胡蘿卜素含量測定

1、食物中胡蘿卜素的測定方法Method for determination of carotene in foods1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食物中胡蘿卜素的測定方法紙層析法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡蘿卜素的測定，其最 小檢出限為口 go2原理以丙酮和石油醚提取食物中的胡蘿卜素及其他植物色素，以石油醚為展開劑進行 紙層析，胡蘿卜素極性最小，移動速度最快，從而與其他色紗分離；剪下含胡蘿 卜素的區(qū)帶，洗脫后于450nm波長下定量測定。3試劑石油醚（沸程3060。0 :同時是展開劑。丙酮：分析純。丙酮-石油醚混合液：3： 7（V/V ） o無水硫酸鈉：分析純。5%硫酸

2、鈉溶液。1： 1氫氧化鉀溶液：取50g氫氧化鉀溶于50mL水。無水乙醇：需經(jīng)脫醛處理。B-胡蘿【、素標(biāo)準(zhǔn)溶液：取5mgB-胡蘿【、素標(biāo)準(zhǔn)品，溶于10mL三氯甲烷中， 濃度約為500 g/mL，準(zhǔn)確測其濃度。取標(biāo)準(zhǔn)溶液UL,加正己烷，混勻，測吸光值，比色杯厚度1cm,以正己烷為空 白，入射光波長450nm，平行測定三份，取均值。計算公式：(1)$式中：X1胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mg/mL；A吸光值；EB -胡蘿卜素在正己烷溶液中，入射光波長450nm，比色杯厚度為1cm，溶液濃度為1ppm的吸光系數(shù)，為；將ppm,換算成mg/mL；測定過程中稀釋倍數(shù)的換算。B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液：將已標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)

3、液用石油醚準(zhǔn)確稀釋后，每毫升溶 液相當(dāng)50ug，避光保存于冰箱中。4儀器和設(shè)備實驗室常用設(shè)備。玻璃層析缸。分光光度計。;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：具150mL球形瓶。恒溫水浴鍋。皂化回餾裝置。點樣器或微量注射器。新華濾紙：定性，快速或中速，101號。5樣品的采集和處理糧食：樣品用水洗三次，置60笆烤箱中烤干，磨粉，儲于塑料瓶內(nèi)，放一小包 樟腦精，蓋緊瓶塞保存，備用。蔬菜與其他植物性食物：取可食部用水沖洗三次后，用紗布吸去水滴，切碎， 用勻漿器制成勻漿，貯于塑料瓶內(nèi)，冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?測定步驟（以下步驟需在避光條件下進行）樣品提取取適量樣品，相當(dāng)于原樣15g（含胡蘿卜素約2080g）的勻漿，糧食樣品 視其胡蘿

4、、素含量而定，置100mL帶塞錐形瓶中，加入丙酮20mL，石油醚5mL， 振搖1min，靜置5min，將提取液轉(zhuǎn)入盛有100mL5%硫酸鈉溶液的分液漏斗中， 再于錐形瓶中加入10mL丙酮-石油醚混合液，振搖1min，靜置5min，將提取液 并入分液漏斗中。如此提取23次，直至提取液無色為止。植物油和高脂肪樣品：需先皂化，取適量樣品（V10g=，加脫醛乙醇30mL， 再加10mL1： 1氫氧化鉀溶液，回流加熱30min，然后用冰水使之迅速冷卻，皂 化后樣品用石油醚提取，直至提取液無色為止。洗滌將提取液（）靜置分層，棄去下層水溶液，反復(fù)用5%硫酸鈉溶液振搖洗滌，每 次約15，直至下層水溶液清亮為止

5、。將皂化后樣品提取液（）用水洗滌至中性。將或的石油醚提取液通過盛有10g無水硫酸鈉的小漏斗，漏入球形瓶，用少量 石油醚分?jǐn)?shù)次洗凈分液漏斗和無水硫酸鈉層內(nèi)的色素，洗滌液并入球形瓶內(nèi)。濃縮與定容將上述球形瓶內(nèi)的提取液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓蒸發(fā)，水浴溫度為60笆，蒸發(fā)至 約1mL時，取下球形瓶，用氮氣吹干，立即加入石油醚定容，備層析用。紙層析點樣：在18cmX30cm濾紙下端距底邊4cm處作一基線，在基線上取A、B、C、 D四點（如圖1所示），吸取濃縮液在AB和CD間迅速點樣。圖1展開：待紙上所點樣液自然揮發(fā)干后，將濾紙卷成圓筒狀，置于預(yù)先用石油醚 飽和的層析缸中，進行上行展開。洗脫：待胡蘿卜素與其他色

6、素完全分開后，取出濾紙，自然揮發(fā)干石油醚，將 位于展開劑前沿的胡蘿【、素層析帶剪下，立即放入盛有5mL石油醚的具塞試管 中，用力振搖，使胡蘿【、素完全溶入溶劑中。比色測定用1cm比色杯，以石油醚調(diào)節(jié)零點，于450nm波長下，測吸光度，以其值從標(biāo)準(zhǔn) 曲線上查出B-胡蘿卜素的含量，供計算時使用。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制取-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液（濃度為50g/mL）分別置于100mL具塞錐形瓶中，按樣品測定步驟進行操作，點樣體積為，標(biāo)準(zhǔn)曲線各點胡蘿卜素含量 依次為ugo為測定低含量樣品，可在0至ng間加做幾點，以胡蘿卜素含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖2）。圖2實測圖例胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖7計算（2

7、）式中：X,樣品中胡蘿卜素的含量，以B-胡蘿卜素計，mg/100g； 乙%在標(biāo)準(zhǔn)曲線上所查得的胡蘿卜素的含量，口g;點樣體積，mL；樣品石油醚提取液濃縮后的定容體積，mL；樣品質(zhì)量，g。8結(jié)果的允許差同一實驗室平行測定或重復(fù)測定結(jié)果的相對偏差絕對值、應(yīng)用范圍該方法用于預(yù)混料中B胡蘿卜素的定量分析2、原理樣品被KOH水溶液皂化，8胡蘿卜素被乙醇和環(huán)己烷萃取出來，用乙醇和異丙醇稀釋后， 用分光光度計測定B一胡蘿卜素含量。3、分析過程3mol/L的KOH溶液：將溶于水，然后定容到樣本溶液配制精確稱取含大約10mg8胡蘿卜素到錐形瓶中。加入20ml 3mol/L的KOH溶液，在65笆 （超聲或水浴中震

8、搖）15min，冷卻后加入環(huán)己烷和無水乙醇，用磁攪拌子以700轉(zhuǎn)/分的速 度攪拌至少5min，（或強烈震搖10min,使均勻），取該溶液1ml用異丙醇定容到10ml在最大 波長452nm測定吸光度，用異丙醇做空白。4、計算結(jié)果A （吸光度）X稀釋量X（校正因子）取樣量（mg）X250A （吸光度）X50 （環(huán)己烷量）X10 （異丙醇定容量）X（校正因子） 取樣量（mg）X2501%B胡蘿卜素取一GB/食物中胡蘿卜素的測定本方法檢出限：高效液相色譜法為kg（L），線性范圍為0100mg/L；紙層析法為ug， 線性范圍1 ng20ng。第一法高效液相色譜法2.原理試樣中的B-胡蘿、素，用石油醚丙酮

9、（80 20）混合液提取，經(jīng)三氧化二鋁柱純化， 然后以高效液相色譜法測定，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。3試劑石油醚：沸程30C60C。甲醇：色譜純。丙醇。己烷。四氫吠喃。;三氯甲烷。乙腈：色譜純。三氧化二鋁：層析用，100-200目，140C活化2h，取出放入干燥器備用。含碘異辛烷溶液：精確稱取碘1mg，用異辛烷溶解并稀釋至25mL，搖勻備用。a-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取1mga-胡蘿卜素，加入少量三氯甲烷溶解，然后用 石油醚溶解并洗滌燒杯數(shù)次，溶液轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，用石油醚定容，濃度為40ug/mL， 放入-18C儲存?zhèn)溆?。B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶：精確稱取B-胡蘿卜素于燒杯中，先用少

10、量三氯甲烷溶解，再用 石油醚溶解并洗滌燒杯數(shù)次，溶液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，用石油醚定容，濃度為250 ug/mL。 -18C儲存?zhèn)溆?。二個月內(nèi)穩(wěn)定。根據(jù)所需濃度取一定量的B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)液用移動相稀 釋成 100 u g/mL。B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液：分別吸取B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL容量瓶中，各加移動相至刻度，搖勻后，即得B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)系列，分別含B-胡蘿卜素5、10、20、30、40、50ug/mL。B-胡蘿卜素異構(gòu)體：精確稱取B-胡蘿卜素于10mL容量瓶中，充入氮氣，快速加入含 碘異辛烷溶液10mL，蓋上塞子，在距20W的熒光燈30cm處照射5分鐘，然后在避光處用真空泵抽去溶劑，用

11、少量三氯甲烷溶解結(jié)晶，再用石油醚溶解并定容至刻度，濃度為150U g/mL, -18C保存。4儀器高效液相色譜儀離心機旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀5分析步驟試樣提取淀粉類食品：稱取試樣于25mL帶塞量筒中（如果試樣中B-胡蘿卜素量少，取樣量可 以多些），用石油醚或石油醚丙酮（80 20）混合液振搖提取，吸取上層黃色液體并轉(zhuǎn)入 蒸發(fā)器中，重復(fù)提取直至提取液無色。合并提取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)至干（水浴溫度 為 30C）。液體食品：吸取試樣于250mL分液漏斗中，加入石油醚 丙酮（80 20） 20mL提取，然 后靜置分層，將下層水溶液放入另一分液漏斗中再提取，直至提取液無色為止。合并提取 液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干

12、（水浴溫度為40C）。油類食品：稱取試樣于25mL帶塞量筒中，加入石油醚 丙酮（80 20）提取。反復(fù)提取， 直至上層提取液無色。合并提取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干。純化將，的試樣提取液殘渣，用少量石油醚溶解，然后進行氧化鋁層析。氧化鋁柱 為（內(nèi)徑）X4cm （高）。先用洗脫液丙酮石油醚（5： 95）洗氧化鋁柱，然后再加入溶解 試樣提取液的溶液，用丙酮 石油醚（5： 95）洗脫B-胡蘿卜素，控制流速為20滴/min， 收集于10mL容量瓶中，用洗脫液定容至刻度。用微孔濾膜過濾，濾液作HPLC分析用。測定參考條件：色譜柱：Spherisorb C18 柱 mmX150mm。流速：min波長：448

13、nm試樣測定：吸取“”項已純化的溶液20ul依法操作，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得或回歸求得所含 B-胡蘿卜素的量。標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別進標(biāo)準(zhǔn)使用液20ul，進行HPLC分析，以峰面積對B-胡蘿卜素濃度畫 標(biāo)準(zhǔn)曲線。6結(jié)果計算見式（1）。VXC 1X=X1000X （1）m 1000X1000式中：X一試樣中B-胡蘿卜素的含量，單位為克每千克或克每升（g/kg或g/l）；V 一定容后的體積，單位為毫升（mL）；#C 一試樣中B-胡蘿卜素的量（在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得），單位為微克每毫升（ug/mL）；m試樣的量，單位為克或毫升（g或mL）；計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不

14、得超過算術(shù)平均值的10%。第二法紙層析法8原理試樣經(jīng)過皂化后，用石油醚提取食品中的胡蘿卜素及其他植物色素，以石油醚為展開 劑進行紙層析，胡蘿卜素極性最小，移動速度最快，從而與其他色素分離，剪下含胡蘿卜素的區(qū)帶，洗脫后于450nm波長下定量測定。9試劑石油醚（沸程30笆60笆）：同時是展開劑。氫氧化鉀溶液（1 1）：取50g氫氧化鉀溶于50mL水。;無水乙醇：不得含有醛類物質(zhì)。檢驗方法：銀氨液：加濃氨水于5%硝酸銀液中，直至氧化銀沉淀溶解，加入匚氫氧化鈉溶液數(shù) 滴，如發(fā)生沉淀，再加濃氨水使之溶解。銀鏡反應(yīng)：加2mL銀氨液于試管內(nèi)，加入幾滴乙醇搖勻，加入少許mol/L氫氧化鈉 溶液加熱。如乙醇中無

15、醛，則沒有銀沉淀，否則有銀鏡反應(yīng)。脫醛方法：取2g硝酸銀溶于少量水中，取4g氫氧化鈉溶于溫乙醇中，將兩者傾入 1L乙醇中，暗處放置兩天（不時搖動，促進反應(yīng)），過濾，濾液傾入蒸餾瓶中蒸餾，棄去 初蒸的50mL。乙醇中含醛較多時，硝酸銀用量適當(dāng)增加。無水硫酸鈉B-胡蘿、素標(biāo)準(zhǔn)溶液B-胡蘿、素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取B-胡蘿、素標(biāo)準(zhǔn)品，溶于三氯甲烷中，濃度約為 500 u g/mL，準(zhǔn)確測其濃度。標(biāo)定濃度的方法如下：取標(biāo)準(zhǔn)貯備液UL，加正己烷，混勻。測其吸光度值，比色杯厚度為1cm以正己烷為 空白，入射光波長450nm，平行測定三份，取均值。按式（1）計算溶液濃度：A%X=X （2）E式中：X 胡蘿卜素

16、標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為微克每毫升（ug/mL）；A 吸光度值；E -B胡蘿卜素在正己烷溶液中，入射光波長450nm,比色杯厚度1cm，溶液濃度為 1mg/L的吸光系數(shù)，為；測定過程中稀釋倍數(shù)的換算。B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液：將已標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)液用石油醚準(zhǔn)確稀釋10倍，使每毫升溶液 相當(dāng)于50ug，避光保存于冰箱中。警告：通常標(biāo)準(zhǔn)品不能全溶解于有機溶劑中，必要時應(yīng)先將標(biāo)準(zhǔn)品皂化，再用有機溶 劑提取，用蒸餾水洗滌至中性后，濃縮定容，再進行標(biāo)定。由于胡蘿卜素很容易分解。所 以每次使用前，所用標(biāo)準(zhǔn)品均需標(biāo)定，在測定試樣時需帶標(biāo)準(zhǔn)品同步操作。10儀器,實驗室常用設(shè)備玻璃層析缸。分光光度計。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：具配套15

17、0mL球形瓶。恒溫水浴鍋。皂化回餾裝置。點樣器或微量注射器。濾紙：18cmX30cm。定性，快速或中速。11分析步驟（以下步驟需在避光條件下進行）試樣預(yù)處理皂化取適量試樣，相當(dāng)于原樣1 g5g （含胡蘿卜素約20ug80ug）勻漿，糧食試樣視 其胡蘿卜素含量而定，植物油和高脂肪試樣取樣量不超過10g。置100mL帶塞錐形瓶中，加 脫醛乙醇30mL，再加10mL （ 1 1）氫氧化鉀溶液，回流加熱30min，然后用冰水使之迅速 冷卻。皂化后試樣用石油醚提取，直至提取液無色為止，每次提取石油醚用量為1 mL 5 25mL。洗滌將皂化后試樣提取液用水洗滌至中性。將提取液通過盛有10g無水硫酸鈉的小漏

18、斗， 漏入球形瓶，用少量石油醚分?jǐn)?shù)次洗凈分液漏斗和無水硫酸鈉層內(nèi)的色素，洗滌液并入球 形瓶內(nèi)。濃縮與定容將上述球形瓶內(nèi)的提取液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓蒸發(fā)，水浴溫度為60笆，蒸發(fā)至約1mL 時，取下球形瓶，用氮氣吹干，立即加入石油醚定容，備層析用。紙層析點樣：在18cmX30cm濾紙下端距底邊4cm處做一基線，在基線上取A、B、C、D四點， 吸取濃縮液（）在AB和CD間迅速點樣。展開：待紙上所點樣液自然揮發(fā)干后，將濾紙卷成圓筒狀，置于預(yù)先用石油醚飽和的 層析缸中，進行上行展開。洗脫：待胡蘿卜素與其他色素完全分開后，取出濾紙，自然揮發(fā)干石油醚，將位于展 開劑前沿的胡蘿卜素層析帶剪下，立即放入盛有5mL

19、石油醚的具塞試管中，用力振搖，使 胡蘿卜素完全溶入試劑中。測定用1cm比色杯，以石油醚調(diào)零點，于450nm波長下，測吸光度值。以其值從標(biāo)準(zhǔn)曲線 上查出B-胡蘿、素的含量，供計算時使用。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制取B-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液（濃度為50ug/mL），分別置于100mL具塞錐形瓶中，按試樣分析步驟進行預(yù)處理和紙層析，點樣體積為，標(biāo)準(zhǔn)曲線各點含量依次為ug。為測定低含量試樣，可在0至ug間加做幾點，以B-胡蘿、素含量為橫坐標(biāo)，以吸光 度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。12結(jié)果計算試樣中胡蘿卜素含量按公式（3）計算。V2 100X= c XX （3）V1 m式中：X-試樣中胡蘿卜素的含量，以B胡蘿卜素計，單位

20、為微克每百克（ug/100g）；c 在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的胡蘿卜素含量，單位為微克（ug）；V1-點樣體積，單位為毫升（mL）；V2試樣提取液濃縮后的定容體積，單位為毫升（mL）；m 試樣質(zhì)量，單位為克（g）。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。%13精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。表2表2常見蔬菜中類胡蘿卜素各組分含量（1）mg/kg|食物總胡蘿卜素葉黃素玉米黃素隱黃質(zhì)13-c-B-Ca-Ct -B -C9-c-B -C蕃茄紅素 空心菜菠菜小白菜韭菜胡蘿卜菠菜香菜茴香南瓜白薯本文來自:大眾醫(yī)藥網(wǎng)胡蘿卜素和番茄紅素的提取分離和測定摘要：本文綜述了從番茄醬中提取

21、分離8胡蘿卜素和番茄紅素的原理及方法，并且介紹了B一胡蘿、素和番茄紅素的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)以及生理功能。同時就該實驗做了一定的分析。關(guān)鍵詞：番茄紅素，B一胡蘿卜素，分離文獻綜述選題的意義多種研究表明：攝入富含類胡蘿卜素的果蔬能降低人群某些癌癥的發(fā)病率。番茄紅素是人類血漿 和組織中重要的類胡蘿卜素，是類胡蘿b素中最有效的單線態(tài)氧淬滅劑，在體內(nèi)具有抗氧化、預(yù)防和抑制 癌癥、抑制誘變、保護心血管、防治白內(nèi)障、調(diào)節(jié)機體免疫力等功能。番茄紅素的抗氧化作用包括猝滅單 線態(tài)氧、消除自由基以及與其它氧化劑協(xié)同抗氧化作用等。其猝滅單線態(tài)氧的能力最強，是目前抗氧化劑 B一胡蘿卜素的23倍，維生素E的100倍，番茄

22、紅素可以通過猝滅單線態(tài)氧預(yù)防脂類過氧化反應(yīng)，保護 細胞免受自由基的損傷。國內(nèi)外研究的現(xiàn)狀1、番茄紅素的國內(nèi)外研究歷史1873年，Hartsen最早從Tamus communis L-中分離得到深紅色的番茄紅素結(jié)晶。1875年，Millardat從番茄中獲得一種含有番茄紅素的粗提物，當(dāng)時命名為Solanorubin。1913年，Dugger根據(jù)它對生長條件的影響，又把它命名為lycoperison。而Schunck （1930年）的lycopene名稱（中文即番茄紅素）一直沿用至今。國外對番茄紅素的研究現(xiàn)狀1989年，Masic發(fā)現(xiàn)番茄紅素在所有類胡蘿卜素中對單線態(tài)氧的猝滅速度最高；1991年，

23、Campbell 發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝臟中番茄紅素含量較低；1994年，F(xiàn)ranceschi發(fā)現(xiàn)消化道癌的發(fā)生與番茄紅素的攝入有 關(guān)。隨后，對番茄紅素的功能的研究成為一大熱點。1995年2003年與番茄紅素有關(guān)的報道達800多篇， 內(nèi)容涉及番茄紅素的吸收、運輸及新陳代謝的動力學(xué)；番茄紅素與癌癥、心臟病及其他多種疾病的關(guān)系； 番茄紅素的提取、測定及番茄產(chǎn)品的開發(fā)研究等。國內(nèi)對番茄紅素的研究現(xiàn)狀對番茄紅素的研究在2000年以前鮮有報道，近三年驟然升溫，出現(xiàn)了大量綜述類文章，內(nèi)容包括： 番茄紅素的性質(zhì)和提取方法；番茄紅素及其研究進展；番茄紅素的保健功能的研究現(xiàn)狀；番茄紅素生理活 性的研究進展；番茄紅素及

24、其生產(chǎn)應(yīng)用研究；番茄紅素的生產(chǎn)工藝研究進展；番茄紅素分離與分析的研究 進展等。2類胡蘿卜素提取分離的國內(nèi)外研究進展8胡蘿卜素是類胡蘿卜素之一，也是橘黃色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在 也是最穩(wěn)定的天然色素自1831年Wachenroder從胡蘿卜根中分離結(jié)出晶狀碳水化合物類的色素并以“胡蘿、素 命名至今，已有不少國內(nèi)外學(xué)者對類胡蘿卜素進行了研究。鄧宇等對番茄中番茄紅素的提取進行了初步研究，認(rèn)為用氯仿作提取溶劑、當(dāng)料液質(zhì)量比為1： 5,浸提時 間為7h,浸提溫度為35C時,浸取效果最好。適當(dāng)增加浸提次數(shù)及攪拌速度有利于提高番茄紅素的提取量。 吉宏武等人以活化的硅鎂型吸附劑與賽力特硅藻土（1

25、:1）作填料，以已烷-丙酮-甲醇不同組成與比例的流動 相洗脫，柱溫20C為條件，采用混合溶劑提取和自動柱層析分離方法和正已烷-丙酮-乙醇-甲苯（10:7:6:7） 與40%甲醇氫氧化鉀浸提皂化12h的制備方法，制備了 4種類胡蘿卜素一一8-胡蘿卜素、葉黃質(zhì)、堇黃質(zhì)、 新黃質(zhì)。類胡蘿卜素在硅膠G薄層上分離時，由于不同類胡蘿卜素的末端基團的不同，因此具有不同的色譜 行為。彭光華等人用薄層色普法對枸杞中的類胡蘿卜素進行了分離獲得了玉米黃素、8-隱黃素和8-胡蘿 卜素。胡曉丹等人對金盞菊花類胡蘿卜素的最佳提取工藝進行了研究，結(jié)果表明，用石油醚：丙酮（1： 1、V/V）、料液比為1： 25（g/ml）、

26、45C提取1小時，反復(fù)4次，效果最佳。從所報道的 文獻分析得出，類胡蘿卜素的提取多采用有機溶劑法。隨著色譜法的發(fā)展，國外科技工作者開始采用HPLC技術(shù)來分析類胡蘿卜素，但是對其定量測定未做深入研究，分離制備方面的報道也較少。實驗儀器設(shè)備及試劑1、試劑及原料亨氏番茄醬、95%乙醇（）、二氯甲烷（）、石油醚（60-90。0、氯仿（）、中性氧 化鋁（）、氯化鈉（）、無水硫酸鈉（）、蘇丹紅1（）2、儀器回流裝置、恒溫磁力攪拌器、層析柱（15cm左右內(nèi)徑為、分析天平，移液管、容量瓶、 VIS-7220分光光度計研究的方法實驗原理：番茄紅素結(jié)構(gòu)化學(xué)式如下：8-胡蘿卜素結(jié)構(gòu)化學(xué)式如下:類胡蘿卜素為多烯類色素

27、，不溶于水而溶于脂溶性有機溶劑。本實驗先用較高極性的溶劑提取較高極性的色素，同時脫去樣品中的存在的少量水分；再用較低極性的溶劑補充提取較低極性的色素。因為低極性溶劑不與水混溶，故先除去水分后才能有效地從組織中較完全地萃取類胡蘿卜素。根據(jù)番茄紅素與8-胡蘿卜素極性的差別，用柱層析可以將它們分離。番茄紅素在不同的有機溶劑里均有類似的吸收峰，最大吸收峰的波長在500nm附近，將分離 后的樣品溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，在最大吸收峰處用分光光度計測定溶液的吸光度；由于番茄紅素標(biāo)樣的不穩(wěn) 定性，在此以蘇丹紅代替番茄紅素作為標(biāo)準(zhǔn)品，用氯仿作為溶劑及參比液，在500nm附近測定蘇丹紅的系 列吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；用

28、番茄紅素的提取液的吸光度值在此標(biāo)準(zhǔn)曲線上查取相應(yīng)濃度，以此來表征番 茄紅素的濃度。通過換算得到番茄醬中該色素的含量。8-胡蘿卜素的含量采用色價的測定及計算方法。色價是色素在商業(yè)上的濃度計量方式，特 點是不需要校準(zhǔn)樣，也不需作標(biāo)準(zhǔn)曲線，簡單快速。取樣品m克，在天平上準(zhǔn)確稱重，用Vml石油醚溶解， 以石油醚作參比液，在入max下測量樣品溶液的吸光度A，樣品色價E按下式計算：試驗方法：1、混合色素的提取稱取新鮮番茄漿110g于50m l干燥的圓底燒瓶中，加極性的試劑（建議用95%乙醇）A 20ml，搖勻，裝上回流冷凝管及恒溫磁力攪拌器，在相應(yīng)溫度的水浴中加熱，回流5分鐘，冷卻后抽濾， 濾液直接進入一

29、個的50ml錐形瓶中。殘渣轉(zhuǎn)入原50ml圓底燒瓶中瓶內(nèi)，加入15ml低極性溶劑（建議用二 氯甲烷）A，在相應(yīng)溫度的水浴上回流5分鐘，冷卻，混合物常壓過濾，濾液直接濾入以上50ml錐形瓶 中，再加5ml低極性溶劑洗滌殘渣，過濾。合并高極性提取液和兩次低極性提取液，倒入100ml分液漏斗 中，加4ml飽和氯化鈉溶液2，振蕩萃取，靜置分層。分出較深色有機相后，使其流經(jīng)一個在頸部裝有疏 松棉花且在棉花上鋪有6g無水硫酸鈉的漏斗，以除去其中的微量水份。再用5ml低極性溶劑洗滌干燥劑， 合并干燥后所得的溶液于一干燥的50ml圓底燒瓶中。水浴蒸餾溶液，蒸出大部分溶劑后，在通風(fēng)櫥內(nèi)直 接水浴加熱圓底燒瓶3，并

30、用洗耳球不斷向圓底燒瓶吹氣，直到完全蒸干為止備用。2、層析柱的制備取一支長15cm左右內(nèi)徑為的干燥的層析柱，將其垂直固定于鐵架上，底部鋪上少量棉花， 打開活塞。稱取8g氧化鋁小心傾入層析柱中，在氧化鋁上鋪一層棉花4。然后向柱內(nèi)加入15ml石油醚， 讓溶劑浸潤并流過層析柱，注意柱頂部溶劑不能干涸。待溶劑液面剛好與氧化鋁表面相切時，關(guān)閉活塞， 備用。3、柱層析分離向蒸干的粗樣品中加入2ml苯使其溶解。用一長頸滴管取樣，小心滴入層析柱內(nèi)，注意產(chǎn) 品不能接觸柱壁5。打開活塞，讓溶液自然流下，待液面剛好與柱頂氧化鋁表面相切時，加入2 ml石油醚，用50ml干燥的錐形瓶6接收滴出的溶液。待溶劑液面與氧化鋁

31、表面相切時，再加入8ml或更多的石 油醚，至滴出的溶液無色，關(guān)閉活塞，收集紅色的番茄紅素溶液（a）；打開活塞，再往層析柱中先后加入 2ml及8ml的氯仿，洗至滴出的溶液無色，用另一 50ml干燥的錐形瓶6接收，關(guān)閉活塞，收集黃色的 8 -胡蘿卜素溶液（b）。然后用相應(yīng)溫度的水浴蒸干（a）、（b），差重法分別稱出相應(yīng)濃縮物的重量Wa、Wb（精 確到。4、蘇丹紅（II）工作曲線用分析天平準(zhǔn)確稱取約蘇丹紅（II）于小燒杯中，加入少量溶劑（建議用氯仿）B在通風(fēng)櫥內(nèi)水浴加熱攪拌溶解，待溶液冷卻至室溫后全部轉(zhuǎn)移到100ml的容量瓶中，用溶劑（建議用氯仿）稀釋定容至刻度線，可得到50 u g/ml的標(biāo)準(zhǔn)液。然后用10ml的移液管分別移取該溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于五個25ml的容量瓶中，然后加入溶劑將其稀釋定容至刻度，它們濃度分別為4ug/ml、8ug/ml、12ug/ml、16ug / ml、20 u g/ml。用該溶劑作參比溶液，在波長為510nm下分別測其吸光度，以吸光度對濃度作圖，可得到吸光度對濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖及關(guān)系式。5、番茄紅素及8-胡蘿卜素含量的