蛋白質(zhì)組研究技術(shù)

主要內(nèi)容蛋白質(zhì)研究方法的概述大規(guī)模的蛋白質(zhì)分離技術(shù)高通量蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)第一節(jié)概述一、蛋白質(zhì)組的研究遠(yuǎn)比基因組的研究要復(fù)雜的多蛋白質(zhì)的數(shù)目遠(yuǎn)大于基因的數(shù)目：基因的拼接和翻譯后修飾蛋白質(zhì)是動(dòng)態(tài)/基因是相對(duì)靜態(tài)的氨基酸種類(lèi)遠(yuǎn)多于核苷酸種類(lèi)技術(shù)手段上：基因研究有PCR、DNA自動(dòng)測(cè)序技術(shù)、DNA微陣列技術(shù)等；蛋白質(zhì)沒(méi)有相匹配的技術(shù)DNA蛋白質(zhì)檢測(cè)水平/靈敏度可用PCR技術(shù)擴(kuò)增檢測(cè)限約為30個(gè)拷貝/樣本無(wú)法被擴(kuò)增檢測(cè)方法高度特異DNA與其互補(bǔ)序列（DNA/RNA）的雜交能力使得DNA很容易固相化在靶上并用熒光探針檢測(cè)。高密度陣列檢測(cè)專(zhuān)用的掃描儀已經(jīng)出現(xiàn)非特異蛋白質(zhì)可以用非特異的方法如蛋白染色或較特異的方法如抗體進(jìn)行檢測(cè)分子的穩(wěn)定性DNA是非常穩(wěn)定的，即使在提高溫度的情況下也不丟失生物活性蛋白質(zhì)在變性情況下將喪失天然功能，需要格外小心保持其天然構(gòu)象重復(fù)性重復(fù)性好將DNA固相化在表面已經(jīng)是成熟的技術(shù)，加之DNA固有的穩(wěn)定性，方法的重復(fù)性較好重復(fù)性不好由于蛋白質(zhì)分子的穩(wěn)定性不好，方法的重復(fù)性需格外關(guān)注消耗初始的投入是較大的（微陣列、掃描儀、共聚焦顯微鏡），但短期內(nèi)得到的數(shù)據(jù)量相當(dāng)大目前的蛋白質(zhì)分析方法依賴(lài)昂貴的儀器設(shè)備（質(zhì)譜儀、2-DE裝置）專(zhuān)業(yè)化方法已相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化蛋白質(zhì)的分析較困難。大部分分析工作如純化與質(zhì)譜分析等都需要受過(guò)訓(xùn)練的人員來(lái)操作時(shí)間/自動(dòng)化已成為高通量的掃描技術(shù)目前還不能達(dá)到工業(yè)需求的高通量翻譯后修飾無(wú)法研究研究翻譯后修飾的唯一方法是研究蛋白質(zhì)本身動(dòng)態(tài)范圍5個(gè)數(shù)量級(jí)7-12個(gè)數(shù)量級(jí)DNA分析（cDNA微陣列）與蛋白質(zhì)分析（2-DE與質(zhì)譜）方法的比較二、蛋白質(zhì)研究技術(shù)的發(fā)展雙向電泳技術(shù)：1975年，O’Farrel建立的；是目前唯一能將數(shù)千種蛋白質(zhì)同時(shí)分離與展示的分離技術(shù)，一般能分離1000–3000個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)圖像分析與大規(guī)模數(shù)據(jù)處理軟件兩種軟電離質(zhì)譜技術(shù)－基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrixassistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS）與電噴霧電離質(zhì)譜（electro-sprayionizationmassspectrometry,ESI-MS）：可精確測(cè)定生物大分子的相對(duì)分子質(zhì)量及多肽序列，使得微量快速的蛋白質(zhì)鑒定得以實(shí)現(xiàn)雙向電泳技術(shù)、計(jì)算機(jī)圖像分析與大規(guī)模數(shù)據(jù)處理技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)蛋白質(zhì)組研究的三大基本支撐技術(shù)。三、蛋白質(zhì)組研究步驟2-D電泳高效柱層析分離蛋白質(zhì)氨基酸組成分析、C-端或N-端氨基酸序列分析及MS鑒定所分離的蛋白質(zhì)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行存儲(chǔ)、處理、對(duì)比和分析蛋白樣品的IEF和PAGE電泳分離生物學(xué)問(wèn)題的提出實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷脑O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣品的制備圖像掃描和初步分析感興趣蛋白點(diǎn)的切取胰酶對(duì)脫色后蛋白質(zhì)的消化質(zhì)譜的多肽指紋圖、微測(cè)序分析質(zhì)譜結(jié)果的生物信息學(xué)分析和比對(duì)新蛋白質(zhì)的發(fā)現(xiàn)其它實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證蛋白信息的初步獲得蛋白質(zhì)組研究策略蛋白質(zhì)組研究的基本技術(shù)路線凝膠中的蛋白膠上原位酶切蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)蛋白質(zhì)樣品的制備（細(xì)胞、組織、體液）雙向電泳圖像分析、數(shù)據(jù)處理電轉(zhuǎn)印至膜上的蛋白混合肽氨基酸分析、氨基酸組成Edman降解、N端測(cè)序肽序列標(biāo)簽肽質(zhì)量指紋圖數(shù)據(jù)庫(kù)檢索蛋白質(zhì)鑒定MALDI-TOF-MSESI-MS-MS寡核苷酸合成基因蛋白實(shí)驗(yàn)蛋白活性免疫組化蛋白定位抗體肽合成四、新的蛋白質(zhì)組研究技術(shù)定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究：同位素編碼親和標(biāo)簽技術(shù)（isotope-codedaffinitytags,ICAT）和雙色熒光技術(shù)等蛋白質(zhì)相互作用：酵母雙雜交技術(shù)、蛋白質(zhì)復(fù)合物免疫分離與質(zhì)譜鑒定技術(shù)；蛋白質(zhì)分離于鑒定：多維色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)翻譯后修飾：蛋白質(zhì)圖譜展示與檢測(cè)技術(shù)蛋白質(zhì)表達(dá)：蛋白質(zhì)芯片技術(shù)第二節(jié)大規(guī)模的蛋白質(zhì)分離技術(shù)蛋白質(zhì)組學(xué)的目的：實(shí)現(xiàn)對(duì)一個(gè)基因組所編碼的全部蛋白質(zhì)及其相互作用的研究首要問(wèn)題：蛋白質(zhì)的有效分離理想的蛋白質(zhì)分離方法：超高分辨率；可針對(duì)不同類(lèi)型的蛋白質(zhì)一、二維凝膠電泳1.2-DE的介紹：是目前唯一能夠?qū)?shù)千種蛋白同時(shí)分離與展示的技術(shù)1.1在2-DE中，蛋白質(zhì)首先根據(jù)等電點(diǎn)的不同，在一向等電聚焦電泳中分離，接著被轉(zhuǎn)移到二向SDS-聚丙稀酰胺凝膠上，再根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小不同被分離1.2固相化pH梯度（immobilizedpHgradient,IPG）等電聚焦電泳技術(shù)；微量鑒定技術(shù)以及質(zhì)譜技術(shù)靈敏度的提高1.3不足：膜蛋白、堿性蛋白、低豐度蛋白的分離與檢測(cè)；重復(fù)性以及規(guī)?；妥詣?dòng)化的問(wèn)題等1.4改進(jìn)：2-DE樣品的前處理；2-DE后的蛋白點(diǎn)的檢測(cè)研究等第一向進(jìn)行等電聚焦（isoelectricfocusing,IEF）,由于蛋白質(zhì)具有兩性解離和等電點(diǎn)特性，將蛋白質(zhì)樣品加載至pH梯度介質(zhì)上進(jìn)行電泳時(shí)，會(huì)向與其所帶電荷相反的電極方向移動(dòng)。移動(dòng)過(guò)程中，蛋白分子可能獲得或失去質(zhì)子，并隨著移動(dòng)的進(jìn)行，該蛋白所帶的電荷數(shù)和遷移速度下降。當(dāng)?shù)鞍走w移至其等電點(diǎn)pH位置時(shí)，其凈電荷數(shù)為零，在電場(chǎng)中不再移動(dòng)。根據(jù)各自不同的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)最終被聚焦在一個(gè)很窄的pH梯度介質(zhì)區(qū)域內(nèi)。目前常使用預(yù)制膠條（IPG）用于蛋白質(zhì)的等電聚焦分離，將聚焦好的IPG膠條在含有SDS的緩沖液中平衡第二向是將在IPG膠條中經(jīng)過(guò)第一向分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到SDS凝膠上，根據(jù)蛋白質(zhì)的相對(duì)質(zhì)量或分子量大小與第一向相垂直的分離。樣品經(jīng)過(guò)電荷和質(zhì)量?jī)纱畏蛛x后，得到等電點(diǎn)和分子量的信息2.低豐度蛋白、膜蛋白的檢測(cè)與樣品預(yù)分離2.1低豐度蛋白大部分的蛋白質(zhì)是低豐度的蛋白質(zhì)，而低豐度的蛋白質(zhì)往往是執(zhí)行重要生物功能的蛋白質(zhì)密碼子偏性（codonbias）:指生物體中編碼同一種氨基酸的同義密碼子的非均衡使用現(xiàn)象。密碼子偏性系數(shù)（codonbiasindex）:CBI小于0.2的基因編碼的蛋白質(zhì)為低豐度蛋白質(zhì)。酵母中2500個(gè)編碼基因的CBI小于0.1。一步法（one-extract-one-gel）：一步提取的細(xì)胞總蛋白在一塊膠上進(jìn)行電泳分離；高豐度蛋白加大上樣量，但有限制窄范圍的IPG膠條（2-3個(gè)pH單位）、非常窄范圍的IPG膠條（約1個(gè)pH單位）：可以增加電泳膠的分辨率，加大樣品的負(fù)載量，但存在超出pH范圍的蛋白去除高豐度的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的檢出限預(yù)染色方法、起始加樣量的關(guān)系銀染（1ng）考馬斯亮藍(lán)染（100ng）蛋白質(zhì)的豐度拷貝數(shù)/細(xì)胞蛋白質(zhì)的量mg細(xì)胞數(shù)蛋白質(zhì)的量mg細(xì)胞數(shù)1020.0731.2×1092007.31.2×10111002.0071.2×108200.71.2×101010000.2011.2×10720.11.2×109100000.0201.2×1062.01.2×1081000000.0021.2×1050.21.2×107以6×107個(gè)細(xì)胞得到1mg可溶酵母蛋白計(jì)算。2.2膜蛋白膜蛋白是一些疏水性的蛋白質(zhì)，在常規(guī)2-DE的提取液中的溶解度低，另外因聚焦而產(chǎn)生濃縮、聚集，從而使得膜蛋白很難融解并進(jìn)入二向SDS電泳，因此很難被檢測(cè)到2.3樣品預(yù)分離（pre-fractionation)2.3.1分步提取法（sequentialextraction）原理：蛋白質(zhì)的溶解度差異采用3種不同的提取液進(jìn)行分步提取和分別電泳；實(shí)際上是增加了融解性能不同的第三維分離2.3.2多間隔電離法（multi-compartmentelectrolyser）實(shí)質(zhì)上是一種制備等電聚焦的方法。電泳裝置由中間的聚焦室和兩端的電極室組成。聚焦室由隔膜分成多個(gè)樣品室。電極室內(nèi)裝電極，由陰陽(yáng)離子交換膜將電解質(zhì)與樣品分開(kāi)。操作時(shí)，將預(yù)分離的蛋白質(zhì)混合物放進(jìn)聚焦室中，隨著等電聚焦電泳的進(jìn)行，混合物中的蛋白質(zhì)根據(jù)各自的等電點(diǎn)不同而聚焦到相應(yīng)的樣品室中并被分別收集多間隔電離法示意圖3.堿性蛋白質(zhì)的分離與檢測(cè)3.1很難被分開(kāi)：商業(yè)化的IPG膠條的pH范圍通常在3-10，等電點(diǎn)超過(guò)10的蛋白質(zhì)很難被分開(kāi)。目前已經(jīng)有pH范圍到12的IPG膠條，從而得到了部分的解決3.2大部分的細(xì)胞提取物是酸性蛋白質(zhì)：去除酸性蛋白質(zhì)改善堿性蛋白質(zhì)的分離與檢測(cè)?？梢圆捎脛偛沤榻B的方法，制備等電聚焦預(yù)分離，將堿性蛋白質(zhì)富集，再采用堿性pH梯度膠進(jìn)行分離4.IPG膠條的改進(jìn)4.1膠條的pH范圍在不斷變窄：改善了2-DE的分辨率，增加了上樣量，從而提高了蛋白質(zhì)的檢出，而且可以針對(duì)不同樣品選擇不同的膠條4.2膠條的pH范圍也在不斷擴(kuò)大：改善了堿性蛋白質(zhì)的分離4.3不同長(zhǎng)度的膠條：通常采用的是18cm的膠條，可以達(dá)到2000種以上蛋白質(zhì)點(diǎn)的分辨率；24cm、40cm5.高通量與自動(dòng)化5.1蛋白質(zhì)組研究的高通量需要研究體系的自動(dòng)化：集中在2-DE后的樣品處理和蛋白質(zhì)的識(shí)別5.2自動(dòng)點(diǎn)切割儀，自動(dòng)樣品處理機(jī)等：減少了手工操作，縮短了時(shí)間，提高了效率；提高了樣品處理的重復(fù)性，避免了手工操作易產(chǎn)生的污染5.3可同時(shí)運(yùn)行12塊膠的二向SDS電泳槽已經(jīng)研制成功并商品化2-DE，染色，圖像分析自動(dòng)MS樣品分析自動(dòng)蛋白酶解，多肽回收，點(diǎn)樣于MS樣品靶自動(dòng)采集數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，蛋白鑒定膠上蛋白點(diǎn)自動(dòng)切割，置于96或384孔板蛋白質(zhì)識(shí)別過(guò)程的自動(dòng)化流程5.4分子掃描（molecularscanner）：將一個(gè)固相化了胰蛋白酶的PVDF膜插入2-DE電泳膠和另一個(gè)PVDF膜之間，后一個(gè)PVDF膜作為收集膜。當(dāng)對(duì)上述體系進(jìn)行電轉(zhuǎn)印時(shí)，膠上的蛋白質(zhì)在向第一個(gè)PVDF膜遷移的過(guò)程中被胰蛋白酶酶切，酶切肽段穿過(guò)帶有固相化胰酶的PVDF膜，被第二個(gè)PVDF膜收集。收集膜可直接用于MALDI-TOF-MS做肽質(zhì)量指紋譜分析。實(shí)現(xiàn)了2-DE后的樣品處理與質(zhì)譜分析一體化；肽段數(shù)目低，使蛋白質(zhì)特別是翻譯后修飾蛋白質(zhì)的識(shí)別與鑒定效率受到影響。6.2-DE的局限性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：樣本間的異質(zhì)性以及組織中多種細(xì)胞的并存，將影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。激光捕獲顯微切割的方法（laser-capturemicrodissection,LCM）：?jiǎn)我患?xì)胞重復(fù)性：是2-DE方法存在的主要問(wèn)題動(dòng)態(tài)范圍：有限的動(dòng)態(tài)范圍與低拷貝蛋白質(zhì)的難以檢測(cè)也是2-DE目前尚未完全解決的問(wèn)題。放射性同位素標(biāo)記激光捕獲顯微切割示意圖蛋白質(zhì)的丟失：疏水性蛋白質(zhì)、分子質(zhì)量大于100kDa的蛋白質(zhì)通量和自動(dòng)化：圖像分析仍然是瓶頸二、色譜－質(zhì)譜技術(shù)1.二維色譜－串連質(zhì)譜技術(shù)（2D-HPLC-MS-MS）1.1二維色譜分離蛋白質(zhì)和多肽優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)2-DE高分辨率，>1000個(gè)蛋白質(zhì)可得到等電點(diǎn)、相當(dāng)分子質(zhì)量信息可得到蛋白質(zhì)表達(dá)譜可平行運(yùn)行多個(gè)膠費(fèi)時(shí)、費(fèi)力；不易自動(dòng)化疏水、酸性、堿性、<10kDa、>200kDa蛋白易丟失樣品負(fù)載量受限制2D-HPLC快速可分離各種蛋白質(zhì)易于自動(dòng)化樣品在液相；餾分易收集可做樣品制備或濃縮不能得到等電點(diǎn)、相對(duì)分子質(zhì)量信息尚未實(shí)現(xiàn)平行操作不易得到蛋白質(zhì)表達(dá)譜分辨率不夠高2-DE與2D-HPLC的比較二維色譜分離蛋白質(zhì)的優(yōu)勢(shì)：快速；可分離各種蛋白質(zhì)；樣品在液相，餾分易收集；易于自動(dòng)化；可做樣品制備或濃縮二維色譜分離蛋白質(zhì)有多種組合模式：第一維色譜一般是離子交換色譜/凝膠過(guò)濾色譜，第二維通常是反相色譜scx陽(yáng)離子交換柱2D-HPLC分離體系示意圖緩沖液廢液樣品反相柱檢測(cè)器洗液－流動(dòng)相反相柱1反相柱2流動(dòng)相廢液10通道切換閥1.2二維色譜－串連質(zhì)譜分離鑒定細(xì)胞蛋白質(zhì)采用二維色譜－串連質(zhì)譜技術(shù)可以對(duì)蛋白質(zhì)混合物進(jìn)行直接分離與鑒定。樣本蛋白質(zhì)混合物蛋白酶裂解二維色譜分離質(zhì)譜分析鑒定蛋白質(zhì)

色譜反相柱

質(zhì)譜儀串連質(zhì)譜測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配蛋白質(zhì)鑒定蛋白質(zhì)混合物二維色譜/質(zhì)譜分析流程樣品優(yōu)勢(shì)：識(shí)別和鑒定低豐度蛋白、膜蛋白、酸性蛋白、堿性蛋白以及相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不足：通過(guò)蛋白質(zhì)直接酶切得到的肽段混合物過(guò)于復(fù)雜，較難實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞全部蛋白質(zhì)的識(shí)別與鑒定2.同位素標(biāo)記（ICAT）-親和色譜-質(zhì)譜技術(shù)ICAT，isotope-codedaffinitytagging：不但可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞差異表達(dá)蛋白質(zhì)的定量分析，而且可以大大簡(jiǎn)化被分析樣品的復(fù)雜性ICAT方法的關(guān)鍵是ICAT試劑的應(yīng)用：半胱氨酸生物素標(biāo)簽

連接部分（重鏈或輕鏈）巰基特異反應(yīng)基團(tuán)ICAT試劑示意圖方法：蛋白質(zhì)進(jìn)行ICAT試劑標(biāo)記蛋白酶切親和色譜分離（只有被同位素標(biāo)記的肽段能被色譜柱保留）進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行鑒定通過(guò)比較標(biāo)記重鏈和輕鏈試劑肽段在質(zhì)譜圖中信號(hào)的強(qiáng)度，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)的定量分析，采用串連質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定肽段的序列，可以實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的定性鑒定ICAT－親和色譜－質(zhì)譜技術(shù)流程圖優(yōu)勢(shì)：可以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同條件處理的細(xì)胞差異蛋白質(zhì)的定量分析，而且大大簡(jiǎn)化了被分離樣品的復(fù)雜程度不足：無(wú)法分析和鑒定不含半胱氨酸的蛋白質(zhì)；試劑的高價(jià)位三、一維電泳（色譜）－質(zhì)譜技術(shù)1.一維SDS電泳（色譜）－質(zhì)譜分離鑒定蛋白質(zhì)復(fù)合物蛋白質(zhì)復(fù)合物的分離與鑒定是功能蛋白質(zhì)組研究的核心內(nèi)容SDS電泳結(jié)合MALDI-TOF-MS技術(shù)，或者蛋白酶切結(jié)合LC-MS-MS技術(shù)直接分離和鑒定蛋白質(zhì)復(fù)合物被證明是一種有效的方法蛋白質(zhì)復(fù)合物一維電泳（色譜）－質(zhì)譜分析流程圖蛋白質(zhì)復(fù)合物的分離肽段混合物（溶液中）蛋白質(zhì)混合物溶液SDSMALDI-TOF-MS肽段混合物（膠上）蛋白酶切LC-MS-MS蛋白質(zhì)復(fù)合物鑒定數(shù)據(jù)庫(kù)檢索蛋白質(zhì)復(fù)合物電泳（色譜）－質(zhì)譜分析流程圖2.一維IEF電泳－質(zhì)譜分離鑒定蛋白質(zhì)與質(zhì)譜方法相比，SDS測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量誤差大，分辨率差，更重要的是，很難獲得翻譯后修飾蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量變化的準(zhǔn)確信息精確測(cè)定全細(xì)胞蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量一維IEF電泳－質(zhì)譜：采用IPG膠條進(jìn)行等電聚焦電泳，MALDI-TOF-MS對(duì)膠條進(jìn)行表面直接分析。將一向IEF電泳與準(zhǔn)確、靈敏、高分辨率的相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定技術(shù)相結(jié)合，誤差0.1％-0.2％第三節(jié)高通量蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)一、生物質(zhì)譜技術(shù)1.質(zhì)譜技術(shù)：一百多年的歷程，早期的質(zhì)譜技術(shù)分析對(duì)象主要是小分子化合物，質(zhì)量范圍在幾千以下2.20世紀(jì)80年代末期，產(chǎn)生了兩項(xiàng)軟電離質(zhì)譜技術(shù)－ESI和MALDI-TOF，具有高靈敏度（pmol）和高質(zhì)量檢測(cè)范圍（幾萬(wàn)到幾十萬(wàn)Da）3.ESI：采用四級(jí)桿質(zhì)量飛行器，所構(gòu)成的儀器成為電噴霧（四級(jí)桿）質(zhì)譜儀；其特點(diǎn)之一是可以和液相色譜、毛細(xì)管電泳等高效分離手段聯(lián)用，因而可以實(shí)現(xiàn)復(fù)雜化合物分離與鑒定的聯(lián)機(jī)操作4.MALDI-TOF：常用飛行時(shí)間質(zhì)量分析器，所構(gòu)成的儀器成為基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀；特點(diǎn)是對(duì)鹽和填加物的耐受能力強(qiáng)，且操作簡(jiǎn)單，測(cè)定速度快，易于實(shí)現(xiàn)高通量，譜峰與樣品成分的質(zhì)量有一一對(duì)應(yīng)關(guān)系，圖譜容易解析5.離子阱（iontrap）質(zhì)譜儀和傅立葉變換離子回旋共振（fouriertransformioncyclotronresonance,FTICR）質(zhì)譜6.電噴霧－四極桿－飛行時(shí)間質(zhì)譜儀：大大提高了儀器的分辨率和靈敏度7.帶有串連質(zhì)譜功能的MALDI-TOF質(zhì)譜儀：引進(jìn)了源后裂解或碰撞誘導(dǎo)解離裝置，可進(jìn)行肽序列測(cè)定二、2-DE