HIV實(shí)驗(yàn)室生物安全基本要求

HIV實(shí)驗(yàn)室生物安全基本要求重慶市疾病預(yù)防控制中心張敏一實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念與范圍實(shí)驗(yàn)室——進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)或試驗(yàn)的場所按學(xué)科領(lǐng)域可分為——生物學(xué)、化學(xué)和物理實(shí)驗(yàn)室病原微生物實(shí)驗(yàn)室——從事傳染性物質(zhì)操作活動的實(shí)驗(yàn)室病原微生物實(shí)驗(yàn)室因?yàn)閷?shí)驗(yàn)活動的特殊性，其生物安全問題越來越引起人們的重視。病原微生物實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動操作對象主要為細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。其中的大部分生物因子能引起人或動物的發(fā)病，有的還具有較強(qiáng)的傳染性。實(shí)驗(yàn)室因?qū)嶒?yàn)活動所產(chǎn)生的污水、廢氣和固體廢物，如果不通過嚴(yán)格的處理或處置，可能引起傳染病的發(fā)生，對環(huán)境和人體健康造成嚴(yán)重危害

隨著SARS疫情的暴發(fā)，以及禽流感、O157：H7大腸桿菌感染、豬鏈球菌感染、甲型H1N1流感等人畜共患病的不斷出現(xiàn)，各國對病原微生物的監(jiān)測越來越重視，對病原微生物實(shí)驗(yàn)室的需求越來越高實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平,可避免實(shí)驗(yàn)室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對實(shí)驗(yàn)室安全責(zé)任的要求。實(shí)驗(yàn)室防護(hù)區(qū)—實(shí)驗(yàn)室的物理分區(qū)，該區(qū)域內(nèi)生物風(fēng)險(xiǎn)相對較大，需對實(shí)驗(yàn)室的平面設(shè)計(jì)、圍護(hù)結(jié)構(gòu)的密閉性、氣流，以及人員進(jìn)入、個(gè)體防護(hù)等進(jìn)行控制的區(qū)域。生物安全實(shí)驗(yàn)室—指從事微生物和生物活性物質(zhì)相關(guān)研究、教學(xué)、檢測、診斷等活動的實(shí)驗(yàn)室。根據(jù)所操作的生物因子的危害程度和采取的防護(hù)措施，將生物安全防護(hù)水平分為4級，1級防護(hù)水平最低，4級防護(hù)水平最高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3和BSL-4表示實(shí)驗(yàn)室的相應(yīng)生物安全防護(hù)水平。BSL-1實(shí)驗(yàn)室—適用于操作在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物BSL-2實(shí)驗(yàn)室

—適用于操作能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。

BSL-3實(shí)驗(yàn)室

—適用于操作能夠引起人類或動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。BSL-4實(shí)驗(yàn)室

—適用于操作能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)消滅的微生物。生物危險(xiǎn)感染性的致病因子，無論是直接感染，還是間接地散播到環(huán)境中去，對人類、動物或植物都是一個(gè)現(xiàn)實(shí)的或潛在的危險(xiǎn)。AnimalsHumansPlants實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染發(fā)生的原因傳染來源：感染性生物因子傳播途徑：徑口、經(jīng)皮膚、經(jīng)呼吸道易感人群：實(shí)驗(yàn)室操作人員及相關(guān)工作人員生物因子

一切微生物和生物活性物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)相關(guān)感染以吸入氣溶膠最為常見實(shí)驗(yàn)室感染定義實(shí)驗(yàn)室操作人員出現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)室病原微生物相關(guān)的臨床癥狀、體征或者疾病的；實(shí)驗(yàn)室操作人員出現(xiàn)的臨床癥狀、體征或者疾病尚不能排除實(shí)驗(yàn)室感染的；實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)或者其他原因造成非實(shí)驗(yàn)室人員感染或突發(fā)公共衛(wèi)生事件發(fā)生等實(shí)驗(yàn)室病原微生物泄漏的;

病原微生物導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)室感染是實(shí)驗(yàn)室生物安全的最大威脅，實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染大部分是由實(shí)驗(yàn)室工作人員的生物安全意識不強(qiáng)、人為操作錯(cuò)誤、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)欠佳和儀器的錯(cuò)誤使用等原因造成的，所以良好的操作技術(shù)規(guī)范對于實(shí)驗(yàn)室生物安全至關(guān)重要。病原微生物的分類國家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個(gè)體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類：第一類：是指能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類：是指能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類：是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。第四類：是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。從事病原微生物的操作,都應(yīng)遵循下列基本原則所有操作人員必須經(jīng)過培訓(xùn)，通過考核，獲得上崗證書；在開始相關(guān)工作之前，應(yīng)對所從事的病原微生物及相關(guān)操作進(jìn)行危險(xiǎn)評估，根據(jù)國家對于各種微生物操作的危險(xiǎn)等級劃分和防護(hù)要求以及危險(xiǎn)評估的結(jié)果，制定全面、細(xì)致的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和程序文件，對于關(guān)鍵的危險(xiǎn)步驟設(shè)計(jì)出可行的防護(hù)措施并對這些細(xì)節(jié)了然于胸；熟悉各級生物安全實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的一般規(guī)則，掌握各種儀器、設(shè)備、裝備的操作步驟和要點(diǎn)，對于各種可能的危害應(yīng)非常熟悉；應(yīng)掌握各種感染性物質(zhì)操作的一般準(zhǔn)則和技術(shù)要點(diǎn)。生物安全意識至關(guān)重要生物安全實(shí)驗(yàn)室污染定義

是指生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)發(fā)生與實(shí)驗(yàn)活動相關(guān)的一切微生物和生物活性物質(zhì)對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境包括氣體、液體和各種固體表面的污染。生物安全實(shí)驗(yàn)室污染后果影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定及實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性和可信性引起實(shí)驗(yàn)室感染或中毒事件公共突發(fā)衛(wèi)生事件發(fā)生實(shí)驗(yàn)室的生物安全規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行規(guī)范儀器設(shè)備的使用規(guī)范針對感染性材料的操作規(guī)范個(gè)人防護(hù)用品的使用規(guī)范……二、HIV檢測實(shí)驗(yàn)室相關(guān)生物安全1、范圍艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防。適用于全國各級各類艾滋病實(shí)驗(yàn)室的安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防。2、相關(guān)法律和標(biāo)準(zhǔn)?微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則?(WS233-2002)衛(wèi)生部2003年8月1日起實(shí)施?實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求?(GB19489-2008)2009年7月1日起實(shí)施

?全國艾滋病檢測工作管理辦法?衛(wèi)疾控發(fā)子[2006]218號?病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例?

國務(wù)院第424號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》衛(wèi)生部第45號令?醫(yī)務(wù)人員艾滋病病毒職業(yè)暴露防護(hù)工作指導(dǎo)原則(試行)?衛(wèi)生部頒布2004年6月1日起實(shí)施?消毒技術(shù)規(guī)范(2008年版)?衛(wèi)生部發(fā)布3、HIV實(shí)驗(yàn)室的生物危害

第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，是高致病性病原微生物。實(shí)驗(yàn)室主要生物危害微生物氣溶膠吸入刺傷、割傷皮膚、黏膜污染食入感染的實(shí)驗(yàn)動物咬傷……還有許多不明原因的實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染

風(fēng)險(xiǎn)評估與控制當(dāng)實(shí)驗(yàn)室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時(shí)，應(yīng)進(jìn)行生物風(fēng)險(xiǎn)評估。風(fēng)險(xiǎn)評估應(yīng)至少包括下列內(nèi)容：生物因子的種類、來源、傳染性、致病性、變異性、易感性、傳播途徑、潛伏期、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、流行病學(xué)資料、預(yù)防和治療方案等。風(fēng)險(xiǎn)評估應(yīng)由適當(dāng)?shù)挠薪?jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行。

4、HIV相關(guān)檢測的生物安全級別

4.1HIV抗體檢測（包括篩查和確證實(shí)驗(yàn)）、抗原檢測和相關(guān)的免疫學(xué)檢測應(yīng)在符合Ⅱ級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行4.2HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應(yīng)用活病毒的研究工作，應(yīng)在Ⅲ級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-3）中進(jìn)行。

4.3HIV核酸提取和檢測均應(yīng)在符合Ⅱ級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。

4.4HIV病毒株應(yīng)保存在符合Ⅲ級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-3）要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室；HIV陽性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、核酸提取物應(yīng)保存在符合BSL-2要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室。5生物安全保證措施5.1、建立安全制度根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2009年修訂版）及相關(guān)的法律法規(guī)制訂本實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，每年應(yīng)對其制度或程序及其實(shí)施情況進(jìn)行檢查和修訂，并有記錄。

生物安全責(zé)任制，明確實(shí)驗(yàn)室各崗位人員職責(zé)，實(shí)驗(yàn)室主任是實(shí)驗(yàn)室安全的第一責(zé)任人。準(zhǔn)入制度人員健康監(jiān)護(hù)制度安全工作制度實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)及實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒制定意外事故處理預(yù)案，主要是生物安全意外事故的處理、登記、調(diào)查和報(bào)告制度建立實(shí)驗(yàn)室安全操作行為程序。建立實(shí)驗(yàn)室廢棄物安全處理程序信息安全及保密制度：

與HIV/AIDS檢測相關(guān)的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格保密

5.2培訓(xùn)和管理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行全員安全培訓(xùn)并強(qiáng)化“普遍性防護(hù)原則”安全意識，所有的血液、未固定的組織和組織液樣品，均應(yīng)視為有潛在的傳染性，都應(yīng)以安全的方式進(jìn)行操作。所有管理和檢測人員都應(yīng)接受省級以上艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室主持的安全培訓(xùn)，包括上崗前培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受管理人員的監(jiān)督。必須對新上崗人員進(jìn)行安全教育和培訓(xùn)，使他們清楚實(shí)驗(yàn)室工作的潛在危險(xiǎn)，通過考核等方式確認(rèn)他們具備安全操作的能力后方可單獨(dú)工作。從事HIV的工作人員必須經(jīng)過生物安全培訓(xùn)并取得相應(yīng)資質(zhì)，在身體健康狀態(tài)良好的情況下開展工作。對實(shí)驗(yàn)室其他相關(guān)人員，包括清潔人員、運(yùn)輸工、修理工等也要定期進(jìn)行培訓(xùn)，使他們熟悉工作環(huán)境，了解潛在的危害以及相應(yīng)的事故預(yù)防和緊急情況處理措施。實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)入建立實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度：

必須對新調(diào)入人員、外來合作、進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員進(jìn)行生物安全培訓(xùn)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任批準(zhǔn)后，方可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。未經(jīng)批準(zhǔn)，任何人不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。兒童不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域?？赡茉黾荧@得性感染的危險(xiǎn)性或感染后可能引起嚴(yán)重后果的人員不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室或動物房。BSL-2實(shí)驗(yàn)室門上應(yīng)標(biāo)有國際通用的生物危害警告標(biāo)志，包括通用的生物危險(xiǎn)性標(biāo)志，標(biāo)明傳染因子、生物安全水平、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其他人姓名、電話（白天、家庭）、以及進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的特殊要求。實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)保持關(guān)閉。工作人員進(jìn)入動物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過特別批準(zhǔn)。與實(shí)驗(yàn)室工作無關(guān)的動物不得帶入實(shí)驗(yàn)室。

生物安全培訓(xùn)和監(jiān)督應(yīng)有客觀詳實(shí)的記錄。實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)詳細(xì)了解所有工作人員的教育和培訓(xùn)背景、特長、性格特點(diǎn)等。要根據(jù)人員特點(diǎn)、工作種類、所涉及的生物材料合理安排工作區(qū)域。實(shí)驗(yàn)室的安全責(zé)任人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，定期進(jìn)行安全檢查。所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人安全檢查實(shí)驗(yàn)室管理層有責(zé)任確保安全檢查的執(zhí)行。每年應(yīng)對工作場所至少檢查一次，以保證：應(yīng)急裝備、警報(bào)體系和撤離程序功能及狀態(tài)正常；用于危險(xiǎn)物質(zhì)漏出控制的程序和物品狀態(tài)，包括緊急淋浴；對可燃易燃性、可傳染性、放射性和有毒物質(zhì)的存放進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)和控制；去污染和廢棄物處理程序的狀態(tài)；實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、設(shè)備、人員的狀態(tài)。

5.3個(gè)人保健和防護(hù)

1）環(huán)境設(shè)施三區(qū)劃分設(shè)置洗手池（感應(yīng)水龍頭）沖眼器自動關(guān)閉門，實(shí)驗(yàn)室門應(yīng)有可視窗足夠空間存儲物品及實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通風(fēng)，如使用窗戶自然通風(fēng)，應(yīng)有防蟲紗窗可靠電力供應(yīng)和應(yīng)急照明黑暗中出口應(yīng)有可辨認(rèn)的標(biāo)識

2）設(shè)備設(shè)施生物安全柜高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗(yàn)證，以保證符合要求。應(yīng)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備個(gè)人防護(hù)裝備，應(yīng)符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。（防護(hù)服、手套、防護(hù)鞋、帽子、口罩、防護(hù)鏡）脫蓋機(jī)、移液器3）防護(hù)要求在實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿著合適的工作服或防護(hù)服。在進(jìn)行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時(shí)，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實(shí)驗(yàn)的所有液體。

遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適于工作的情況，不要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作。嚴(yán)禁穿著實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服離開實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域儲存食品和飲料。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過的防護(hù)服不得和清潔的防護(hù)服及日常服裝放在同一柜子內(nèi)。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的同一個(gè)獨(dú)立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時(shí)從事一種致病性病原微生物的相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動使用螺旋帽的塑料管盛放含HIV的樣品,禁止使用Ep管,以防止在開啟管蓋時(shí)發(fā)生樣品迸濺,建立員工健康檔案：工作人員上崗前必須進(jìn)行HIV抗體和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒標(biāo)志物檢測，應(yīng)接種乙肝疫苗。應(yīng)每年對工作人員采血檢測HIV抗體，血清應(yīng)長期保留。應(yīng)指定專人監(jiān)督保持良好內(nèi)務(wù)的行為。工作區(qū)應(yīng)時(shí)刻保持整潔有序。禁止在工作場所存放可能導(dǎo)致阻礙和絆倒危險(xiǎn)的在量一次性材料。所有用于處理污染材料的設(shè)備和工作表面在每班工作結(jié)束、有任何漏出或發(fā)生了其他污染時(shí)應(yīng)使用適當(dāng)?shù)脑噭┣鍧嵑拖尽?.4安全操作1）試劑及樣品的管理

設(shè)有專門儲存陽性血清、質(zhì)控品的低溫冰箱和/或血清庫、毒種庫，上鎖并由專人管理。對存放試劑和樣品的區(qū)域應(yīng)進(jìn)行監(jiān)控2）實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒工作結(jié)束后及時(shí)消毒工作臺面，有污染的地方要及時(shí)消毒處理。3）樣品的采集和處理采集血樣時(shí)要注意安全。離心樣品時(shí)要使用有密閉蓋的離心機(jī)。4）樣品的帶入、帶出和操作不得將非實(shí)驗(yàn)室物品帶入實(shí)驗(yàn)室。常規(guī)處理血液、體液樣品可在工作臺上進(jìn)行，如樣品有可能濺出，則應(yīng)戴手套、口罩和防護(hù)眼鏡，在生物安全柜中操作。被污染或可能污染的材料在帶出實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)進(jìn)行消毒。用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。接收樣品時(shí)要檢查樣品質(zhì)量，有無完整信息，

用于國際空運(yùn)的樣品要按照國際空運(yùn)協(xié)會（IATA）的規(guī)則進(jìn)行包裝和標(biāo)記，并提交相應(yīng)的資料。5）儀器設(shè)備的安全操作生物安全柜高壓消毒鍋離心機(jī)移液器冰箱生物安全柜的使用戴手套防止手部被污染；在開始工作以前，將實(shí)驗(yàn)所必需的物品全部放進(jìn)安全柜內(nèi)，并對表面進(jìn)行消毒處理；對生物安全柜工作臺面，側(cè)壁表面以及后壁內(nèi)側(cè)進(jìn)行消毒處理；讓生物安全柜工作區(qū)排氣幾分鐘之后再開始工作；不要在工作區(qū)內(nèi)排放過多的物品；不要阻塞進(jìn)氣格柵；實(shí)驗(yàn)操作盡可能靠近安全柜內(nèi)部進(jìn)行；盡量減少手臂的移動。移動時(shí)要緩慢；移出手臂之前，表面消毒處理，然后緩慢移出；拿放物品一定要遵守從潔凈區(qū)到污染區(qū)的順序；生物廢棄物袋應(yīng)放在安全柜內(nèi)不能拿出安全柜；一旦實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生溢出物，用消毒紙巾置于其表面吸附清理，應(yīng)在生物安全柜處于工作狀態(tài)下進(jìn)行處理。從安全柜內(nèi)部拿取可能產(chǎn)生污染的物品時(shí)，一定要進(jìn)行表面消毒處理；將產(chǎn)生氣溶膠的器皿盡可能擺放在安全柜工作區(qū)靠里的位置；潔凈的物品應(yīng)放置在距離產(chǎn)生氣溶膠器皿至少150mm外，降低交叉污染的可能性；禁止使用氣體火焰，以防影響