用于病毒、立克次氏體、細菌等多種病原體的檢測（實際上是測Ag ）；4、比較敏感（0.05卩g/ml）、特異；5、結(jié)果判斷明顯：通過有無溶血來觀察，無 需特殊儀器檢測。1、 參與反應(yīng)的物質(zhì)多，影響因素也多； （反 應(yīng)體系中有Ag、Ab、C、羊紅細胞、溶血素）2、在正式試驗前需要找出幾種物質(zhì)間最恰當(dāng) 的比例，比較復(fù)雜。機體免疫功能檢測、人體免疫功能包括哪些組成部分?類型組成非特異性免疫1皮膚、黏膜的機械阻擋作用及局部分泌的抑菌、殺菌物質(zhì) 2吞噬細胞的吞噬作用3.NK（nature killer）細胞對病毒感染靶細胞的殺傷作用4血液、體液中的抗菌分子：補體、溶菌酶特異性免疫細

24、胞免疫：由TLC主導(dǎo)完成，其效應(yīng)物質(zhì)是致敏 TLc（CTL/Th1） 體液免疫：由BLC主導(dǎo)完成，其效應(yīng)物質(zhì)是 Ab二、實驗室中檢測人細胞免疫和體液免疫最常用哪些試驗，這些試驗的原理如 何？正常值應(yīng)為多少？一 .T細胞的計數(shù)（T細胞表面標志的檢測）（一）特異性抗原的檢測T細胞表面有一些特異的 CD抗原，根據(jù)這些不同的 CD抗原可鑒定不同的 T細胞群體 CD抗原：淋巴細胞群（簇）分化抗原：不同群淋巴細胞在分化成熟過程中，細胞表面 出現(xiàn)或消失的抗原分子 檢測T淋巴細胞表面CD抗原中：CD3+的數(shù)量表示成熟的總 T淋巴細胞的數(shù)量，CD4+的數(shù)量表示是Th細胞的數(shù)量，CD8+的數(shù)量表示是CTL/Ts細

25、胞的數(shù)量。CD4+/CD8+ > 1.5。免疫功能差或者免疫功能紊亂，該比值小于1（二）T細胞特異性受體（E受體）的檢測E 花環(huán)形成試驗 （Erythrocyte Rosette forming test）原理：T淋巴細胞表面含有綿羊紅細胞（SRBC）受體（CD2），當(dāng)T淋巴細胞與綿羊紅細胞相遇時，T細胞通過該受體吸附綿羊紅細胞而形成花環(huán)。正常值：Et花環(huán)形成試驗：60%80% （代表T細胞總數(shù)）Ea花環(huán)形成試驗：20%30% （活性強的T細胞）二、T細胞功能的檢測檢測T細胞功能的試驗有：（一）淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗1原理淋巴細胞在某些物質(zhì)刺激下，細胞增殖、分化（如細胞變大、胞漿增多、出現(xiàn)空泡

26、）DNA合成增加（核染色質(zhì)疏松，核仁出現(xiàn)），轉(zhuǎn)化成為淋巴母細胞。正常值60%80%（二）相關(guān)的細胞因子的檢測（在細胞因子章節(jié)介紹）（三）淋巴細胞的細胞毒性檢測細胞毒性T細胞（CTL）具有殺傷靶細胞的功能，它是評價機體細胞免疫水平的指標。檢測 這種殺傷作用的試驗稱為細胞毒試驗。CD8+CTL與靶細胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合通過脫顆粒，釋放穿孔素、顆粒酶，使靶細胞溶解、 凋亡。三、B細胞數(shù)量的檢測（一）B細胞表面識別抗原受體（BCR ）（Smlg, Surface membrane lg）的檢測I.Smlg 是B細胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟B淋巴細胞膜上，為 B細胞結(jié)構(gòu)蛋白。類型為：IgM、IgD型。

27、正常值：15%25%（二）B細胞表面抗原的檢測B細胞表面特有的 CD抗原有：CD19、CD21，用抗CD21的單抗（免疫熒光法、酶免 疫組化法）檢測外周血淋巴細胞，陽性細胞為B淋巴細胞，約占總淋巴細胞的10%15%。四、B細胞功能的檢測（一）血清中l(wèi)g的測定人的體液免疫功能正常（B細胞功能正常），應(yīng)反映在血清中有正常量的免疫球蛋白 檢測人免疫球蛋白常用方法：單向瓊脂擴散試驗、免疫比濁法正常值：IgG12.0mg/ml（7.616.60）IgM1.3mg/ml （0.402.20）IgA2.0mg/ml（0.703.50）（二）血型抗體效價的測定反映體內(nèi)IgM水平正常6月嬰兒抗 A >1

28、: 8,或抗 B > 1 : 4; 1歲后抗A>1:16，或抗B > 1 : 8如3歲以上抗A或抗B效價仍< 1 : 4，表示IgM缺乏，提示先天性體液免疫功能缺陷。（三）抗原刺激機體后抗體應(yīng)答反應(yīng)（體內(nèi)試驗）將抗原注射到體內(nèi)，一段時間后檢測相應(yīng)抗體效價，如抗體效價低，說明機體體液免疫功能差如用三聯(lián)傷寒菌苗 0.25ml注射，每周1次，連續(xù)3次，抗H應(yīng)為1 : 160，若低，表 示體液免疫應(yīng)答功能差。免疫復(fù)合物及檢測一、免疫復(fù)合物的含義及免疫復(fù)合物病的致病原因含義：immune complex,IC 它主要指 AgAb復(fù)合物及 AgAbC復(fù)合物兩種。致病原因：中等大小的

29、IC沉積在體內(nèi)，通過激活補體、激活血小板而致病。二、 免疫復(fù)合物檢測使用的標準品、出現(xiàn)的問題及WHO推薦的檢測方法 標準品：目前普遍應(yīng)用的標準品是 AHG 熱聚合人IgG （不是IC）。出現(xiàn)問題：到目前為止，所有檢測IC的試驗，還沒有另人滿意的標準化措施；在體外制備的IC還很不穩(wěn)定，因此用人工合成的復(fù)合物作為定量標準不適宜。WHO推薦的檢測方法：C1q結(jié)合試驗、膠固素試驗、類風(fēng)濕因子（RF）試驗、Raji細胞試驗自身免疫性疾病及檢測、AID的基本特征及常見的AID有哪些?1誘因可有可無。2、有一定的遺傳傾向。3、女性患者多見，發(fā)病率隨年齡增長而增加。4、 患者血清中可檢出高效價的自身抗體和（或

30、）自身致敏T淋巴細胞。一些自身抗體在自 身免疫病中呈現(xiàn)交叉重疊現(xiàn)象 ：即在同一種自身免疫病患者體內(nèi)可檢測到多種自身抗體， 而不同的自身免疫病也可存在同一種自身抗體。5、IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明顯。6、病損局部可發(fā)現(xiàn)有淋巴細胞、漿細胞、嗜酸性粒細胞浸潤及免疫復(fù)合物沉積。7、免疫抑制劑治療可取得一定療效。二、ANA的定義及ANAs的組成ANA原指抗細胞核抗原成分的自身抗體的總稱。ANA廣義地指抗細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總和。ANA所針對的靶抗原由細胞核擴展到整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架及細胞周期等。組成：抗DNA抗體：抗dsDNA、抗ssDNA抗體 抗組蛋白抗體

31、（AHA） :抗 H1、H2A、H2B、H3、H4 等抗ENA抗體：抗 Sm抗核糖核蛋白RNP丄、抗.§S-A、抗一一SS-B.等.抗非組蛋白抗體：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖細胞核抗原（PCNA ）、抗PL-7、抗- - - -i.-PL-12、 抗著絲點抗體等抗核仁抗體：抗 PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA 抗細胞其它成分抗體：抗高爾基體、抗中心體、抗線粒體、抗肌動蛋白、抗核層蛋白等三、各種AID檢測時的代表性自身抗體有哪些？為提高SLE的診斷準確率，可將抗Sm 抗體和抗dsDNA抗體同時檢測?？闺p鏈 DNA （ dsDNA）SLE抗組蛋白抗體（ANA）

32、-藥物性狼瘡抗可提取性核抗原"抗Sm抗體 SLE抗可提取性核抗原（ENA ）抗SS - A、SS - B抗體 干燥 綜合癥抗核糖核蛋白抗體混合性 結(jié)合性結(jié)締（MCTD）抗Scl-70抗體 （抗非組蛋白抗體）全身性硬化癥（PSS）抗Jo-1抗體肌炎和間質(zhì)性肺纖維化抗線粒體抗體（AMA）-原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）免疫缺陷病及其檢測（immunodeficiency disease, ID）一、在原發(fā)性免疫缺陷病中哪一種發(fā)生最多？原發(fā)性體液免疫缺陷病占原發(fā)性ID的5070%、懷疑體液免疫缺陷應(yīng)作哪些過篩試驗和確診試驗?過篩實驗確診實驗(1) 血清蛋白電泳 丙球定量： 丙球應(yīng)占 總蛋白的

33、15%，大于9.0mg/ml為正常；右小 于2.5mg/ml，應(yīng)考慮ID(2) 血型抗體效價測定 (反映IgM水平)正 常：抗A大于1:16，抗B大于1: 8,右3 歲以上，抗A或抗B仍小于1: 4，應(yīng)考慮ID(3) 血清抗鏈球菌溶血素抗體的測定(抗0)的測定一反應(yīng)IgG水平3歲以上應(yīng)大于100單位(4) 骨髓檢查：查漿細胞正常漿細胞應(yīng)大于 2%(1) 血清免疫球蛋白(G、M、A)測定：用單擴法或免疫比濁法：若IgG小于2.5mg/ml、IgA 缺乏、IgM 小于 0.20mg/ml，可 確診為無丙球蛋白血癥(2) 抗原刺激后抗體應(yīng)答反應(yīng)二聯(lián)傷寒菌苗試驗：正常人注射0.25ml，每周 1次，連

34、續(xù)3次，抗H應(yīng)為1 : 160,若低于1 : 40,表示體液免疫功能差(3) B細胞計數(shù)：(Smlg檢測)正常15%左右(4) T 細胞亞群測定：CD4/CD8(Th/Ts)正常(1 3.5)/1,若小于0.5,可確診為 AIDS三、懷疑細胞免疫缺陷應(yīng)作哪些過篩試驗和確診試驗?過篩實驗確診實驗(1)淋巴細胞絕對值測定正常大于(1)淋巴結(jié)活檢：2.5 X 109/L， 若 小于 1.5 X 109/L 為缺乏注意深皮質(zhì)區(qū)的淋巴 細胞數(shù)(2)遲發(fā)型超敏反應(yīng)皮試:OT皮試等(2) T淋巴細胞計數(shù)：(3)胸腺X線檢查：觀察胸骨是否發(fā)育不E花環(huán)實驗：正常Et 60 70%全CD3+TLC、CD4+TLC

35、、CD8+ TLC 計數(shù)(3) T細胞功能試驗淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗：正常60 70%附：0T實驗：OT 1:2000 0.1ml皮內(nèi)注射，48 72h觀察結(jié)果，紅腫硬結(jié)大于 0.5cm為陽性 該試驗設(shè)計是基于人群中96%的人均感染過結(jié)核菌陽性(直徑0.5cm):曾感染過結(jié)核菌，細胞免疫功能好 陰性(直徑 0.5cm):細胞免疫功能差(缺陷)或從未感染過結(jié)核菌 強陽性(直徑2.5cm)：表明現(xiàn)處于結(jié)核的活動超敏反應(yīng)的檢測-、I、W型超敏反應(yīng)皮試的原理 I型：I脫頌粒絆放吿勘舌性允團IJ.二刑備命介質(zhì)I新合金的斧質(zhì)I1型超敏反應(yīng)的發(fā)生機制致馭階段 激發(fā)和效應(yīng)階段b-nnuiiAaco當(dāng)變應(yīng)原再次進入致

36、敏者皮膚，與吸附在肥大細胞或/和嗜堿性粒細胞上的特 異IgE高變區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致肥大細胞或嗜堿性粒細胞脫顆粒，釋放生物活性介質(zhì)： 如組織胺、白三烯、激肽等。W型：用皮內(nèi)注射、皮膚斑貼等方法使變應(yīng)原進入已致敏機體，體內(nèi)致敏的T細胞CD4+Th1再次遇到相應(yīng)抗原后，釋放出大量細胞因子，如IL-2、IFN- 丫、TNF、IL-3、GM-CSF,（1）活化巨噬細胞及NK，增強吞噬細胞作用；2）吸引WBC到達Ag所在部位，促進吞噬；（3）促進T細胞增生和分泌細 胞因子，加重局部炎癥反應(yīng)，最后造成局部以單核細胞和淋巴細胞浸潤為主的炎 癥反應(yīng)。、比較I、W型超敏反應(yīng)皮試（抗原、時間、結(jié)果、意義）抗原時間結(jié)果意義

37、I型魚蝦、牛奶、花粉、青霉素 等。20 - 30分鐘 速發(fā)型（IgE）紅暈、紅斑、風(fēng) 團以及搔癢感判斷對所實驗的 變應(yīng)原是否過敏"型包內(nèi)寄生菌、微生物、寄生 蟲、組織抗原、化學(xué)物質(zhì)48-72小時 遲發(fā)型（Th1，CTL）紅腫、硬結(jié)或水 泡反應(yīng)或了解機體 的細胞免疫功能主要組織相容性復(fù)合體及其編碼分子重點：*HLA-I、II類分子的結(jié)構(gòu)、分布及意義組成結(jié)構(gòu)分布意義I類HLA-A、B、-C由一條a鏈和一條0鏈組成，a鏈的N端胞外區(qū)分為a 1、 a 2、口 3三個結(jié)構(gòu)區(qū)，其中a 1、 a 2構(gòu)成抗原結(jié)合槽，與處理后 的抗原肽結(jié)合形成 MHC-抗原 肽復(fù)合體。所有有核細胞膜上1、識別和提呈內(nèi)

38、 源性抗原肽2、對CTL的識別起限制性作用II類HLA-DR、 DP、 -DQ山一條讎和-條鏈組成，兩 條肽旌的胞外區(qū)分別有1、2和仏2兩個功能區(qū)，苗 1與 1共同形成抗原結(jié)合 槽?？乖岢始毎ㄈ?B細胞、巨噬細胞、 樹突狀細胞）及活 化的T細胞等1、識別和提呈 外源性抗原肽2、對Th的識別起限制性作用移植免疫學(xué)及其檢驗技術(shù)一、移植排斥反應(yīng)的類型及產(chǎn)生的原因和避免方法。排斥反應(yīng)的臨床分類分兩大類：宿主抗移植物反應(yīng)移植物抗宿主反應(yīng)''急性排斥反 應(yīng)慢性排斥反 應(yīng)丿慢性排斥反 應(yīng) 宿主抗移植物反應(yīng)k超急性排斥反 應(yīng)再次反應(yīng) -加速性排斥反 應(yīng)類型原因避免方法超急性排斥反應(yīng)受者體內(nèi)預(yù)存有抗供者細胞的抗體（針對HLA），抗體與供體細胞（HLA Ag ）結(jié)合，激 活補體，細胞破壞；補體活化產(chǎn)物使血小板凝 聚，