牛人工授精技術(shù)

牛人工授精技術(shù)廣西武宣金泰豐農(nóng)業(yè)科技有限公司當(dāng)前1頁，總共65頁。人工授精的概念種畜配種：自然交配、人工授精人工授精是指利用器械采取公畜的精液，經(jīng)過適當(dāng)?shù)臋z查和處理，再用器械把精液輸送到母畜生殖道的適當(dāng)部位，使之受孕的配種方法。當(dāng)前2頁，總共65頁。人工授精的發(fā)展試驗階段：

1780年意大利生理學(xué)專家司拜倫謹(jǐn)尼（Spallanzani）第一次進行狗的人工授精。20世紀(jì)初對馬試驗成功。實用階段：在20世紀(jì)30年代形成了一套較完整的操作方法。40～60年代，歐洲多數(shù)國家，北美、大洋洲國家及日本人工授精已相當(dāng)普及。冷凍精液階段：出現(xiàn)：1949年英國波芝（Polge）對雞精液冷凍成功。發(fā)展：1950年英國的史密斯（Smith）和波芝研究開發(fā)了牛精液冷凍保存技術(shù)。1960年后冷凍精液的人工授精技術(shù)廣泛展開。我國的人工授精技術(shù)始于50年代（豬），但精液冷凍技術(shù)70年代才得以推廣。當(dāng)前3頁，總共65頁。人工授精的意義充分發(fā)揮優(yōu)秀種公畜的種用價值和配種效能，加快品種改良步伐。提高母畜的受胎率。防止疾病特別是傳染病的傳播?？朔蚣倚篌w形懸殊造成的配種困難。冷凍精液的應(yīng)用使種畜的利用不受時間和空間的限制。是發(fā)展繁殖新技術(shù)的一項基礎(chǔ)措施。當(dāng)前4頁，總共65頁。人工授精技術(shù)程序采精精液品質(zhì)檢查精液稀釋精液保存輸精當(dāng)前5頁，總共65頁。采精采精的準(zhǔn)備采精方法采精頻率當(dāng)前6頁，總共65頁。采精的準(zhǔn)備場地：寬敞、明亮、安靜、清結(jié)，有消毒設(shè)施和保護欄。臺畜：活臺畜、假臺畜。假陰道：安裝調(diào)試后具備適宜的溫度、壓力、和潤滑度。公畜：具備良好的繁殖體況；經(jīng)過訓(xùn)練；采精前進行充分的性準(zhǔn)備。當(dāng)前7頁，總共65頁。采精操作假陰道法：手握法：電刺激法：按摩法：當(dāng)前8頁，總共65頁。當(dāng)前9頁，總共65頁。當(dāng)前10頁，總共65頁。當(dāng)前11頁，總共65頁。公畜的采精頻率公牛：每周兩天，每天兩次。公豬、馬：宜隔日一次，如果連續(xù)兩天采精，要休息2-3天。公羊：每天數(shù)次，連續(xù)數(shù)周。當(dāng)前12頁，總共65頁。精液的品質(zhì)檢查外觀檢查精子活力檢查精子密度檢查精子畸形率檢查其他檢查當(dāng)前13頁，總共65頁。精液的外觀檢查精液量精液色澤精液氣味云霧狀當(dāng)前14頁，總共65頁。項目乳牛肉牛水牛豬綿羊每周采精次數(shù)2～62～62～62～57～25平均每次射精量（ml）5～104～83～6150～3000.8～1.2精子活率（%）50～7540～7560～8050～8060～80當(dāng)前15頁，總共65頁。精子活力檢查平板壓片法懸滴法當(dāng)前16頁，總共65頁。載玻片預(yù)溫精液稀釋取樣檢查鏡檢活力估測活力記錄將恒溫加熱板放在載物臺上，打開電源并調(diào)整控制溫度至37℃，然后放在載玻片

將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋取10ul放在預(yù)溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片在400倍顯微鏡下觀察判斷視野中直線前進運動精子所占的百分率

按"十級一分制"評分和記錄精子活力檢查的程序當(dāng)前17頁，總共65頁。當(dāng)前18頁，總共65頁。精子密度檢查估測法血細(xì)胞計計數(shù)法精子密度儀測定當(dāng)前19頁，總共65頁。估測法密：在整個視野中，精子間空隙不明顯，看不清單個精子運動。10億／ml。中：在整個視野中，精子間空隙明顯，可容納1—2個精子，3—10億／ml?。涸谡麄€視野中，精子間空隙較大，可容納數(shù)個精子，1—3億／ml。當(dāng)前20頁，總共65頁。當(dāng)前21頁，總共65頁。(二)血細(xì)胞計數(shù)法：

在顯微鏡看清血細(xì)胞計數(shù)板上的方格：

稀釋精液：用移液管吸取精液50微升置于小試管中，再吸取3%NaCI溶液450或950微升與精液混勻。

鏡檢：在400倍的顯微鏡下找出具有代表性的五個中方格，四角和中間一個或?qū)蔷€五個，用計數(shù)器計數(shù)其中的精子數(shù)。

計算：1毫升原精液精子數(shù)=5*5*10*1000*稀釋倍數(shù)當(dāng)前22頁，總共65頁。精子密度儀當(dāng)前23頁，總共65頁。當(dāng)前24頁，總共65頁。各種家畜精子密度比較當(dāng)前25頁，總共65頁?；温实臋z查畸形精子：頭部畸形、頸部畸形、尾部畸形精子畸形率：精液中畸形精子占總精子數(shù)的百分率。優(yōu)質(zhì)精液精子畸形率應(yīng)小于：牛18%、羊15%、豬18%、馬12%當(dāng)前26頁，總共65頁。當(dāng)前27頁，總共65頁。畸形率的檢查取一滴原精液，均勻的涂在載玻片上，干燥1～2分鐘。用96%以上酒精固定2～3分鐘。用美藍或墨水染色1～2分鐘。用蒸餾水輕輕沖洗。干燥后鏡檢，當(dāng)前28頁，總共65頁。其他檢查頂體異常率精子生存時間和生存指數(shù)的測定PH測定美藍褪色試驗果糖分解試驗精子耗氧量測定當(dāng)前29頁，總共65頁。頂體異常率的檢查取鮮精適量，在37℃下用生理鹽水稀釋。涂片，干燥，用5%福爾馬林固定10分鐘。姬姆薩液染色1.5～2小時。干燥后用樹脂封閉，制成標(biāo)本。400～600倍鏡檢，數(shù)500～1000個精子，計算項體異常率。當(dāng)前30頁，總共65頁。精子生存時間和生存指數(shù)的測定精子生存時間：指精子在某溫度下在體外的總的生存時間。生存指數(shù)：將精液在某溫度下，每隔8～12小時檢查一次精子活力，直至無活動精子為止，相鄰兩次檢查的平均活力與間隔時間的積之和為生存指數(shù)。當(dāng)前31頁，總共65頁。PH測定正常精液PH：牛、羊6.5～6.9、豬、馬7.4～7.5同種精液PH偏低的，品質(zhì)較好，PH偏高的受精率、生活力和保存效果都顯著降低。當(dāng)前32頁，總共65頁。美藍褪色試驗當(dāng)前33頁，總共65頁。精液稀釋稀釋的目的稀釋液的成分及作用稀釋液的配制方法稀釋倍數(shù)的確定稀釋方法當(dāng)前34頁，總共65頁。稀釋的目的大精液容量，增加了一次采精量的可配母畜數(shù)。延長精子存活時間。有利于精液的保存和運輸。當(dāng)前35頁，總共65頁。稀釋液的成分及作用

稀釋劑：單純擴大容量的等滲液。0.9%NaCl、5%葡萄糖。營養(yǎng)劑：主要提供營養(yǎng)，以補充精子在代謝過程中消耗營養(yǎng)。（1）奶類：奶粉(脫脂、速溶)10—12%；鮮奶經(jīng)消毒加入10—20ml。（2）卵黃，通常加入20%。（3）糖類，3%葡萄糖，11%蔗糖。保護劑：主要保護精子免受各種不良外界環(huán)境因素的危害。

（1）非電解質(zhì)或弱電解質(zhì)：降低精液電解質(zhì)濃度，常用糖類、氨基乙酸。（2）緩沖物質(zhì)：維持精液的PH，常用檸檬酸鹽、酒石酸鉀鈉、磷酸二氫鉀和三羥甲基氨基甲烷（tris)等。

（3）防冷物質(zhì)：防止精子發(fā)生冷休克，常用卵黃、奶類。

（4）抗凍物質(zhì)：甘油、二甲基亞砜(DMSO)。

（5）抗菌物質(zhì)：青霉素、鏈霉素、氨基苯磺胺。其他添加劑：激素類、維生素、酶類、染料類、有機酸、精氨酸等。當(dāng)前36頁，總共65頁。稀釋液的配制要求藥物原料應(yīng)選用化學(xué)純和分析純制劑。用具須洗凈消毒。藥品用蒸餾水溶解后，要進行過濾和水浴消毒。蒸餾水要新鮮。卵黃要取自新鮮雞蛋。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，卵黃、奶類、抗生素現(xiàn)用現(xiàn)加。當(dāng)前37頁，總共65頁。稀釋倍數(shù)的確定一頭公牛一次采得鮮精12毫升，經(jīng)檢查精子活力為0.7，密度為11億/毫升，如為母牛輸精時要求有效精子數(shù)不少于0.1億，輸精量為0.25毫升，本次采得的精液可為多少頭母牛輸精？（1）每毫升原精液中有效精子數(shù)：11*0.7＝7.7億/毫升（2）稀釋后每毫升精液中有效精子數(shù)：0.1/0.25＝0.4億/毫升（3）稀釋倍數(shù)：7.7/0.4＝19.25取19倍（4）可配母牛頭數(shù)：12*19/0.25＝912頭當(dāng)前38頁，總共65頁。稀釋方法將精液精液與稀釋液同處在30℃的環(huán)境中。檢查精液品質(zhì)，確定稀釋倍數(shù)。稀釋時，將稀釋液沿著精液容器的壁慢慢加入精液中，同時慢慢轉(zhuǎn)動精液瓶，使之混勻。如需高倍稀釋，應(yīng)先做3—5倍的低倍稀釋。當(dāng)前39頁，總共65頁。精液稀釋當(dāng)前40頁，總共65頁。精液保存常溫保存：15—25℃低溫保存：0—5℃冷凍保存：保存在液氮(-196℃)或干冰(-79℃)中。當(dāng)前41頁，總共65頁。液氮及其容器液氮的特性：超低溫性、易揮發(fā)性、抑菌性。利用液氮：防凍傷、防窒息、防爆炸液氮罐：當(dāng)前42頁，總共65頁。液氮罐的構(gòu)造當(dāng)前43頁，總共65頁。液氮罐的使用購買時要檢查合格證，查看各部件是否齊備完好，測定液氮損耗率是否正常。運輸液氮要有專門的車輛，防止劇烈振蕩。貯存液氮要在專門的室內(nèi)。當(dāng)液氮量達容積的1/3時要及時充氮。每年要清洗保養(yǎng)一次當(dāng)前44頁，總共65頁。精液的冷凍保存原理玻璃化假說：稀溶液在冰晶化溫區(qū)（0～－60℃）易形成冰晶，冰晶為分子有序排列、形態(tài)規(guī)則、顆粒較大的固體，可對精子產(chǎn)生滲壓和機械危害。如溶液快速降溫，則形成分子無序排列、顆粒較小的玻璃化固體，對精子危害小，再以同樣的方式升溫，精子即會恢復(fù)活力。當(dāng)前45頁，總共65頁。細(xì)管凍精的生產(chǎn)程序采精及精液品質(zhì)檢查精液稀釋：二次稀釋法降溫平衡：分裝凍結(jié)：液氮熏蒸浸泡法抽樣檢查當(dāng)前46頁，總共65頁。細(xì)管凍精的制作當(dāng)前47頁，總共65頁。人工授精技術(shù)輸精前的準(zhǔn)備輸精的要求輸精方法當(dāng)前48頁，總共65頁。輸精前的準(zhǔn)備母畜的準(zhǔn)備：母畜經(jīng)發(fā)情鑒定后，確定已到輸精時間，將其適當(dāng)保定，尾巴拉向一側(cè)，清洗消毒外陰。器械準(zhǔn)備：輸精所用的器械應(yīng)徹底消毒，用稀釋液沖洗后才能使用。精液準(zhǔn)備（1）液態(tài)保存的精液：輕輕振蕩后升溫至35℃，活力不低于0.6（2）冷凍精液：需先解凍，活力在0.3以上。術(shù)者準(zhǔn)備：輸精人員應(yīng)穿好工作服，指甲必須剪短磨光，戴上長臂手套。當(dāng)前49頁，總共65頁。輸精要求輸精時間的確定：母牛發(fā)情后9－24h輸精兩次，間隔8-12小時。（第一次輸精經(jīng)產(chǎn)牛在發(fā)情后12h左右，初產(chǎn)20h）

例：早9點某經(jīng)產(chǎn)母牛發(fā)情，當(dāng)晚7－8：30時第一次輸精，次日早5－9時可第二次輸精，第二次輸精前檢查卵泡。細(xì)管凍精1支，0.5ml或0.25ml，有效精子數(shù)不少于1000萬。當(dāng)前50頁，總共65頁。直腸把握子宮頸輸精法操作要點1、凍精的適宜解凍溫度：38~39℃2、母牛的輸精時間：發(fā)情開始后8~12小時一次，隔8~12小時一次。3、適宜的輸精部位：子宮頸深部和子宮體內(nèi)。4、精液解凍后要盡快輸精。5、精液解凍后要保存在34~36℃下，溫度不可波動過大。6、細(xì)管裝入槍內(nèi)后，要檢查一下精液是否能從套管外流出。7、排出宿糞后，先擦洗牛外陰部，再插入輸精器。8、插入輸精器時，先斜向上方前進10~15cm，再水平插入。9、向子宮頸插入輸精器時，要注意兩手協(xié)同操作。10、輸精器與子宮頸方向要保持一致。11、注入精液困難時，要適當(dāng)改變輸精器方向或稍后拉，但切忌后退過多。12、注入精液要緩慢，一般為10秒。13、注入精液的同時要減緩母牛的努責(zé)，防止精液倒流。14、輸精同時要注意保護輸精器不受糞便污染。15、輸精完畢后，先撤出輸精器后撤出直腸內(nèi)的手臂。當(dāng)前51頁，總共65頁。當(dāng)前52頁，總共65頁。當(dāng)前53頁，總共65頁。當(dāng)前54頁，總共65頁。當(dāng)前55頁，總共65頁。提高受胎率的措施發(fā)情正常而屢配不孕的母牛：大麥芽120克，當(dāng)歸、紅花、生地、地骨皮各60克，黑豆500～1000克，加水熬湯。母牛發(fā)情1～3天開始喂藥，每日1劑，連服3劑，第3劑藥服完后的第2天配種。按碘片1克、碘化鉀3克、蒸餾水6克的比例配成稀釋液，同時取4毫升原液，加200毫升蒸餾水沖洗子宮。此方法對慢性子宮內(nèi)膜炎、化膿性子宮炎、卡他性子宮炎、陰道炎等引起的母牛不孕癥有明顯療效。當(dāng)前56頁，總共65頁。提高受胎率的措施卵巢機能不全時，肌注0.5%新斯的明2毫升，連注3次，每次間隔48小時。第3次可同時注射孕馬血清1000國際單位，82.4%的母牛可恢復(fù)機能。對隱性子宮內(nèi)膜炎的母牛，在發(fā)情配種前2小時，用生理鹽水200～500毫升沖洗子宮之后，注入青霉素40～100萬單位，鏈霉素100萬單位，再適時輸精，受胎率可達60%以上。當(dāng)前57頁，總共65頁。提高受胎率的措施肌注維生素。輸精后15～20分鐘，肌肉注射維生素E500毫克，情期受胎率可提高14.4%。在輸精的當(dāng)天，輸精后的第5～6天，各肌注維生素A58萬單位，維生素D310萬單位，維生素E500毫克一次情期受胎率可提高20%。50%～70%葡萄糖溶液加入青霉素和鏈霉素100～200萬單位，于人工授精6～8小時后注入子宮體內(nèi)，對患子宮內(nèi)膜炎的母?？商岣呤芴ヂ?6%～50%。當(dāng)前58頁，總共65頁。提高受胎率的措施在母牛分娩后的第一、二情期，輸精后5～7分鐘，各肌肉注射40～50萬單位的催產(chǎn)素一次，受胎率提高20%。肌肉注射促性腺激素10毫克，受胎率可提高12%～19.1%：屢配不孕的牛經(jīng)注射后受胎率提高26.1%。在母牛分娩后45～60天肌肉注射前列素F兩天，20～25毫升、受胎率可達73%～85%。長期不孕的牛，皮下注射初奶20毫升和0.5%新斯的明2毫升，受胎率提高24%。當(dāng)前5