無菌檢驗(yàn)操作SOP

無菌檢驗(yàn)操作SOP編號(hào)：SOP-ZL001-00頁(yè)碼：1\4版本號(hào)：01修訂號(hào)：00機(jī)密等級(jí)：秘密起草人起草日期頒發(fā)部門質(zhì)量管理部審核人審核日期批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期生效日期分發(fā)清單研發(fā)部[]質(zhì)量管理部[]綜合管理部[]生產(chǎn)管理部[]市場(chǎng)銷售部[]財(cái)務(wù)部[]目的規(guī)定無菌檢查薄膜過濾法的具體操作方法，指導(dǎo)操作者按本程序規(guī)定步驟使用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查。適用范圍本程序包括薄膜過濾法無菌檢查的物品準(zhǔn)備、操作前準(zhǔn)備、供試品的復(fù)溶、稀釋、過濾，加培養(yǎng)基培養(yǎng)，結(jié)果判定及廢棄物處理的全過程。職責(zé)3.1．質(zhì)量管理部：負(fù)責(zé)本規(guī)程的起草。3.2．質(zhì)量管理部檢驗(yàn)人員：負(fù)責(zé)本規(guī)程的操作。3.3．總經(jīng)理:負(fù)責(zé)本規(guī)程的起草。定義無引用標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部材料及設(shè)備6.1.1.供試品及參考品/標(biāo)準(zhǔn)6.1.1.1.供試品：在生物安全柜將采集的供試品，每瓶抽取50ml,混入另一滅菌的500ml瓶?jī)?nèi)，每批產(chǎn)品根據(jù)批量取樣為600～800ml/批；6.1.1.2.陰性對(duì)照：0.9%無菌氯化鈉溶液，20瓶6.1.2.化學(xué)藥品及試劑6.1.2.1.硫乙醇酸鹽硫體培養(yǎng)基200ml/瓶，1瓶/供試品6.1.2.2.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基100ml/瓶，1瓶/供試品6.1.3.玻璃器皿及輔助用品6.1.3.1.剪刀1把、止血鉗1把、不銹鋼放置槽一個(gè)6.1.3.2.操作服1套/人6.1.3.3.全封閉的配套的一次性培養(yǎng)器/每供試品；6.1.4.設(shè)備6.1.4.1.培養(yǎng)箱20℃-25℃，培養(yǎng)箱30℃-35℃。使用參見SXRS-SOP09-1-0-446.1.4.2.集菌儀，參見《全封閉集菌使用與維護(hù)程序》SXRS-SOP09-1-0-53。6.1.4.3.生物安全柜，使用前記錄型號(hào)，編號(hào)。6.1.4.4.環(huán)境生物安全柜A級(jí)，工作室為C級(jí)。流程圖無內(nèi)容8.1.準(zhǔn)備8.1.1.培養(yǎng)基的配制參見《培養(yǎng)基使用說明》8.1.2.滅菌物品準(zhǔn)備，參見《無菌檢查物品的準(zhǔn)備程序》8.1.3.配制84消毒液，方法參見《1:250的84消毒液配制程序》8.1.4.供試品表面消毒處理，8.2.操作程序8.2.1.操作前的準(zhǔn)備8.2.1.1.開啟照明燈8.2.1.2.檢查潔凈室溫度、濕度、壓差，并作記錄。8.2.1.3.將滅菌操作衣放入更衣間，復(fù)核并記錄無菌操作衣滅菌設(shè)備運(yùn)行流水號(hào)。8.2.1.4.消毒后的陰性對(duì)照、供試品、75%酒精棉放入緩沖間。8.2.1.5.將有效期內(nèi)滅菌物品、供試品稀釋液放入緩沖間，復(fù)核滅菌物品滅菌批號(hào)、供試品稀釋液批號(hào)，并作記錄。8.2.1.6將所需培養(yǎng)基擺放在培養(yǎng)盒中放入緩沖間8.2.操作開始8.2.1人員進(jìn)入培養(yǎng)間，參見《人員進(jìn)出潔凈廠房程序》，供試品、培養(yǎng)基、滅菌物品、75%酒精棉放在生物安全柜下操作臺(tái)上。8.2.2無菌剪刀逐瓶去除供試品外蓋8.2.375%酒精棉擦拭消毒供試品瓶口8.2.4去除全封閉集菌培養(yǎng)器無菌外包裝，在培養(yǎng)杯上填寫名稱、批號(hào)、日期。8.2.5集菌培養(yǎng)器培養(yǎng)杯放置集菌儀上。培養(yǎng)杯下口與滅菌的瓶子連接。8.2.6點(diǎn)燃酒精燈。8.2.7在火焰保護(hù)下，將集菌培養(yǎng)器上的針頭插入供試品瓶中。8.2.8啟動(dòng)電腦集菌儀電源開關(guān)，調(diào)節(jié)集菌儀轉(zhuǎn)速至80轉(zhuǎn)/秒。8.2.9供試品溶液通過集菌儀自動(dòng)過濾。8.2.10過濾完成后，將供試品瓶中的針頭拔出，插入另一瓶供試品中。重復(fù)進(jìn)行下一瓶，至供試品全部過濾完畢，關(guān)閉集菌儀電源。8.2.11加入培養(yǎng)基8.2.12將培養(yǎng)杯頂部出氣口上的乳膠帽取下，套在培養(yǎng)杯底部的管口上。8.2.13用止血鉗夾住3號(hào)連接管。8.2.14拔出供試品瓶中的針頭，插入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中。8.2.15啟動(dòng)電源開關(guān)，將培養(yǎng)基平均加入集菌培養(yǎng)器的1號(hào)、2號(hào)培養(yǎng)杯中。8.2.16關(guān)閉電源，放開3號(hào)連接管。8.2.17用止血鉗夾住1號(hào)、2號(hào)連接管。8.2.18拔出硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中的針頭，插入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。8.2.19啟動(dòng)電源開關(guān)，將培養(yǎng)基加入3號(hào)培養(yǎng)杯。8.2.20關(guān)閉電源，放開1號(hào)、2號(hào)連接管。8.2.21在離杯口10cm處，用塑料夾分別夾住1.2.3號(hào)連接管。8.2.22在離杯口11cm處用剪刀剪斷連接管。8.2.23將剪斷處套在培養(yǎng)杯出氣口上。8.2.24在培養(yǎng)杯盒外標(biāo)示牌上填寫供試品名稱、批號(hào)、時(shí)間、試驗(yàn)人，復(fù)核人。8.2.25試驗(yàn)完畢，關(guān)掉酒精燈8.3培養(yǎng)8.3.1將裝有硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基的1號(hào)培養(yǎng)杯放置30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于第3、6、9、12天、結(jié)果判定日觀察培養(yǎng)情況，并在BPR中記錄。8.3.2將裝有硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基的2號(hào)、裝有胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的3號(hào)培養(yǎng)杯放置20-25℃培養(yǎng)，于第3、6、9、12天、結(jié)果判定日觀察培養(yǎng)情況，并記錄。8.3.3陰性對(duì)照操作方法同8.4清場(chǎng)，填寫記錄8.5試驗(yàn)結(jié)果評(píng)估8.5.1培養(yǎng)后14天后判定結(jié)果，完成記錄。復(fù)核人復(fù)核、簽字，QA簽字。8.5.2供試品管及陰性對(duì)照管都無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定。8.5.3如有培養(yǎng)基長(zhǎng)菌，需進(jìn)行污染菌染色。8.5.4以下任一情況出現(xiàn)，判試驗(yàn)不成立，需重試。8.5.4.1對(duì)無菌檢查相關(guān)設(shè)施的微生物監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)表明其不符合規(guī)定。8.5.4.2對(duì)無菌檢查過程的回顧，揭示了本操作程序是錯(cuò)誤的。8.5.4.3陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)。8.5.4.4供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證微生物生長(zhǎng)是因無菌檢查中使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。8.5.4.5重試時(shí)，重新取同量供試品，依法重試，如無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定，如有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。8.5.4.6試驗(yàn)結(jié)束后將裝有培養(yǎng)液的培養(yǎng)杯，高壓滅菌后進(jìn)行處理。8.6填寫試驗(yàn)記錄，報(bào)告結(jié)果出現(xiàn)OOS情況，應(yīng)及時(shí)報(bào)告主管。注意事項(xiàng)9.1.認(rèn)真檢查及核對(duì)供試品批號(hào)，防止供試品批號(hào)混淆。9.2操作全過程應(yīng)注意無菌操作，防止因操作造成的假陽(yáng)性結(jié)果，9.3.供試品為新的產(chǎn)