腦脊液中高濃度鐵對(duì)大鼠行為學(xué)及神經(jīng)元凋亡的影響

1、文檔收集于互聯(lián)網(wǎng)，已重新整理排版.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持. 腦脊液中高濃度鐵對(duì)大鼠行為學(xué)及神經(jīng)元凋 亡的影響 【摘要】目的:研究高濃度鐵對(duì)大鼠行為學(xué)及神經(jīng)元凋亡的影響, 從而進(jìn)一步探討其與阿爾采默末病(AD)病因?qū)W間的關(guān)聯(lián)。方法：用在 大鼠側(cè)腦室埋管、經(jīng)腦室給藥的方法向?qū)嶒?yàn)組大鼠腦室注入FeC13 10 UL；向?qū)φ战M注入人工腦脊液10 UL,第5、10天重復(fù)給藥1次， 用Morris水迷宮測(cè)定其行為學(xué)改變，用Annexin V擬FITC染色細(xì)胞, 通過流式細(xì)胞儀測(cè)定大鼠早期神經(jīng)細(xì)胞凋亡百分率。結(jié)果：行為學(xué)實(shí) 驗(yàn)組大鼠尋找平臺(tái)時(shí)間、距離和均大于對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組染色陽性細(xì)胞 百分率

2、高于對(duì)照組。結(jié)論：木實(shí)驗(yàn)證明向腦室內(nèi)注入鐵離子可引起大 鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙的行為學(xué)改變及神經(jīng)元凋亡，這正是AD的特征性 臨床病理改變，因此推測(cè)腦脊液中高濃度鐵離子可能是與引起散發(fā)性 AD的病因有關(guān)聯(lián)。 【關(guān)鍵詞】鐵離子阿爾采默病Morris水迷宮凋亡 Abstract Objective： To examine the behavioral performance and molecular pathological changes induced by higher concentration iron. FeC13 were injected into intracephalic of r

3、ats by embedding a plastic hollow tube into their ventricle of brain. Methods :15 rats were divided into control and experimental groups. Both of the experimental and control rats. A small burr擬hole was made in the left/right side of the craium with a dental drill. A plastic hollow tube was embedded

4、 in the 1文檔來源為:從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word版本可編借. 文檔收集于互聯(lián)網(wǎng)，已重新整理排版.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持. ventricle of brain. After the surgent FeC13 were injected into ventricle of brain. Of control tats interval 5 days and 3 times injection were carried out Then the behavioral performance were examined by Morris water maze and the

5、 percentage of early apoptosisin of cells load with Annexin擬FITC were testded byflow cytomety. Results： There were ignificant differences in the mean escape latencies : sum of escape distance between exprimental and control rats Percentage of Annexin擬FITC loaded cells that are undering apoptosis in

6、animals treated by iron were higher than that of normals .Conclusion： Injecting higher concentration iron into ventrcle induce damage of study and memory and neuron apoptosis which were the clinic and pathological characteristic of AD. Key words iron； AD； Morris water maze； apoptosis 阿爾采默病(AD)是一種臨床上

7、以進(jìn)行性智能障礙為特征,病理上 以皮層及海馬區(qū)出現(xiàn)老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)為特征的疾病。近來，隨 著家族性AD病因的揭示，散發(fā)性AD病因的研究日益受到重視，人們 發(fā)現(xiàn)環(huán)境、代謝對(duì)散發(fā)性AD的發(fā)生起著重要作用。而飲食(水)因素, 特別是一些微量元素與AD病因的關(guān)系日益引起人們的重視。研究通過 在大鼠側(cè)腦室埋管，分別將FeC13注入大鼠腦室系統(tǒng)，用Morris水迷 宮測(cè)定其行為學(xué)改變，用Annexin V擬FITC染色細(xì)胞，通過流式細(xì)胞 儀測(cè)定大鼠腦組織早期凋亡細(xì)胞百分率，研究大鼠行為學(xué)改變及神經(jīng) 元凋亡的發(fā)生，進(jìn)一步探討鐵離子與AD病因之間的關(guān)系。 1資料與方法 1. 1 一般資料 實(shí)驗(yàn)對(duì)象為山西醫(yī)

8、科大學(xué)動(dòng)物中心提供的3月齡雄性SD大鼠18 只（起始體重250280 g）。隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組10只，對(duì)照組8只。實(shí) 驗(yàn)期間自由飲食、飲水，分籠飼養(yǎng)。 1. 2行為學(xué)測(cè)定裝置 行為學(xué)測(cè)定裝置由Morris水迷宮及圖像自動(dòng)監(jiān)視系統(tǒng)組成。 Morris水迷宮為一直徑120 cm、高50 cm的圓形水池，水深30 cm, 水溫23Co池壁上標(biāo)有東、南、西、北4個(gè)入水點(diǎn)，而將水池分為西 南、東南、東北（平臺(tái)所在）、西北4個(gè)象限（記錄時(shí)分別以14代表）。 在3象限正中距池壁20 cm處固定一直徑為10 cm的圓形透明逃避平 臺(tái)，池水沒過平臺(tái)lcm。測(cè)定前將鼠頭用染發(fā)劑染黑，向池中加入奶 粉使水呈白色不透明。

9、由圖像監(jiān)視系統(tǒng)同步記錄大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡。 1. 3動(dòng)物篩選 將鼠面向池壁依次從1, 2, 4象限放入水池，限時(shí)180 s內(nèi)找到 逃避平臺(tái)，并在平臺(tái)上停留2 s,即被認(rèn)為逃避成功。18只大鼠每日 上午、下午各進(jìn)行1次行為學(xué)測(cè)定，共測(cè)定5 d 10次，8次（含8次） 逃避成功者入選，其余剔出。 1. 4腦室埋管術(shù) 用戊巴比妥鈉（40 mg/kg）經(jīng)腹腔注射麻醉后將鼠置于立體定位 儀上將鼠頭固定，參照大鼠立體定位圖譜1旁正中切口，在正中線旁 開2 mm,前岡十字縫橫線后1. 31. 8 mm處用牙鉆鉆孔至硬腦膜下3. 5 mm,拔鉆后，將長0. 9 cm,直徑1 mm的空心塑料管垂直插入約3 mm, 見

10、有透明腦脊液平面，用牙粉固定塑料管，術(shù)后恢復(fù)休息1周。1.5給 藥方法 實(shí)驗(yàn)組取FeC13溶液10 U L (5. 2 U g/ U L),對(duì)照組取生理鹽水 10 UL,分別用微量加樣器經(jīng)腦室埋管緩慢注入大鼠側(cè)腦室。每5 d 給藥1次，共給藥3次。 1. 6水迷宮行為學(xué)測(cè)定 實(shí)驗(yàn)組有9只，對(duì)照組有6只大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定，共測(cè)定7 d, 測(cè)定指標(biāo)有平均潛伏時(shí)間(s)；行程(cm)o 1. 7流式細(xì)胞計(jì)數(shù) 去大鼠大腦額葉皮層組織，以70%冷乙醇固定，將固定組織用 機(jī)械法制備成單分散細(xì)胞懸液，低速離心后(700r/min),用500目濾 網(wǎng)棄去團(tuán)塊，調(diào)整細(xì)胞濃度為每個(gè)3X106/個(gè)/mL,加入特異性

11、的早期 凋亡細(xì)胞標(biāo)記物Annexin V擬FITC染色標(biāo)記細(xì)胞15 min后收集1萬個(gè) 神經(jīng)元細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞早期凋亡百分率。 1. 8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS軟件包進(jìn)行方差分析，用土s表示，將平均潛伏時(shí) 間、距離轉(zhuǎn)換成lgX,將早期細(xì)胞凋亡百分率轉(zhuǎn)換成sin-lX, P0. 05 則認(rèn)為有顯著差異。 2結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠平均潛伏時(shí)間、距離、早期凋亡細(xì)胞百分率 比較差異顯著（見表1）。表1兩組平均潛伏距離、時(shí)間及早期凋亡細(xì) 胞百分率比較 3討論 縱觀近年來的研究，普遍認(rèn)為早期發(fā)病的AD與遺傳因素有關(guān)， 晚期發(fā)病的AD與環(huán)境因素有關(guān)，有報(bào)道指出，AD時(shí)有鐵代謝的參與, 腦內(nèi)鐵離

12、子、轉(zhuǎn)鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的變化直接或間接與AD有關(guān) 1 , Connor用免疫組化法檢測(cè)AD患者腦組織中鐵、鐵蛋口及轉(zhuǎn)鐵 蛋白含量2,發(fā)現(xiàn)老年斑及血管周圍染色呈強(qiáng)陽性，同時(shí)這些部位 的鐵蛋白染色陽性細(xì)胞也明顯增多，另有研究證明，AD患者血漿、腦 脊液中鐵結(jié)合蛋白P97增加3,并且提出P97濃度作為AD的一個(gè)檢 測(cè)指標(biāo)。由于AD是以智力減退為特征的病變，研究者常以Morris水 迷宮作為檢測(cè)AD動(dòng)物模型的重要手段之一。本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組 大鼠在水迷宮行為學(xué)測(cè)定中平均逃避時(shí)間延長，所走過的距離增加， 說明在腦脊液中注入鐵離子可損傷大鼠的行為學(xué)，能引起大鼠學(xué)習(xí)記 憶功能障礙，這正是AD的重要臨

13、床特征。細(xì)胞凋亡在AD發(fā)病機(jī)制中 的作用備受關(guān)注，運(yùn)原位標(biāo)記技術(shù)可證實(shí)AD患者腦中細(xì)胞凋亡的發(fā) 生，與年齡相配對(duì)的非AD患者腦中凋亡細(xì)胞明顯增多，細(xì)胞凋亡己成 為AD神經(jīng)元死亡的重要途徑。Armexin V擬FITC是特異性的早期凋亡 細(xì)胞發(fā)生的標(biāo)記物4,可將早期凋亡細(xì)胞識(shí)別，目前有文獻(xiàn)報(bào)道用 此方法作為凋亡診斷指標(biāo)51本研究經(jīng)用此法標(biāo)記大鼠額葉細(xì)胞， 觀察到實(shí)驗(yàn)組大鼠細(xì)胞早期凋亡百分率顯著高于對(duì)照組，說明實(shí)驗(yàn)組 大鼠出現(xiàn)了神經(jīng)元凋亡,而鑒于行為學(xué)障礙及神經(jīng)元凋亡是AD特征性 的臨床和病理變化，故推測(cè)腦脊液中高鐵與散發(fā)性AD存在關(guān)聯(lián)。 【參考文獻(xiàn)】 1 Markesbery W R. 0 xi

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