倍之速領(lǐng)跑糖型分析快速試劑盒

5倍之速，領(lǐng)跑糖型分析

——快速糖標記及分析試劑盒2017.03Asn297處有一個N-糖基化位點其變化取決于宿主細胞和表達條件結(jié)構(gòu)多樣性:Fuc,Gal,Neu5AC,GlcNAc,Man糖基化會影素:生物活性理化特性ADCC和CDC效應(yīng)IgG糖基化分析對其重要的研究領(lǐng)域:克隆篩選產(chǎn)品表征批量釋放研究IgG糖基化的意義Scanlanetal,PNAS105(2008)4081重組蛋白藥的生產(chǎn)過程過程開發(fā)表征研究及驗證細胞轉(zhuǎn)染/克隆篩選細胞培養(yǎng)克隆生產(chǎn)/生物反應(yīng)器

純化糖在細胞功能中具有特殊作用:巖藻糖:ADCC效應(yīng)N乙酰葡萄糖:ADCC&CDC效應(yīng)唾液酸:炎癥,ADCC效應(yīng),半衰期甘露糖:ADCC效應(yīng)質(zhì)量源于設(shè)計(QbD)了解糖基與功能間的關(guān)系(例如核心巖藻糖基化vsADCC)選擇正確糖基化的細胞珠恰當?shù)奶欠治龇椒纱_保產(chǎn)品具有正確的糖基化及活性

選擇合適的糖表征分析方法的重要性挑戰(zhàn):復(fù)雜性;結(jié)構(gòu)多樣性;無發(fā)光基團;大部分糖不帶電分析方法:HILIC色譜液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）毛細管電泳(CE)高壓液相色譜(HPLC)離子交換色譜正相色譜糖分析方法的選擇分離時間長分析過程復(fù)雜數(shù)據(jù)分析&糖型鑒定糖基分析和鑒定時間太長！生物制藥工業(yè)中糖分析面臨的挑戰(zhàn)貨號:B94499PTO糖分離專用膠磁珠GU參照品IgG標準品麥芽糖糊精標準品糖基釋放所需試劑

單管磁力架（0.2mL離心管）還包括預(yù)裝有熔融石英毛細管的卡盒試劑盒包括：SCIEX快速糖標記及分析試劑盒不含：氰基硼氫化鈉和糖苷酶AndrasGuttman博士世界頂級專家開發(fā)的分析技術(shù)背景簡介AndrasGuttman具有MTA-PELendulet糖組學(xué)方法轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域的教授職位，并領(lǐng)導(dǎo)著潘諾尼亞大學(xué)（匈牙利）生物分離學(xué)科的HorváthCsaba實驗室。

他的工作重點是研究生物醫(yī)學(xué)、細胞生物學(xué)及生物醫(yī)藥相關(guān)領(lǐng)域的基于毛細管電泳及CESI-MS技術(shù)的糖組學(xué)及糖蛋白組學(xué)分析。Guttman教授發(fā)表過290多篇SCI文章,寫過35本專業(yè)書的章節(jié),編輯過4本教材并持有23項專利。

他是多個國際研究組織的成員，十多個科學(xué)期刊的編委，個人獲得過眾多獎項并被匈牙利科學(xué)院的成員所認可。這種快速糖分析技術(shù)由于創(chuàng)新性地結(jié)合了磁珠法，加快了樣品前處理速度而榮獲2016生物工藝國際大會（BPI）“最佳技術(shù)應(yīng)用—分析”獎。使用創(chuàng)新的磁珠輔助的樣品處理方法，用96孔板1小時內(nèi)最多可標記96個樣品，而且不需要任何離心操作。超速糖分析：使用配有激光檢測器的PA800Plus生物制藥分析系統(tǒng)，對熒光標記的糖進行分離，每個樣品只需數(shù)分鐘。如待分析樣品數(shù)量少，可使用試劑盒中配備的單管磁力架手動完成前處理。同時開發(fā)了整合BiomekFXP自動化工作站對大量IgG樣品進行前處理的方案。該方案也適用于其他品牌的自動化產(chǎn)品?？焖偬菢擞浖胺蛛x試劑盒的特點APTS=8-AminoPyrene-1,3,6-TriSulfonicAcid使樣品帶上電荷&熒光簡單&高效一步還原-胺化熒光標記效率可達90%以上不選擇性標記均一定量分析只標記在還原末端(每個糖基連接一個APTS)高靈敏度激光檢測器(激發(fā)光波長488nm/發(fā)射光波長520nm)CE-LIF分析的帶電荷及熒光情況APTS標記N-糖基0.002.004.006.008.00Time(min)1.02.0RFUC)GluNAc(β1→4)nB)Glu(β1→4)nA)Glu(α1→4)n1234567891011234561123456APTS基于電荷/體積的毛細管電泳分離（CZE）

實驗步驟時間(分鐘)平行步驟準備磁珠&加入樣品2準備蛋白變性的溶液樣品的變性9準備蛋白變性的溶液PNGase酶切(A)20準備標記試劑糖的捕獲(B)2APTS標記(C)20清洗過量的APTS(D)6水洗(E)160MinsN-糖標記前處理只需60分鐘!CE-LIF糖基分析的快速樣品前處理IgG的N-糖經(jīng)糖苷酶釋放后用APTS標記

CE-LIF超快速、超高分辨率的糖分析快速分離后實時進行糖型鑒定...只有SCIEX毛細管電泳儀可提供精準的溫控系統(tǒng)可使GU值的重復(fù)性得到嚴格控制預(yù)裝好毛細管的卡盒（具有液體溫控系統(tǒng)）世界頂級儀器上開發(fā)的分析技術(shù)CESI8000Plus高效毛細管電泳和電噴霧離子化系統(tǒng)(w/LIF)全配置的PA800Plus

生物制藥分析系統(tǒng)?DB7.7110.0188.789.13FA2BG2S2基于GU數(shù)據(jù)庫的糖結(jié)構(gòu)解析IgG糖基結(jié)構(gòu)及對應(yīng)的GU值糖基結(jié)構(gòu)及名稱縮寫不同溫度下相同結(jié)構(gòu)的糖遷移行為分離溫度的重要性20oC50oCA.Guttman,M.Kerekgyarto,G.Jarvas,Anal.Chem87(2015)11630-11634.溫度梯度下毛細管電泳對糖的分離圖M.SzigetiandA.Guttman,Anal.Chem89(2017)InPress實時糖型鑒定與32karat10.0版本軟件兼容（win7）可從SCIEX網(wǎng)站下載安裝軟件及使用說明用戶可自行安裝具有編輯功能，可添加新的糖基結(jié)構(gòu)糖型數(shù)據(jù)庫專為32Karat軟件開發(fā)的GU數(shù)據(jù)庫

快速糖型鑒定報告：糖基分離和鑒定信息

快速糖型鑒定報告：序列中多個樣品糖基鑒定總結(jié)

主要糖基分析的RSD小于3%快速糖分析的重現(xiàn)性–校準峰面積（CorrectedArea）5分鐘完成糖基鑒定HILIC：親水作用色譜基于液-液分配的色譜，分析物按照極性增大的順序依次洗脫大多數(shù)液相柱生產(chǎn)商都生產(chǎn)HILIC柱HILIC與RPLC洗脫順相反HILIC分析的關(guān)鍵是保持固定相表面的薄水層來提供分配色譜。樣品基質(zhì)會干擾薄水層的分配而引起:洗脫時間變化峰型變差，損失分辨率破壞相穩(wěn)定:需要長平衡時間，柱子壽命變短推薦使用固相萃?。⊿PE）對樣品進行前處理清洗，可以減少這些影響。HILIC色譜分析法進行糖基分析樣品前處理只需1小時快速分離只需數(shù)分鐘高分辨分離&自動糖型鑒定

傳統(tǒng)方法獲得高分辨的糖分離數(shù)據(jù)需要較長的時間和極大的耐心SCIEX快速糖分析：速度是HILIC的5倍HILIC高效液相

傳統(tǒng)毛細管電泳SCIEX快速糖分析樣品前處理30分鐘到24小時4小時1小時分離時間17到45分鐘15到20分鐘5分鐘實時糖型鑒定——快速糖標記及分析0hrs24hrs12hrsHILIC5個樣品的分析時間Rapifluor45–70mingradient-UPLC2-AA;2-AB2DaySampleprep樣品前處理分離分析Timetodootherthings100mingradient-LCSCIEX快速糖分析：速度是HILIC的5倍各種糖基分析方法的比較FastGlycanProzymeGlyQ?ThermoGlycanAssureUPLCHILICLC-HILIC分辨率速度成本效益自動糖型鑒定沒有溫控沒有溫控系統(tǒng)實用性SCIEX公司N-CHO和FastGlycan兩種糖分析試劑盒的區(qū)別分辨率毛細管速度糖型鑒定N-CHO試劑盒需手動安裝中性涂層毛細管的卡盒手動鑒定快速糖分析試劑盒預(yù)裝好裸管的卡盒自動鑒定M.Szigeti,C.Lew,K.Roby,A.Guttman,FullyautomatedsamplepreparationwithultrafastN-glycosylationanalysisoftherapeuticantibodies,JALA21(2016)281-286槍頭盒蓋:減少乙腈蒸發(fā)96孔板:用于懸浮的96孔板疊加處樣品盤:PA800Plus樣品瓶96孔板振蕩器:孵育及混勻槍頭盒:加少量試劑試劑槽:乙腈和磁珠置于磁力架上的樣品盤:樣品前處理槍頭盒(P1000):加大量試劑樣品盤(24孔):單抗樣品試劑盤(24孔):糖苷酶和標記試劑全自動化工作站

12341234CE-LIF超快速IgG糖基分析

RawData

Shown.分離時間長快速的分離，單針循環(huán)時間短分析過程復(fù)雜快速樣品前處理預(yù)編輯的分離程序數(shù)據(jù)分析&糖型鑒定糖數(shù)據(jù)庫提供自動化糖型鑒定糖基分析和鑒定時間太長！生物制藥工業(yè)中糖分析面臨的挑戰(zhàn)價值定位：與HILIC相比,SCIEX的快速糖分析速度是其5倍，而且可以自動進行糖結(jié)構(gòu)鑒定，成本也只需HILIC的25%。更短的時間更優(yōu)的數(shù)據(jù)分辨率更高：分離和鑒