不同基原秦皮、香豆素單體抗菌作用對(duì)比分析

1、不同基原秦皮、香豆素單體抗菌作用對(duì)比分析    Children and fools cannot lie.  Every man has his hobby-horse.  First try, and then trust.                作者：劉麗梅,王瑞海,陳琳,楊慶,翁小剛,孫建輝  【摘要】  目的 研究4種基

2、原秦皮提取物、5種香豆素單體、5種單體混合物、苦櫪白蠟樹(shù)樹(shù)皮已知香豆素指紋區(qū)樣品、未知成分指紋區(qū)樣品的體外抑菌作用。方法 采用體外抑菌試驗(yàn)微量定量檢測(cè)方法,測(cè)定最小抑菌濃度及最低殺菌濃度。結(jié)果 4種基原秦皮苦櫪白臘樹(shù)、尖葉白臘樹(shù)、白臘樹(shù)、宿柱白臘樹(shù)樹(shù)皮均有明顯抑菌、殺菌作用,抑菌強(qiáng)度依次為：宿柱白臘樹(shù)苦櫪白臘樹(shù)尖葉白臘樹(shù)白臘樹(shù)。5種香豆素單體秦皮素、秦皮乙素對(duì)9種細(xì)菌均有明顯抑菌、殺菌作用,秦皮甲素、秦皮苷對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌有一定抑菌、殺菌作用,抑菌作用依次為：秦皮素秦皮乙素秦皮甲素秦皮苷6,7-二甲氧基-8-羥基香豆素()。苦櫪白臘樹(shù)樹(shù)皮提取物對(duì)所試9種細(xì)菌均

3、有明顯抑菌作用；單體混合物、已知香豆素指紋區(qū)樣品對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌、卡他菌有明顯抑菌作用；未知成分指紋區(qū)樣品對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯抑菌作用,對(duì)表皮葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌也有一定抑菌作用。結(jié)論 秦皮抑菌強(qiáng)弱與已知香豆素成分含量高低基本一致。秦皮中苷元的抑菌作用優(yōu)于苷,5種香豆素類(lèi)單體中秦皮素、秦皮乙素抑菌作用最強(qiáng)。 Money is the root of all evil.  【關(guān)鍵詞】  秦皮；香豆素；抑菌作用  &

4、#160; Abstract：Objective To study bacteriostasis in vitro of 4 kinds of origins ash bark extract, 5 kinds of coumarin monomer, 5 kinds of monomer mixture, known coumarin&

5、#160;fingerprint region sample and unknown component fingerprint region of Fraxinus rhynchophylla Hance. Methods Bacteriostasis experiment in vitro and microamount and quantitative detection 

6、;methods were adopted to measure minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC). Result  Four kinds of origins ash bark including Fraxinus rhyn

7、chophylla Hance, Fraxinus chinensis Roxb. var. acuminata Lingelsh., Fraxinus chinensis, Fraxinus stylosa Lingelsh. had obvious bacteriostasis and bactericidal action, bacteriostasis intensity ord

8、er was Fraxinus stylosa Lingelsh. Fraxinus rhynchophylla HanceFraxinus chinensis Roxb. var. acuminata Lingelsh. Fraxinus chinensis. Five kinds of coumarin monomer：fraxetin, aesculetin had ob

9、vious bacteriostasis and bactericidal action, aesculin and fraxin had certain bacteriostasis and bactericidal action to Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis. Bacteriostasis and bacte

10、ricidal action order was fraxetinaesculetinaesculinfraxin6,7-dicho- methoxyl-8-Hydroxycoumarin. Fraxinus rhynchophylla Hance extract had obvious bacteriostasis to 9 kinds of bacterium；monomer mixture and&#

11、160;coumarin fingerprint region sample had obvious bacteriostasis to Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, beta streptococcus, aeruginosus Bacillus, Bacillus coli, Klebsiella pneumoniae, 

12、catarrh. Unknown component fingerprint region sample had obvious bacteriostasis to Staphylococcus aureus and certain bacteriostasis to Staphylococcus epidermidis, alpha streptococcus, beta strept

13、ococcus, Bacillus coli, salmonella. Conclusion The changes of ash bark bacteriostasis were basically identical with known coumarin component content. Aglycone bacteriostasis of ash bark

14、 was superior to glycoside, fraxetin and aesculetin bacteriostasis were most powerful in 5 kinds of coumarin monomer.論文分為專題型、論辯型、綜述型和綜合型四大類(lèi)      Key words：ash bark；coumarin mo

15、nomer；bacteriostasis     秦皮為木犀科植物苦櫪白蠟樹(shù)Fraxinus rhynchophylla Hance、白蠟樹(shù)Fraxinus chinensis Roxb.、尖葉白蠟樹(shù)Fraxinus szaboana Lingelsh.、宿柱白蠟樹(shù)Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮,具有清熱燥濕、收澀、明目的功能,用于熱痢、泄瀉、赤白帶下、目赤腫痛、目生翳膜等。秦皮主要含有香豆素類(lèi)化學(xué)成分,如：秦皮甲素(aescu

16、lin)、秦皮乙素(aesculetion)、秦皮苷(fraxoside)、秦皮素(fraxetol)、6,7-二甲氧基-8-羥基香豆素1-2。本研究對(duì)4種基原秦皮提取物、5種香豆素單體、5種單體混合物和以苦櫪白蠟樹(shù)樹(shù)皮為代表的秦皮提取物、已知香豆素指紋區(qū)樣品、未知成分指紋區(qū)樣品進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn),旨在闡明其抑菌、殺菌作用的強(qiáng)弱,為客觀地評(píng)價(jià)秦皮質(zhì)量、指導(dǎo)臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。1  實(shí)驗(yàn)材料1.1  藥物   4種基原秦皮：苦櫪白蠟樹(shù)、尖葉白蠟樹(shù)、白蠟樹(shù)、宿柱白蠟樹(shù)樹(shù)皮提取物；5種香豆素單體：秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮

17、素、6,7-二甲基-8-羥基香豆素(均為自制,純度98%)；以苦櫪白蠟樹(shù)為代表的秦皮提取物,5種香豆素單體混合物(按苦櫪白蠟樹(shù)提取物中各單體含量：秦皮甲素2.08%、秦皮乙素0.14%、秦皮苷0.84%、秦皮素0.37%、6,7-二甲基-8-羥基香豆素0.03%混合而成)；苦櫪白蠟樹(shù)已知香豆素指紋區(qū)樣品,未知成分指紋區(qū)樣品(醫(yī)藥學(xué)/藥學(xué)論文 )。上述樣品以DMSO溶解,實(shí)驗(yàn)前配制。1.2  試劑及培養(yǎng)基    注射用硫酸鏈霉素(批號(hào)050312)、注射用青霉素鈉(批號(hào)U204063),均為華北制藥股份有限公司。營(yíng)養(yǎng)肉湯(批號(hào)98011

18、0)、營(yíng)養(yǎng)瓊脂(批號(hào)990330),北京海淀區(qū)微生物培養(yǎng)基制品廠。1.3  菌種    標(biāo)準(zhǔn)株：金黃色葡萄球菌(26112)、乙型(B)溶血性鏈球菌(32310)、綠膿桿菌(10211)、大腸桿菌(4413)、沙門(mén)氏桿菌(50094-14)，由北京生物制品檢定所提供。臨床分離株：表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種、卡他菌由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥所提供。2  方法Politeness costs nothing and gains everything.  2.1  

19、;菌液制備    每種菌以接種環(huán)挑取同類(lèi)型菌落23個(gè),接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯內(nèi),35 孵育1618 h后,以無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯校正濃度達(dá)3.0 億/mL左右,再以營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋,使菌濃度為3003 000個(gè)/mL。2.2  最小抑菌濃度測(cè)定    參考文獻(xiàn)3方法,受試樣品加入96孔圓底培養(yǎng)板中,每孔0.1 mL。每個(gè)樣品設(shè)8個(gè)濃度,苦櫪白蠟樹(shù)樹(shù)皮、尖葉白蠟樹(shù)樹(shù)皮、白蠟樹(shù)樹(shù)皮、宿柱白蠟樹(shù)樹(shù)皮、苦櫪白蠟樹(shù)樹(shù)皮提取物、5種香豆素單體混合物、苦櫪白蠟樹(shù)已知香豆素指紋區(qū)樣

20、品及未知成分指紋區(qū)樣品終濃度分別為250、100、40、16、6.4、2.56、1.02、0.409 mg原藥材/mL；秦皮中5種香豆素類(lèi)單體終濃度分別為5 000、2 000、800、320、128、51.2、20.48、8.19 g/mL,然后接種稀釋菌液0.1 mL/孔。同時(shí)設(shè)定溶劑對(duì)照、細(xì)菌對(duì)照、培養(yǎng)基對(duì)照,設(shè)定青霉素或鏈霉素為陽(yáng)性對(duì)照,以微量振蕩器混勻后,置37 溫孵24 h,在黑色背景下觀察判斷結(jié)果。有細(xì)菌生長(zhǎng)孔呈現(xiàn)混濁,未見(jiàn)混濁則為無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng),以無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的藥物最小濃度作為該藥對(duì)該試驗(yàn)菌的最小抑菌濃度(MIC)

21、。2.3  最低殺菌濃度測(cè)定    從以上無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)板各孔中,分別取出0.1 mL藥液移種于無(wú)菌瓊脂平板上,均勻涂布,置37 孵育箱中孵育24 h,結(jié)果,以菌落數(shù)5 CFU/mL的最低含藥濃度為最低殺菌濃度(MBC)。Time is money, but money is not time.  2.4  體外抑菌、殺菌活性強(qiáng)度評(píng)價(jià)方法    以MIC/MBC值250 mg原藥材/mL或5 000

22、0;g/mL為0分, MIC/MBC值250 mg原藥材/mL或5 000 g/mL為1分,MIC/MBC值100 mg原藥材/mL或2 000 g/mL為2分,MIC/MBC值40 mg原藥材/mL或800 g/mL為3分,MIC/MBC值16 mg原藥材/mL或320 g/mL為4分,MIC/MBC值6.4 mg原藥材/mL或128 g/mL為5分,MIC/MBC值2.56 mg原藥材/mL或51.2 g/mL為6分, MIC/MB

23、C值1.02 mg原藥材/mL或20.48 g/mL為7分, MIC/MBC值0.409 6 mg原藥材/mL或8.19 g/mL為8分。抑菌總積分各菌株MIC/MBC積分之和。3  結(jié)果(見(jiàn)表1表6)表1  4種基原秦皮體外MIC比較(略)注：表中金黃色葡萄球菌,簡(jiǎn)稱：金葡菌；表皮葡萄球菌,簡(jiǎn)稱：表葡菌；甲型溶血性鏈球菌,簡(jiǎn)稱：甲鏈；乙型溶血性鏈球菌,簡(jiǎn)稱：乙鏈；肺炎克雷伯氏菌,簡(jiǎn)稱：肺克菌(下同)表2  4種基原秦皮體外MBC比較(略)表3  5種香豆

24、素單體體外MIC比較(略)表4  5種香豆素單體體外MBC比較(略)表5  提取物、單體混合物及已知、未知指紋區(qū)樣品體外MIC比較(略)注：未知成分指紋區(qū)樣品積分(18)主要由金葡菌引起,去掉金葡菌積分則為12表6  提取物、單體混合物及已知、未知指紋區(qū)樣品體外MBC比較(略)4  討論    4種基原秦皮抗菌作用的對(duì)比,秦皮煎劑對(duì)多種致病菌均有不同程度的抑制效果3。本試驗(yàn)結(jié)果表明,4種基原秦皮苦櫪白蠟樹(shù)樹(shù)皮、尖葉白蠟樹(shù)樹(shù)皮、白蠟樹(shù)樹(shù)皮、宿柱白蠟樹(shù)樹(shù)皮提取物對(duì)所試菌株均有較強(qiáng)

25、的抑菌、殺菌作用,抑菌譜為：金黃色葡萄球菌、乙型(B)溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏桿菌、表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種、卡他球菌。按照抑菌總積分,抑菌強(qiáng)度由大到小排序依次為：宿柱白臘樹(shù)苦櫪白臘樹(shù)尖葉白臘樹(shù)白臘樹(shù)。抑菌強(qiáng)弱順序與香豆素總和基本相同,表明秦皮的抑菌強(qiáng)弱與已知香豆素成分含量基本成正比。但各品種已知香豆素的含量隨產(chǎn)地、采集時(shí)間是有變化的,所以不能說(shuō)秦皮哪一個(gè)品種一定比其他品種好,只能說(shuō)已知香豆素含量高的抑菌效果更好。由此得出結(jié)論,秦皮中香豆素含量越高,抑菌效果更好。5種香豆素單體抗菌作用的對(duì)比,資料報(bào)道秦皮乙素為其抗菌主要有效成分,對(duì)金黃色葡萄球菌、卡他球菌、大腸桿菌等均有抑菌作用,秦皮甲素對(duì)金黃色葡萄球菌等也有一定抑菌作用3。本試驗(yàn)結(jié)果表明,秦皮素、秦皮乙素抑菌殺菌活性最強(qiáng),秦皮甲素、秦皮苷、6,7-二甲氧基-8-羥基香豆素有一定抑菌作用,其抑菌譜為：金黃色葡萄球菌、乙型(B)溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、