遺傳學(xué)綜合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

物理因素對(duì)細(xì)菌遺傳效應(yīng)的遺傳分析

——紫外誘變與篩選組長(zhǎng)：夏波林組員：張至瑋、馬麗娟、高潤(rùn)東實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馕锢硪蛩貙?duì)遺傳物質(zhì)的影響；熟悉紫外線(xiàn)誘變的原理和方法；掌握微生物的紫外線(xiàn)誘變技術(shù)。DNA對(duì)紫外線(xiàn)（UV）有強(qiáng)烈的吸收作用，尤其是堿基中的嘧啶，它比嘌呤更為敏感。紫外線(xiàn)引起DNA結(jié)構(gòu)變化的形式有DNA鏈斷裂、堿基破壞、胸腺嘧啶二聚體等。因?yàn)樯矬w中具有對(duì)損傷DNA的修復(fù)機(jī)制。經(jīng)過(guò)UV照射，可以通過(guò)光復(fù)活和暗修復(fù)（切除修復(fù)）完成修復(fù)。為避免修復(fù)，獲得更多的突變菌種，誘變處理后的實(shí)驗(yàn)操作在紅光下進(jìn)行。枯草芽孢桿菌式G＋菌，在增殖過(guò)程中能力產(chǎn)生大量的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等胞外酶的能力。但不同菌株產(chǎn)酶量不同。儀器、試劑與材料實(shí)驗(yàn)菌種：枯草芽孢桿菌實(shí)驗(yàn)試劑：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、淀粉培養(yǎng)基、碘液實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái)、微波爐、高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、鼓風(fēng)干燥箱、磁力攪拌器、培養(yǎng)皿、離心管、酒精燈、涂布棒、移液器、接種環(huán)、紫外線(xiàn)燈（15W）、玻璃棒、pH試紙等實(shí)驗(yàn)步驟紫外燈：15W，28.7cm，穩(wěn)定30min。處理強(qiáng)度：以時(shí)間為變量30s、60s、120s、240s處理方法：PlanA、PlanB涂布量：0.2ml6＊106cfu/ml第一天（誘變處理PlanA）稀釋之后再處理預(yù)實(shí)驗(yàn)第二天（誘變處理PlanB）第三天編號(hào)編號(hào)一一對(duì)應(yīng)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，計(jì)算致死率。第三天第四天數(shù)據(jù)測(cè)量與統(tǒng)計(jì)對(duì)照正突變負(fù)突變負(fù)突變正突變初篩復(fù)篩實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1致死率

6*1023*1036*1031.5*10430s0.450.80\難以計(jì)數(shù)60s0.990.98\0.99120s0.98\0.990.99240s1\1.001.00實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)123456789101112平均值H/mm0.600.601.001.001.001.001.000.500.701.101.000.90

C/mm0.100.100.200.200.200.200.200.100.100.200.200.20

H/C6.006.005.005.005.005.005.005.007.005.505.004.505.33表2正突變初篩結(jié)果本組初篩大致選出了80個(gè)菌落，經(jīng)過(guò)計(jì)算H/C，我們將統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)據(jù)分為正突變、負(fù)突變、對(duì)照三組，每組12個(gè)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)123456789101112平均值H/mm1.001.401.501.701.801.401.101.401.301.401.401.50

C/mm0.300.400.400.500.500.400.300.400.400.400.400.40

H/C3.333.503.753.753.603.503.673.503.253.503.503.753.55表3對(duì)照組初篩結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)123456789101112均值H/mm0.600.700.800.700.701.001.000.700.800.801.101.10

C/mm0.300.300.300.300.300.400.400.300.300.300.400.40

H/C2.002.342.672.342.342.502.502.342.672.672.752.752.49表4負(fù)突變初篩結(jié)果T檢驗(yàn)Sig<0.05具有顯著性差異初篩發(fā)生了正突變。表5正突變初篩結(jié)果檢驗(yàn)T檢驗(yàn)Sig<0.05具有顯著性差異初篩發(fā)生了負(fù)突變。表6負(fù)突變初篩結(jié)果檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)123456789101112平均值H/C13.002.752.754.003.803.403.503.803.804.004.673.20

24.003.752.754.673.603.754.335.004.004.003.503.50

33.253.503.003.405.334.504.334.334.253.753.503.75

平均值3.423.332.834.024.243.884.054.374.023.923.893.483.79表7正突變復(fù)篩結(jié)果本組對(duì)初篩選出的36個(gè)菌落進(jìn)行復(fù)篩，經(jīng)過(guò)一天的培養(yǎng)，從數(shù)據(jù)中大致可以看出H/C的值均有朝向?qū)φ战M變化的趨勢(shì)，即出現(xiàn)了回復(fù)突變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)123456789101112平均值H/C13.333.002.703.333.333.333.253.503.253.203.503.75

23.753.504.003.753.753.753.003.003.003.253.503.50

33.203.503.503.403.603.503.803.753.753.753.754.33

平均值3.433.333.403.493.563.533.353.423.333.403.583.863.47表8對(duì)照組復(fù)篩結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)123456789101112平均值H/C13.501.253.002.832.432.432.803.003.003.203.003.20

23.003.002.602.573.502.433.503.203.003.003.203.40

33.253.753.753.203.203.203.003.202.803.503.753.50

平均值3.252.673.122.873.042.693.103.132.933.233.323.373.06表9負(fù)突變復(fù)篩結(jié)果T檢驗(yàn)Sig<0.05，復(fù)篩結(jié)果和對(duì)照組依然具有顯著性差異復(fù)篩之后依然存在著正突變效應(yīng)。表10正突變復(fù)篩與對(duì)照組T檢驗(yàn)T檢驗(yàn)Sig<0.05，復(fù)篩結(jié)果和對(duì)照組依然具有顯著性差異復(fù)篩之后依然存在著負(fù)突變效應(yīng)。表11負(fù)突變復(fù)篩與對(duì)照組T檢驗(yàn)T檢驗(yàn)Sig<0.05初篩和復(fù)篩結(jié)果具有顯著性差異從數(shù)據(jù)可以看出，復(fù)篩發(fā)生了回復(fù)突變。表12初篩和復(fù)篩正突變結(jié)果T檢驗(yàn)T檢驗(yàn)Sig<0.05初篩和復(fù)篩結(jié)果具有顯著性差異從數(shù)據(jù)可以看出，復(fù)篩發(fā)生了回復(fù)突變。表13初篩和復(fù)篩負(fù)突變結(jié)果T檢驗(yàn)T檢驗(yàn)Sig>0.05，對(duì)照