血液一般檢驗-白細胞檢查（臨床檢驗課件）

白細胞的生理一白細胞稀釋液二計數(shù)板三一、白細胞的生理概要1.白細胞的發(fā)育外周血白細胞起源于骨髓的造血干細胞（HSC），在骨髓多種造血生長因子的調(diào)控下，最終分化、發(fā)育、成熟并釋放到外周血液。

中性粒細胞（N）粒細胞嗜酸粒細胞（E）嗜堿粒細胞（B）白細胞淋巴細胞（L）單核細胞（M）返回上一頁下一頁2.外周血白細胞的種類3.粒細胞的動力學(xué)粒細胞分化、發(fā)育和成熟的過程可劃分為干細胞池、分裂池、成熟池、貯存池、循環(huán)池、邊緣池。粒細胞的動力學(xué)特點見表2-34。白細胞計數(shù)結(jié)果僅反映了循環(huán)池的粒細胞數(shù)量。中性粒細胞分化發(fā)育動力學(xué)

二、白細胞檢查的適應(yīng)證

計數(shù)外周血液的白細胞數(shù)量、檢查染色條件下各種白細胞的形態(tài)并分類計數(shù)，是診斷疾病，尤其是對惡性血液病進行初步診斷和評估療效的基本指標。包括感染、炎癥、組織損傷、中毒、貧血、結(jié)締組織病、骨髓抑制、惡性腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病等多種情況均需要做白細胞檢查。三、白細胞計數(shù)方法1.顯微鏡計數(shù)法（手工）2.血液分析儀法（儀器）

顯微鏡計數(shù)法【原理】用白細胞計數(shù)稀釋液，將血液稀釋一定倍數(shù)并破壞紅細胞后，混勻充入計數(shù)池中，在顯微鏡下計數(shù)一定容積內(nèi)的白細胞數(shù)，經(jīng)換算即可求得每升血液中白細胞的總數(shù)。返回上一頁下一頁【器材】1.顯微鏡（目鏡10×；物鏡10×）2.微量吸管（Hb吸管）毛細吸管玻璃上有10μl和20μl（誤差＜±1%）兩個刻度。橡膠乳頭提供負壓。返回上一頁下一頁3.計數(shù)池（改良牛鮑氏計數(shù)板）返回上一頁下一頁改良牛鮑氏計數(shù)板的結(jié)構(gòu)：（1）各池刻劃有9ｍｍ2面積的刻度，分為9個大方格，每格長、寬各1ｍｍ，面積1ｍｍ2，體積為0.1ｍｍ３，容量0.1μl。返回上一頁下一頁改良牛鮑氏計數(shù)板的結(jié)構(gòu)：（2）四個角的大方格都用單線劃分為16個中方格，為計數(shù)密度小的（白）細胞用。容量：0.1μl/大方格返回上一頁下一頁改良牛鮑氏計數(shù)板的結(jié)構(gòu)：（3）中央的一個大方格，用雙線劃分為25個中方格，每個中方格又被單線劃分為16個小方格，共有400個小方格，供計數(shù)密度大的細胞用，包括紅細胞和血小板。容量：0.1μl/大方格

0.004μl/中方格返回上一頁下一頁

４.蓋玻片

特制的計數(shù)池專用蓋片，要求玻璃表面平整光滑，有一定重量，不被細胞懸液所抬浮，厚度應(yīng)為0.4ｍｍ～0.7ｍｍ。蓋玻片兩面的平整度是：0.002ｍｍ以內(nèi)，大小:24mm×20mm×0.6mm。返回上一頁下一頁

【試劑】

白細胞稀釋液

冰乙酸2.0ｍｌ

10g／Ｌ亞甲藍（或結(jié)晶紫）數(shù)滴

蒸餾水加至100ｍｌ

返回上一頁下一頁稀釋液中各組分的作用：蒸餾水—低滲溶解紅細胞，乙酸—可加速紅細胞溶解，同時乙酸能固定核蛋白，使白細胞核顯現(xiàn)，便于辨認。染料—使核略著色，且易與紅細胞稀釋液區(qū)別。

返回上一頁下一頁【操作】

１．取小試管１支，加入白細胞稀釋液0.38ｍｌ。２．用微量吸管準確吸取外周血20ul。３．擦去管尖外部余血，立即將吸管插入盛有稀釋液的試管底部，輕輕將血放出，并吸取上清液漱洗吸管２次～３次，注意每次不能沖渾稀釋液，最后用手振搖試管混勻。返回上一頁下一頁

４.充液將計數(shù)板和蓋玻片擦凈，蓋片蓋在計數(shù)池上，用毛細滴管或玻璃棒取已混勻的細胞懸液1滴，充入計數(shù)池與蓋玻片間的縫隙中，靜置2min～3min，待白細胞下沉。返回上一頁下一頁鏡下白細胞形態(tài)

似成熟蠶卵，中央核深染，胞質(zhì)色淡。

返回上一頁下一頁5.計數(shù)方法用低倍鏡依次計數(shù)四角的四個大格內(nèi)的白細胞數(shù)。對于壓線的白細胞，應(yīng)采取數(shù)上不數(shù)下；數(shù)左不數(shù)右（左、上計入，右、下棄去）的原則，保證計數(shù)域的一致性，使計數(shù)準確。返回上一頁下一頁讓我們共同計數(shù)下列大格的細胞返回上一頁下一頁讓我們再試一次：返回上一頁下一頁【計算】

四個大格白細胞數(shù)

白細胞數(shù)／Ｌ＝————————

×10×20×1064

式中：÷４得每個大格（即0.1μl）內(nèi)白細胞平均數(shù)

×10因一大格容積為0.1μl，換算為1μl

×20血液稀釋倍數(shù)。

×106將1μl換算為1Ｌ。返回上一頁下一頁稀釋倍數(shù)的確認稀釋倍數(shù)＝（溶質(zhì)＋溶劑）/溶質(zhì)注意：體積單位需一致后方能運算。返回上一頁下一頁請您練習(xí)求以下操作的稀釋倍數(shù)：稀釋液（ml）＋血液（μl）稀釋倍數(shù)

0.38200.48200.39102.0010202540201返回上一頁下一頁請您練習(xí)按常規(guī)取血稀釋后數(shù)得4個大格共有白細胞280個，求白細胞計數(shù)結(jié)果？解：WBC＝280/4×10×20×106＝14×109/L返回上一頁下一頁請您練習(xí)

取血40ul加入稀釋液0.36ml，鏡下計數(shù)了8個大格共有白細胞320個，求其白細胞計數(shù)結(jié)果？答案：稀釋倍數(shù)＝（360＋40）／40WBC＝320／8×10×10×106

＝10＝4×109/L返回上一頁下一頁四、白細胞計數(shù)的質(zhì)量控制1.技術(shù)誤差:由于操作不正確和儀器不精確造成的誤差。

常見原因有血液凝固、稀釋倍數(shù)不準、充液不當、識別錯誤、器材不符合要求等。

返回上一頁下一頁解決措施：

2.固有誤差(計數(shù)域誤差)

因每次白細胞分布不可能完全相同所造成的偏差屬固有誤差，也稱計數(shù)域誤差。根據(jù)統(tǒng)計學(xué)研究，白細胞在計數(shù)池內(nèi)的隨機分布符合泊森分布。從計算公式中可以看出計數(shù)范圍越大，計數(shù)的細胞越多，計數(shù)域誤差越小。返回上一頁下一頁解決措施：3.外周血出現(xiàn)大量有核紅細胞時的校正

返回上一頁下一頁由于白細胞稀釋液不能破壞有核紅細胞，若外周血中出現(xiàn)有核紅細胞，則會造成白細胞計數(shù)結(jié)果偏高。此時應(yīng)對白細胞計數(shù)結(jié)果加以校正：注：X為未校正前白細胞數(shù)；Y為在分類計數(shù)時，計數(shù)100個白細胞的同時計數(shù)到的有核紅細胞數(shù)。

【參考區(qū)間】

成人：（4～10）×109/L；兒童：（5～12）×109/L；

6個月～2歲：（11～12）×109/L；新生兒：（15～20）×109/L?！九R床意義】白細胞總數(shù)高于10×109/L稱為白細胞增多；低于4×109/L稱為白細胞減少，通常將其減少的臨界值定為（4～2.5）×109/L，低于2.5×109/L肯定異常。外周血液白細胞數(shù)量的變化受生理狀態(tài)和病理因素影響，其變化的臨床意義見白細胞分類計數(shù)。小結(jié)1.顯微鏡法計數(shù)原理：

用稀乙酸溶液將血液稀釋并破壞紅細胞后，混勻充入計數(shù)池中，在鏡下計數(shù)一定容積中的白細胞數(shù)，經(jīng)換算求得每升血液中的白細胞總數(shù)。2.計數(shù)池的結(jié)構(gòu)：分為9個大方格，每個大方格長、寬各1ｍｍ，面積ｌｍｍ2，體積為0.1ｍｍ３，容量0.1μl。

3.稀釋液中各組分的作用為：蒸餾水低滲溶解紅細胞；乙酸加速紅細胞溶解同時固定核蛋白，使白細胞核顯現(xiàn)，便于辨認；染料使核略著色，且易與紅細胞稀釋液區(qū)別。4.鏡下計數(shù)時要遵循一定順序，對于壓線的白細胞，應(yīng)采取:數(shù)上不數(shù)下；數(shù)左不數(shù)右（左、上計入，右、下棄去）的原則計數(shù)。5.計算公式

四個大格白細胞數(shù)

白細胞數(shù)／Ｌ＝————————×10×20×106

4白細胞的類別一分類計數(shù)原則二分類計數(shù)方法三

白細胞分類計數(shù)是在顯微鏡下觀察染色后血涂片上白細胞的形態(tài)，并進行分類計數(shù)，以求得各種白細胞的比值（百分率）和絕對值。由于不同類型的白細胞具有不同的生理功能，不同因素可導(dǎo)致其數(shù)量或形態(tài)發(fā)生變化。因此，直接了解白細胞形態(tài)或分類的變化，比了解白細胞總數(shù)更能反映機體的生理或病理狀態(tài)。一、白細胞分類計數(shù)1.顯微鏡分類計數(shù)

【原理】

將血液制備成血涂片，經(jīng)Wright染色后，在油鏡下，根據(jù)白細胞形態(tài)特點逐個分類計數(shù)白細胞（常為100個），并觀察其形態(tài)變化，然后求得各種白細胞的比值（百分率）。還可根據(jù)白細胞計數(shù)的結(jié)果，求得每升血液中各種白細胞的絕對值（絕對值＝白細胞計數(shù)值×該種白細胞分類計數(shù)的百分率）。返回上一頁下一頁

【步驟】

1．制備血涂片

2．血涂片染色

3．白細胞分類

4．計算百分率返回上一頁下一頁

白細胞總數(shù)與分類白細胞數(shù)的關(guān)系返回上一頁下一頁【分類方法】

選擇血涂片體尾交界處．由血膜邊緣向中央依次上下呈曲線向血膜中間移動，計數(shù)不同區(qū)域的白細胞，以免重復(fù)計數(shù)．縮小因細胞分布不勻的誤差。

返回上一頁下一頁2.血細胞分析儀分類計數(shù)

利用VCS原理或流式、電阻抗、射頻、特殊細胞染色原理或多角度偏振光散射原理等對白細胞進行分類計數(shù)，是目前臨床常用的分類計數(shù)方法，但不可取代顯微鏡計數(shù)法。二、各類白細胞絕對值計算

各類細胞所占百分率乘以白細胞總數(shù)/Ｌ．即得每升血液中各類白細胞的濃度數(shù)（習(xí)慣稱絕對值）。某種白細胞數(shù)／Ｌ＝某種白細胞％×白細胞總數(shù)／Ｌ

返回上一頁下一頁三、質(zhì)量控制1.在血涂片選擇適宜的分類部位進行細胞分類。2.移動血涂片的順序一定要有規(guī)律。3.分類時不能人為地拋棄個別細胞，不能確認者應(yīng)單獨記錄比例并用文字描述其形態(tài)特征。

4.如發(fā)現(xiàn)幼稚或異常白細胞應(yīng)分類鑒定，包括在白細胞分類百分率中。此外還應(yīng)注意血涂片中有無異常紅、白細胞及血小板的大體數(shù)量分布