第7章細菌感染的檢查方法與防治原則

第七章

細菌感染的檢查與防治

感染性疾病的病因學診斷

確定感染的微生物，為臨床診斷提供根據。由于該診斷是通過確定感染的微生物而確立的，故稱微生物學診斷（病原學診斷）。關系到正確的治療、控制和預防。第一頁，共四十二頁。

檢查方法

微生物學(細菌的形態(tài)學檢查、分離培養(yǎng)和鑒定）

免疫學（查Ag或Ab）

分子生物學（查核酸）

第二頁，共四十二頁。

一、標本的采集和送檢原則無菌操作適當?shù)臉吮荆ㄗ⒁獠〕蹋┰缙诓杉杉p份血清做好標記盡快送檢（標本必須新鮮）

第一節(jié)

細菌感染的實驗室診斷第三頁，共四十二頁。第四頁，共四十二頁。（一）細菌形態(tài)學檢查

針對一些在形態(tài)與染色上具有特征的病原菌。

1）光學顯微鏡

2）染色法檢查

第五頁，共四十二頁。（二）細菌分離培養(yǎng)與鑒定主要內容：1、細菌分離培養(yǎng)—菌落大小、色素、溶血；2、涂片、染色、鏡檢。尤其用于在形態(tài)、排列和染色性方面無特征的某些病原菌的檢查。陽性率高于直接鏡檢，但時間長。

第六頁，共四十二頁。革蘭染色原理：細胞壁結構不同。

G+結構致密、肽聚糖層厚、乙醇不易透入；乙醇使胞壁脫水形成一道屏障，短暫阻止結晶紫-碘復合物從胞內滲出；G-疏松、肽聚糖層薄、外膜均含大量脂質，易被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞內結晶紫-碘復合物被溶解脫出而脫色。

第七頁，共四十二頁。革蘭染色實際意義---鑒別細菌選擇用藥研究細菌致病性其它染色有：單染色、抗酸染色、特殊染色等。第八頁，共四十二頁。

抗酸染色法第九頁，共四十二頁。特殊染色法：鞭毛染色

莢膜染色

負染色法第十頁，共四十二頁。2、生化反應

現(xiàn)有“程序控制的自動分析儀”。3、血清學鑒定：用已知Ab鑒定從標本中分離培養(yǎng)出的未知菌（玻片法簡便易行）。分群、分型第十一頁，共四十二頁。4、動物試驗用于：①分離鑒定病原菌；②測定細菌的毒力及產毒性

選用高度易感、健康等條件的動物。

第十二頁，共四十二頁。如：毒素-抗毒素中和試驗---小白鼠；鉤端螺旋體---幼齡豚鼠、金地鼠。

第十三頁，共四十二頁。5、藥物敏感試驗

指導臨床選擇用藥，及時治療和控制感染有重要意義。

藥敏試驗（紙片法）第十四頁，共四十二頁。

第十五頁，共四十二頁。6、自動微生物鑒定和藥敏分析系統(tǒng)：微生物編碼鑒定技術---數(shù)據庫微量培養(yǎng)自動監(jiān)測分析自動記錄藥敏結果第十六頁，共四十二頁。（三）細菌抗原的檢測

用已知Ab檢測未知抗原（Ag-Ab反應）。優(yōu)點--特異、靈敏、簡便方法：玻片凝集、協(xié)同凝集、間接血凝試驗、乳膠凝集、對流免疫、酶免疫技術、免疫熒光技術。第十七頁，共四十二頁。載體顆粒SPA、乳膠特異性Ab待檢Ag凝集協(xié)同凝集試驗示意圖常用的免疫學技術有—--協(xié)同凝集試驗乳膠凝集試驗第十八頁，共四十二頁。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA,間接法)

enzymessuchasperoxidasereactwithappropriatesubstratessuchas3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine),thiscausesachangeincolor.第十九頁，共四十二頁。對流免疫電泳第二十頁，共四十二頁。免疫擴散試驗第二十一頁，共四十二頁。（四）細菌核酸的檢測核酸雜交、PCR、16SrRNA基因測序、基因芯片等技術。

更特異、敏感、快速第二十二頁，共四十二頁。5’3’5’3’PCR3’5’3’5’5’5’3’5’3’5’3’3’5’3’5’5’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’第二十三頁，共四十二頁。檢測PCR產物

第二十四頁，共四十二頁。三、細菌感染的血清學診斷(serologicaldiagnosis)查Ab：檢測病人血液中由于細菌感染而產生的特異性抗體，輔助臨床診斷。

廣泛用于多種病原體的微生物診斷和流行病學調查。第二十五頁，共四十二頁。

雙份血清：早期（急性期）晚期（恢復期）結果：根據雙份血清中測到的抗體效價，若升高4倍或以上，有輔助診斷價值。

方法：凝集試驗，中和試驗，ELISA等。

第二十六頁，共四十二頁。第二十七頁，共四十二頁。致病菌的檢驗程序藥物敏感試驗標本直接涂片染色分離培養(yǎng)生化試驗血清學試驗動物試驗明確診斷初步診斷分子生物學技術其他檢測技術第二十八頁，共四十二頁。第二節(jié)細菌感染的特異性預防

一、人工主動免疫(artificialactiveimmunization)

（一）疫苗、類毒素

1、死疫苗—傷寒、霍亂等。

2、活疫苗—BCG、鼠疫等。

第二十九頁，共四十二頁。

疫苗接種第三十頁，共四十二頁。第三十一頁，共四十二頁。區(qū)別點死疫苗活疫苗制劑特點死，強毒株活，減毒株接種劑量與特點量大，2~3次量較小，1次保存及有效期易保存，約1年不易保存免疫效果較低，維持數(shù)月~2年較高，維持3~5年甚至更長死疫苗與活疫苗的比較第三十二頁，共四十二頁。3、亞單位疫苗(subunitvaccine)利用現(xiàn)代生物技術，除去細菌或病毒無關有害成分，分離提取純化對人體有保護性的抗原。如：肺炎鏈球菌、腦膜炎球菌的莢膜多糖疫苗，+佐劑即成。接種少量抗原可使人體產生良好免疫應答，且接種反應輕微。

第三十三頁，共四十二頁。優(yōu)點

a、去除引起副反應的物質；

b、因不含核酸可免去減毒活疫苗回復突變及滅活全疫苗發(fā)生感染性復活的可能；c、消除腫瘤病毒潛在的致癌作用；

d、可利用化學試劑分解病毒體。

第三十四頁，共四十二頁。4、基因工程疫苗本質上是亞單位疫苗如：含宋內志賀菌表面抗原質粒的傷寒沙門菌Ty21a優(yōu)點：安全、經濟、可批量生產；缺點：抗原的回收純化困難。第三十五頁，共四十二頁。5、重組載體疫苗將抗原表位的目的基因片段轉入減毒的病毒或細菌。形式：整合于病毒、細菌基因組或質粒本質：活疫苗第三十六頁，共四十二頁。6、核酸疫苗（DNAVaccine）第三十七頁，共四十二頁。核酸疫苗原理：將病原體的保護性抗原基因與質粒重組，重組體注入機體，使機體持續(xù)表達該抗原，誘導體液和細胞免疫。優(yōu)點：

a、制備簡便、成本低；

b、便于貯藏和運輸；

c、免疫應答持久。

第三十八頁，共四十二頁。核酸疫苗缺點：安全性問題a、人們擔心外源DNA整合到宿主染色體中而激活癌基因和影響抑癌基因的表達，導致細胞的惡性轉化。b、可能誘導自身免疫性疾病。第三十九頁，共四十二頁。（二）類毒素概念：可誘導機體建立特異性抗毒素免疫。

+吸附劑（佐劑）如：白喉-百日咳-