細(xì)菌個(gè)數(shù)的測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)原理七工對(duì)返排液殺菌效果的測(cè)試方法:推測(cè)返排液主要的細(xì)菌為硫酸鹽還原菌、鐵細(xì)菌和腐生菌。通過(guò)加入不同殺菌劑，測(cè)量加入前后細(xì)菌含量，得出不同殺菌劑的殺菌率，優(yōu)選效果最好的殺菌劑。實(shí)驗(yàn)儀器：1）硫酸鹽還原菌（SRB）測(cè)試瓶:2）鐵細(xì)菌（IB）測(cè)試瓶：3）腐生菌（TGB）測(cè)試瓶：4）注射器：1ml：5）恒溫培養(yǎng)箱：6）電熱消毒器。實(shí)驗(yàn)步驟：1）將測(cè)試瓶排成兩組，并編號(hào)；這是二次重復(fù)法，三次重復(fù)法方法類似，不過(guò)要把測(cè)試瓶分為三組。2）用120C消毒20min的無(wú)菌注射器取1.0ml水樣注入第一組1號(hào)瓶?jī)?nèi)，充分震蕩：3）用另一只無(wú)菌注射器從第一組1號(hào)瓶中取1.0ml水樣注入第一組2號(hào)瓶：4）再更換無(wú)

2、菌注射器從第一組2號(hào)瓶取1.0ml水樣注入第一組3號(hào)瓶；5）以此類推一只稀釋到最后一瓶為止。根據(jù)細(xì)菌含量決定稀釋瓶數(shù)，一般稀釋到7號(hào)瓶:6）將殺菌劑加入到所測(cè)試的水樣，用無(wú)菌注射器去L0ml殺菌后的水樣注入到第二組1號(hào)瓶?jī)?nèi)：7）用另外一只無(wú)菌注射器從第二組1號(hào)瓶去L0ml水樣注入第.組2號(hào)瓶：8）以此類推。根據(jù)細(xì)菌含量決定稀釋瓶數(shù)，一般稀釋到7號(hào)瓶：9）將上述測(cè)試瓶放入放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度控制在37C,7d后讀數(shù)；10）用卜列公式計(jì)算殺菌率:Bl-B2Y=X100%BlY一一殺菌劑的殺菌率，%：Bl-加殺菌劑前水樣中細(xì)菌含量，個(gè)/ml;B2一一加殺菌劑后水樣中細(xì)菌含量，個(gè)/ml。備注：一

3、、注意事項(xiàng)1）SRB測(cè)試瓶變黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸鹽還原菌；TGB測(cè)試瓶由紅變?yōu)辄S或渾濁，表示有腐生菌：IB測(cè)試瓶出現(xiàn)棕紅色沉淀，表示仃鐵細(xì)菌。2）殺菌劑的加晝?yōu)?0mg/L;3）在室溫下向水樣注入殺菌劑，殺菌時(shí)間為4h：4）腐生菌的培養(yǎng)時(shí)間是5d7d：鐵細(xì)菌的培養(yǎng)時(shí)間是7d14d,硫酸鹽還原菌的培養(yǎng)時(shí)間是14d"21do5）測(cè)試瓶大概為3元/瓶。二、讀數(shù)方法：1 .生長(zhǎng)指標(biāo)的確定原則：1）全部呈陽(yáng)性反應(yīng)的最后一列平行樣應(yīng)為生長(zhǎng)指標(biāo)的第一位數(shù)。2）同一平行樣，有X個(gè)陽(yáng)性反應(yīng)瓶，生長(zhǎng)指標(biāo)即為X。2 .級(jí)數(shù)的確定原則：1）全部呈陽(yáng)性反應(yīng)的最后一列平行樣的瓶號(hào)數(shù)減去1,即為級(jí)數(shù)n,以

4、10n表示。2 ）1號(hào)瓶的2或3個(gè)平行樣未全部發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)時(shí),級(jí)數(shù)為0,即為100。3 .細(xì)菌測(cè)試瓶測(cè)試方法及結(jié)果報(bào)告示例例：做三個(gè)平行樣重復(fù)試驗(yàn)，每個(gè)樣稀釋5個(gè)梯度：123451,r3，4，5，1”23”45”即分別在1、1、1”號(hào)瓶中注入1ml水樣，搖勻后取出1ml再分別注入2、T、2號(hào)搖勻后取出1ml再分別注入3、3'、3”瓶中，以此類推直至注入到5、5'、5號(hào)瓶。在恒溫下放置一段時(shí)間后，觀察測(cè)試瓶陽(yáng)性(變色)反應(yīng)個(gè)數(shù)。即：1+23-451'+1'+3'+4*5'-1"+2"+3”4”5”一所以讀數(shù)為:321；級(jí)數(shù)：10

5、0(14=0)此生長(zhǎng)指標(biāo)為321,級(jí)數(shù)為100。通過(guò)查表可知，321對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量為15個(gè)/ml,此系列報(bào)告結(jié)果為:15x100=1500個(gè)/ml。1+2+3+4+5+1'+2'+3'+4'5'+1"+2"+3+4”5此生長(zhǎng)指標(biāo)為312,級(jí)數(shù)為102(3-1=2)。通過(guò)查表可知312對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量為11.5個(gè)/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為：11.5x102=1173個(gè)/mL1+2+3+4+5+1'+2'+3'+4'+5'+1"+2'+3+4"+5'+00此生長(zhǎng)指標(biāo)為30

6、0,級(jí)數(shù)為104(5-1=4)。通過(guò)查表可知，300對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量為2.5個(gè)/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為225x104=2600個(gè)/ml。例子11列2列3列4列5列+，+此生長(zhǎng)指標(biāo)為321,級(jí)數(shù)為100(1-1=0)。通過(guò)查表可知，321對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量為15個(gè)/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為15x100=1500個(gè)/ml。例子21歹IJ2歹IJ3列4歹IJ5歹IJ+1，+此生長(zhǎng)指標(biāo)為311,級(jí)數(shù)為2（3-1=2）。通過(guò)查表可知，311對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量為7.5個(gè)/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為7.5x102=765個(gè)/mL例子31號(hào)瓶2號(hào)瓶37悵4號(hào)瓶5號(hào)瓶+11此生長(zhǎng)指標(biāo)為211,級(jí)數(shù)為1（2-1=1）。通過(guò)查表可知，2

7、11對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量為13個(gè)/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為13x101=1313個(gè)/ml。例子41號(hào)瓶2號(hào)瓶3號(hào)瓶4號(hào)瓶5號(hào)瓶+此生長(zhǎng)指標(biāo)為111,級(jí)數(shù)為0（1-1=0）。通過(guò)查表可知，111對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量為2.0個(gè)/mL此系列報(bào)告結(jié)果為W2xl00=200個(gè)/ml注：a）做幾個(gè)平行樣對(duì)應(yīng)查幾次重復(fù)計(jì)數(shù)表（即生化檢測(cè)方法中的MPN表）。b）計(jì)算公式為：發(fā)生陽(yáng)極反應(yīng)瓶號(hào)數(shù)-級(jí)數(shù)，即在結(jié)果后應(yīng)xlOn。如1號(hào)瓶級(jí)數(shù)為0級(jí)，即在結(jié)果后xlOO：2號(hào)瓶級(jí)數(shù)為1級(jí)，即在結(jié)果后xlOlc）如果第一列（1、1'、1"）未全部發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)，報(bào)告結(jié)果應(yīng)注明“W”；d）如果至最后一列（5、5'、5）

8、全部發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)，報(bào)告結(jié)果應(yīng)注明“2”，此情況卜說(shuō)明細(xì)同量大，應(yīng)增加測(cè)試瓶個(gè)數(shù)以求得較準(zhǔn)確的結(jié)果。e）測(cè)試瓶注入水樣后應(yīng)用力搖尾，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性：逐級(jí)稀釋水樣時(shí)，應(yīng)更換無(wú)菌注射器，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性附錄細(xì)菌量統(tǒng)計(jì)表1稀釋法三次重更菌量統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表1:表1稀釋法三次重復(fù)菌量計(jì)數(shù)表生長(zhǎng)指標(biāo)細(xì)菌量：個(gè)/ml生長(zhǎng)指標(biāo)細(xì)菌量：個(gè)/ml生長(zhǎng)指標(biāo)細(xì)菌量；個(gè)/ml0000020114302650010.32022.031045010032101531175011062112.03121150200.63.0313160100042202.0320951010.7901303211501021.13.5a”20.011007403233001111.123030330250120112313.533145.01211.5232403321100130163002.533314002000.9301402稀釋法二次重亞菌量統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表2：表2稀釋法二次重復(fù)菌量計(jì)數(shù)表生長(zhǎng)指標(biāo)細(xì)菌量：個(gè)/