醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)思考題(共10頁)

1、1.什么是基因工程？它包括哪幾個主要(zhyo)步驟？基因工程（gene engineering） ：將不同生物體的核酸分子在體外經(jīng)過(jnggu)酶切、連接，構(gòu)建成重組的核酸分子 ，再把它導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi) ，使外源基因在受體細(xì)胞中表達(dá)?；蚬こ萄芯繎?yīng)包括以下 6個主要內(nèi)容或步驟： 1）獲取基因：從復(fù)雜的生物有機體基因中，經(jīng)過酶切消化或PCR擴(kuò)增等方法，分離出帶有目的基因的DNA片段。 2）克隆載體構(gòu)建：在體外，將帶有目的基因的外源DNA片段連接到能夠自我復(fù)制，并帶有選擇標(biāo)記的載體分子上，形成重組DNA分子克隆載體。 3）克隆載體轉(zhuǎn)化：將克隆載體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，并與之一起增殖(zngzh)。4）克

2、隆載體篩選：從大量的細(xì)胞繁殖群體中，篩選出獲得了克隆載體的受體細(xì)胞克隆。5）克隆載體鑒定：從這些篩選出來的受體細(xì)胞克隆中提取已經(jīng)得到擴(kuò)增的目的基因，并做酶切、序列分析等鑒定。 6）表達(dá)載體構(gòu)建和表達(dá)：將目的基因克隆到表達(dá)載體上，導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使 之在新的遺傳背景下實現(xiàn)功能表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的物質(zhì)。把以上6個步驟稱作是基因工程(上游研究)。2.什么是限制性核酸內(nèi)切酶？舉例說明。限制性核酸內(nèi)切酶（restriction endonuclease）簡稱為限制性內(nèi)切酶或限制酶 。是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割雙鏈DNA的酶。Bam H、Eco R、Hind 、Not

3、、Pst 、Sma3.什么是質(zhì)粒？理想的質(zhì)粒載體應(yīng)具備什么條件？質(zhì)粒（plasmid）染色體外，能獨立復(fù)制，能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子。理想質(zhì)粒載體所必需具備的條件:1.質(zhì)粒較?。?5Kb) 小質(zhì)粒通?？截悢?shù)較多， 外源DNA容量較大, 容易轉(zhuǎn)化，容易分離，不易斷裂，容易鑒定2.帶選擇標(biāo)記,對抗菌素的抗性，Amp, Tet, Kana, Neo ,互補3. 有單一限制性酶切位點 (多克隆位點 MCS ）單一的限制性酶切位點可供外源DNA定點插入。多個不同的單一限制性酶切位點，可有選擇地供帶有不同末端的外源基因插入。4.具有復(fù)制起始點（Ori) 質(zhì)粒DNA增殖所必不可少的結(jié)構(gòu)。5.作為原

4、核表達(dá)載體:還要有啟動子，核糖體結(jié)合位點（SD）和終止子序列。6.真核表達(dá)載體:還要有 真核表達(dá)調(diào)控元件：包括啟動子、增強子、轉(zhuǎn)錄終止序列、poly A 加尾信號等 真核細(xì)胞復(fù)制起始序列 真核細(xì)胞藥物抗性基因4.組織工程的三個重要組成部分以及它們的作用是什么？細(xì)胞、生物材料和環(huán)境；細(xì)胞用以修復(fù)組織器官；生物材料為細(xì)胞提供支架供其生長；環(huán)境的作用是為細(xì)胞的生長提供必須的物質(zhì)和必備的條件。三者作為一個整體構(gòu)建組織、器官或其生物性替代物, , 以維持、修復(fù)、再生或改善損傷組織和器官功能。5.種子細(xì)胞類型及其各自的優(yōu)缺點？種子細(xì)胞(xbo)（Stem cell）分：組織來源的細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞，組織來源

5、的細(xì)胞優(yōu)點：構(gòu)建出的組織在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上與正常組織比較接近，缺點： 體外培養(yǎng)易老化、不易擴(kuò)增 ，會造成供區(qū)部位的組織缺損和功能障礙；胚胎干細(xì)胞優(yōu)點：全能性，缺點(qudin)：安全性、倫理性。6.舉例說明組織(zzh)工程技術(shù)可用于那些組織修復(fù)（要求簡述構(gòu)建過程）？從理論上說可以用于修復(fù)所有組織，但從技術(shù)方面考慮，有些組織的培養(yǎng)還存在問題，現(xiàn)在主要用于修復(fù)皮膚、肌腱等組織。首先，取活體肌腱組織，制備成肌腱細(xì)胞培養(yǎng)皿，加入生長因子促進(jìn)其分裂增殖，在培養(yǎng)時需烤爐低氧因素將，并且在切割后的硅膠培養(yǎng)皿中高密度培養(yǎng),獲得半成品后可以在體內(nèi)外繼續(xù)生長，注意周期性拉力因素，最后以手術(shù)方式將成品移植到機體

6、身上，并繼續(xù)觀察。7.試述外源基因在原核體系中的表達(dá)需要具備的條件，及影響外源基因表達(dá)的因素。外源基因具備的條件：編碼區(qū)不含插入序列； （mRNA-cDNA ） 位于啟動子下游，方向一致，原有的讀碼框不變；含起始密碼子、終止密碼子；轉(zhuǎn)錄出的mRNA 必須有SD 序列 ， 調(diào)整SD 序列與第一個AUG 間的距離（因為會對轉(zhuǎn)譯效率有影響）；產(chǎn)物比較穩(wěn)定（如：融合蛋白、信號肽）；選擇系統(tǒng)偏好的簡并密碼。影響外源基因表達(dá)的因素：啟動子的強弱 （主要因素）基因的劑量，RNA 轉(zhuǎn)譯效率 （SD 互補、AUG-SD 距離及序列、AUG 前后核苷酸序列的適宜性）密碼子、表達(dá)產(chǎn)物的大小、產(chǎn)物的穩(wěn)定性。8.蛋白質(zhì)

7、的分離純化技術(shù)依據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)分為哪幾大類，請列舉其中的一類，談?wù)勊脑砑皯?yīng)用。利用溶解度差別的分離方法、利用分子大小不同的分離純化方法、 根據(jù)蛋白質(zhì)分子帶電性質(zhì)不同的分離方法、根據(jù)蛋白質(zhì)吸附性質(zhì)不同的分離方法、；利用蛋白質(zhì)的特異性配體分離方法親和層析，利用一些生物大分子可以和相應(yīng)的物質(zhì)特異而可逆的結(jié)合，如抗原和抗體、激素和受體、酶和抑制劑、酶和底物等，應(yīng)用是將要分離的物質(zhì)的特意的加上抗原片段，再讓待分離液通過帶抗體的硅膠層析柱，然后將吸附的物質(zhì)洗下，再講結(jié)合的抗原片段切除，即可得到較為純的產(chǎn)物。9. 以人 GM- CSF 為例，寫出獲得該基因工程重組蛋白純品的流程。技術(shù)路線-表達(dá)載體的構(gòu)建

8、、外源基因片段的分離-表達(dá)性重組體的構(gòu)建-轉(zhuǎn)化宿主菌-誘導(dǎo)表達(dá)-表達(dá)產(chǎn)物的鑒定-表達(dá)產(chǎn)物的分離-對粒細(xì)胞作用的體內(nèi)外實驗。引物設(shè)計-表達(dá)載體GM- CSF全基因 PCR 擴(kuò)增提取正常人外周血粒細(xì)胞總RNA，GM- CSF全基因的獲得，以該總RNA為模板，用寶生物公司的 BeaBEST 反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。以該反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，加入引物 P1，P2進(jìn)行第一次PCR。GM- CSF基因的獲得以GM- CSF全基因經(jīng)純化的PCR產(chǎn)物為模板，加入引物 P1，P2，再次PCR GM- CSF基因，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定。含腸激酶位點的 pThioHisA- - sTRAIL純化后的GM- CSF

9、PCR產(chǎn)物用 BamHI、EcoRI雙酶切。質(zhì)粒pThioHisA用同樣的酶雙酶切，膠回收酶切片段，T4 DNA連接酶分別連接經(jīng)雙酶切的片段GM- CSF和質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)化宿主菌BL21，篩選陽性克隆。小提質(zhì)粒，酶切鑒定(jindng)重組子，并對重組子進(jìn)行測序分析。3. 誘導(dǎo)(yudo)表達(dá)GM- CSF在大腸桿菌BL21中的誘導(dǎo)表達(dá)。3.0 mmol/LIPTG誘導(dǎo)6-8 h，表達(dá)達(dá)到高峰，經(jīng)薄層掃描目的蛋白約占菌體總蛋白的 39 左右。表達(dá)產(chǎn)物(chnw)部分可溶，其余形成包涵體。融合表達(dá)產(chǎn)物SDS- PAGE表觀分子量為32000 Dalton左右（實際分子量為35608.21Dalto

10、n）。GM- CSF融合蛋白的制備工程菌的培養(yǎng)：挑取陽性克隆，接種于200mL含100g/mL 氨芐青霉素的LB 培養(yǎng)基中，37 培養(yǎng)過夜。然后以10-20 的接種量擴(kuò)大培養(yǎng)，IPTG 誘導(dǎo)。超聲破碎菌體離心收獲的菌體按0.2g/mL 重懸于A 液(20mmol/L Tris-HCl pH8.0，0.2mol/L NaCl，5mmol/L咪唑)，浴中超聲破碎。12,000rpm/min 離心15min，分別取上清和沉淀進(jìn)行SDS分析目的蛋白以可溶性還是以包涵體形式存在。5.sTRAIL 融合蛋白的純化融合表達(dá)載體pThioHisA 在硫氧還蛋白融和段帶有組氨酸標(biāo)簽，用Ni 2+ 固相化的Che

11、latingSepharose Fast Flow 填料進(jìn)行親和層析。將可溶性表達(dá)產(chǎn)物（超聲破碎菌體的離心上清）與親和柱結(jié)合，用2 倍柱床體積以上的A 液過柱，至基線平穩(wěn)；用B 液 (A 液中加入咪唑至終濃度為50mmol/L) 梯度洗脫5 10 個柱體積，用AKATAExplore 進(jìn)行檢測，收集各洗脫峰。6.GM- CSF融合蛋白的腸激酶切割及純化：GM- CSF融合蛋白的腸激酶切割按 sTRAIL 融合蛋白：腸激酶不同體積的比例酶切，SDS- - PAGE 分析。GM- CSF非融合蛋白的純化以A 液（25mM pH7.0 的磷酸緩沖液）平衡 SP Sepharose FastFlow

12、離子交換柱 ，將酶切后的反應(yīng)液直接上柱，以B液（25mMpH7.0的磷酸緩沖液0.6M NaCl）梯度洗脫，收集洗脫峰，以分離除去融合頭。其中的目的峰再用分子篩 Sepharyl S- - 200 做進(jìn)一步純化及脫鹽處理。用 Bradford 法測定蛋白質(zhì)濃度，SDS- - PAGE分析檢測。GM- CSF 融合蛋白及非融合蛋白的 Western Blot 檢測第一抗體：兔抗人TRAIL 多克隆抗體，1:1000 稀釋；第二抗體：HRP 標(biāo)記的羊抗兔IgG 抗體，1:100001. 促進(jìn)粒細(xì)胞生長實驗2. 促粒細(xì)胞分裂實驗10.什么是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)？其基本(jbn)途徑如何？細(xì)胞特異識別外來信號分子

13、(fnz)，并轉(zhuǎn)化為細(xì)胞可識別的信號，經(jīng)系列級聯(lián)反應(yīng)，最終引起特異生物學(xué)效應(yīng)的過程，稱為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(signal transduction)，分離子通道受體、酶偶聯(lián)受體、G 蛋白偶聯(lián)受體通道信號傳導(dǎo)，G 蛋白偶聯(lián)受體通道信號傳導(dǎo)又分cAMP信號通路、cGMP信號通路、磷脂酰肌醇信號通路。11.請敘述肝細(xì)胞對胰高血糖素或腎上腺素的反應(yīng)(fnyng)過程。兩個同理，舉胰高血糖素的例子：胰高血糖素與受體結(jié)合-受體蛋白分子發(fā)生構(gòu)象上變化-受體與G蛋白s亞基結(jié)合-亞基與GDP 親和力下降，與GTP親和力增加，GTP 置換GDP-亞基變構(gòu)，與、分離，同時與受體分離（G蛋白至功能狀態(tài)）-活化的G蛋白與AC結(jié)合

14、，激活之-AC 催化ATP 分解形成cAMP（第二信使）cAMP 活化 cAMP 依賴性蛋白激酶A （ PKA）-使靶蛋白磷酸化-肝細(xì)胞糖原分解、糖異生、減少對葡萄糖的利用。12.什么是表觀遺傳學(xué)（Epigenetics）？它主要研究什么內(nèi)容？基因的DNA序列不發(fā)生改變的情況下，基因的表達(dá)水平與功能發(fā)生改變，并產(chǎn)生可遺傳的表型。（不依賴于DNA序列的遺傳現(xiàn)象）；研究內(nèi)容主要集中在三大方面：DNA甲基化修飾：基因選擇性轉(zhuǎn)錄表達(dá)的調(diào)控，非編碼RNA的調(diào)控作用：基因轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控，組蛋白修飾：蛋白質(zhì)的翻譯后修飾。13.什么是甲基化,在調(diào)控基因表達(dá)過程中起什么作用？DNA甲基化(DNA methylat

15、ion)是指在甲基化酶的作用下，將一個甲基添加在DNA分子的堿基上；DNA甲基化修飾決定基因表達(dá)的模式，即決定從親代到子代可遺傳的基因表達(dá)狀態(tài)，DNA甲基化抑制基因表達(dá)。14.什么是基因印記？它的主要特征是什么？父親和母親的基因組在個體發(fā)育中有著不同的影響，這種現(xiàn)象稱為基因組印記（genomic imprinting），由于源自某一親本的等位基因或它所在染色體發(fā)生表觀遺傳修飾，導(dǎo)致不同親本來源的兩個等位基因子代細(xì)胞中表達(dá)不同。在基因組中的這類現(xiàn)象就是基因組印記；1.每一個印記基因簇由一個印記控制元件（imprint control element,ICE）所調(diào)控，2.也稱為印記控制區(qū)域（imp

16、rint control region,ICR）或者印記中心（imprinting centre,IC）,3.絕大多數(shù)都有CpGislands,能夠發(fā)生DNA甲基化，4.在CpGislands內(nèi)或附近通常有成簇的、有向的重復(fù)片段。15.基本概念:siRNA & miRNA; Dicer protein; RISC;PTGS.siRNA：在RNAi的起始階段，加入的dsRNA或內(nèi)源性pre-miRNA被Dicer酶切割為19-23 nt長的小分子干擾dsRNA（smallinterferingRNAs, siRNAs），稱為引導(dǎo)RNAs；miRNA；大小約21-23個堿基的ssRNA，由具有發(fā)夾

17、結(jié)構(gòu)的約70-90個堿基的ssRNA前體 (pre-miRNA precursors)經(jīng)Dicer酶加工生成。非編碼RNA，參與調(diào)控基因表達(dá)，但其機制區(qū)別于siRNA介導(dǎo)的mRNA降解。具有高度的保守性，時序性和組織特異性；Dicer protein：RNase III家族成員之一，可特異識別dsRNA，依賴ATP逐步切割由外源導(dǎo)入或者由轉(zhuǎn)基因，病毒感染等各種方式引入的dsRNA(或 pri-miRNA),將RNA降解為3端有2個堿基突出的19-23bp的dsRNAs(siRNAs)；RISC：一種RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，通過與目標(biāo)mRNA完全或者部分的互補配對來實施切割或者翻譯抑制功能。siR

18、NA組裝siRISC，miRNA組裝miRISC。RISCs包括兩種類型：切割型和不切割型, 這由RISC當(dāng)中的AGO蛋白決定；PTGS：轉(zhuǎn)錄后基因沉默(Post-transcriptional Gene Silencing)，在基因轉(zhuǎn)錄后的水平上通過對靶RNA進(jìn)行特異性降解而使其失活。 16.請說明(shumng)RNAi的作用機制？1.RNAi的起始(q sh)階段：引導(dǎo)RNAs，加入的dsRNA或內(nèi)源性pre-miRNA被Dicer酶切割為干擾dsRNA，由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的ssRNA前體 (pre-miRNA precursors)經(jīng)Dicer酶加工生成miRNA，2.RNAi效應(yīng)階段：R

19、ISC形成并識別降解mRNA。17.請分析解釋(jish)Su Guo的實驗結(jié)果.Su Guo的實驗證明了導(dǎo)入一個目的基因的正義與反義RNA可以達(dá)到敲除某個基因的效果。因為該基因的野生型與突變型在胚芽時有對稱與不對稱的差異，所以她想從RNA共抑制現(xiàn)象（以前的研究結(jié)果）的基礎(chǔ)上實現(xiàn)產(chǎn)生變異的效果，但是由于當(dāng)時還沒有研究清楚到底是哪種RNA起到了抑制的作用，所以她同時導(dǎo)入了正義與反義RNA，她當(dāng)時的分析是反義的RNA可以特異性的與mRNA結(jié)合，從而阻止RNA的翻譯以及以后的步驟，當(dāng)然最后她成功了，用現(xiàn)在的科學(xué)成果進(jìn)行分析和解釋，由于她導(dǎo)入了正義與反義RNA，使得正義與反義RNA在細(xì)胞內(nèi)特異性的互補

20、形成了dsRNA，然后在被Dicer酶切割為干擾dsRNA，然后隨著RISC形成并識別降解mRNA。18.什么是基因表達(dá)（gene expression）？試述基因表達(dá)的特點及其調(diào)控對生物體的重要性。從DNA到蛋白質(zhì)的過程；組織特異性（tissue specificity）、階段特異性（stage specificity）、與環(huán)境相適應(yīng)，（一）適應(yīng)環(huán)境、維持生長和增值，（二）維持個體發(fā)育和分化。19.真核生物中，基因的表達(dá)受不同水平的調(diào)控，請列舉其中三種。轉(zhuǎn)錄前調(diào)控，轉(zhuǎn)錄調(diào)控，轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，翻譯調(diào)控，翻譯后調(diào)控。20.為什么說轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控(dio kn)是基因表達(dá)調(diào)控的中心環(huán)節(jié)？因為在最開始就

21、決定該基因是否表達(dá)，而不是等表達(dá)產(chǎn)物已經(jīng)合成后再決定是否需要的話，可以從源頭(yuntu)上節(jié)約原料，從而提高表達(dá)的效率。21.舉例說明DNA甲基化與腫瘤(zhngli)的關(guān)系。DNA甲基化能關(guān)閉某些基因的活性，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)，甲基化模式的混亂與異常發(fā)育和癌癥有關(guān)，腫瘤的甲基化狀態(tài)改變包括基因整體甲基化水平降低、正常非甲基化CpG島的高甲基化和維持甲基化模式的酶的調(diào)節(jié)失控，從而導(dǎo)致基因組的不穩(wěn)定（如染色體的不穩(wěn)定、可移動遺傳因子的激活、原癌基因的表達(dá)）和抑癌基因的不表達(dá)。22.簡述構(gòu)建基因打靶載體所需的基本DNA元件及其功能?；蛏舷掠斡型葱蛄?，用于配對要剔除的基因使用

22、；基因上下游還需要loxP片段，通過Cre酶水解并連接得到剔除基因的DNA序列；Neomycin R（新霉素A,新霉胺氨基苷類抗生素）基因位于要替換基因的相對位置，提供陽性對照，用于篩選替換成功的細(xì)胞；HSV-TK（單純皰疹病毒胸苷激酶 ）位于下游同源基因的下游，提供陰性對照，用于排除由于非同源重組產(chǎn)生的替換成功的細(xì)胞。23.為何在篩選靶基因敲除的胚胎干細(xì)胞時還需經(jīng)歷陰性篩選過程？簡述更昔洛韋（Ganciclovir）在胚胎干細(xì)胞陰性篩選中的作用機制。因為在重組的過程中還會產(chǎn)生非同源重組替換成功的細(xì)胞，而此細(xì)胞不是研究所需要的，故需要篩選后去除；外源添加更昔洛韋后（丙氧鳥苷），由于單純皰疹病毒

23、胸苷激酶基因的產(chǎn)物病毒胸苷激酶能將丙氧鳥苷磷酸化為三價磷酸鹽從而抑制細(xì)胞內(nèi)DNA合成，從而導(dǎo)致細(xì)胞的死亡，而同源重組替換成功的細(xì)胞因為沒有病毒胸苷激酶所以沒有抑制DNA合成的功能，使得細(xì)胞存活，這樣就能保證篩選的準(zhǔn)確性。24.什么是細(xì)胞凋亡(Apoptosis)？細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序死亡。細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用；它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。25.細(xì)胞凋亡有哪兩條主要的途徑？一、由死亡受體(Fas、TNFR）介導(dǎo)的外源途徑。在這條途徑中

24、，啟始caspase-8首先被激活；二、線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源途徑。在這條途徑中，啟始caspase-9首先被激活；細(xì)胞凋亡后期的共同途徑：效應(yīng)Caspase3的激活。 26.Bcl-2家族的分類和結(jié)構(gòu)特征？B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma/ leukemia-2 gene, Bcl-2)，Bcl-2家族成員分為兩類：一、抗細(xì)胞凋亡，如Bcl-2、Bcl-xL、Al、Bcl-w、Mcl-1。在這類分子中，都有Bcl-2同源區(qū)1-4 (Bcl-2 homology domains，BH1-BH4)的結(jié)構(gòu)。二、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在這類分子中，又分為兩個亞族：Bax亞族，如Bax、

25、Bak、Bok，有BH1、BH2和BH3的結(jié)構(gòu)；BH3-only亞族，如Bik、Bad、Bid、Bim，只有(zhyu)BH3的結(jié)構(gòu)(jigu)。27.P53基因在細(xì)胞(xbo)DNA損傷中的作用。p53的兩大功能：使細(xì)胞在G1期停滯。當(dāng)DNA損傷后，p53首先誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入G1期，抑制細(xì)胞增殖，直至損傷的DNA修復(fù)。一旦DNA不能被修復(fù)，p53就會活化那些誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的基因轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞發(fā)生凋亡。28.轉(zhuǎn)錄組及蛋白組的概念分別是什么？其研究內(nèi)容分別包括哪些方面？轉(zhuǎn)錄組（transcriptome）指生命單元（通常是一種細(xì)胞）所能轉(zhuǎn)錄出來的可直接參與蛋白質(zhì)翻譯的mRNA（編碼RNA）總和，而其他所

26、有非編碼RNA均可歸為RNA組（ RNome ），轉(zhuǎn)錄組學(xué)（transcriptomics）是在整體水平上研究細(xì)胞編碼基因轉(zhuǎn)錄情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的科學(xué)；蛋白質(zhì)組（ proteome）意思是Proteins expressed by a genome（基因組表達(dá)的所有蛋白質(zhì)），細(xì)胞、組織或機體在特定時間和空間上表達(dá)的所有蛋白質(zhì)即蛋白質(zhì)組（proteome），蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics）以蛋白質(zhì)組為研究對象，分析細(xì)胞內(nèi)動態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成、表達(dá)水平與修飾狀態(tài)，了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系，并在整體水平上研究蛋白質(zhì)調(diào)控的活動規(guī)律，故又稱為全景式蛋白質(zhì)表達(dá)譜（global protein ex

27、pression profile）分析。 29.如理利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白組學(xué)的方法篩選疾病相關(guān)基因？（寫出主要的檢測指標(biāo)及其實驗方法的名稱）轉(zhuǎn)錄組的研究方法：（一）微陣列雜交后用熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進(jìn)行掃描，（二）SAGE將9個堿基的標(biāo)簽集中于一個克隆中進(jìn)行測序（三）MPSS標(biāo)簽序列與長的連續(xù)分子連接在一起，便于克隆和序列分析。蛋白質(zhì)組學(xué):二維凝膠電泳 以2-DE分離為核心的研究路線：混合蛋白首先通過2-DE分離，然后進(jìn)行膠內(nèi)酶解，再用質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。以色譜分離為核心的技術(shù)路線：混合蛋白先進(jìn)行酶解，經(jīng)色譜或多維色譜分離后，對肽段進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析以實現(xiàn)蛋白的鑒定。雙向凝膠電泳利用蛋白質(zhì)的等電點和分子

28、量,蛋白質(zhì)的膠內(nèi)酶切.質(zhì)譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分離，然后測量各種離子譜峰的強度而實現(xiàn)分析目的的一種分析方法。30.簡述蛋白質(zhì)分子設(shè)計原理內(nèi)核假設(shè)。蛋白質(zhì)的獨特的折疊形式是由蛋白質(zhì)內(nèi)核中殘基的相互作用決定。（內(nèi)部十分保守的區(qū)域）Pr內(nèi)部都是密堆積（很少有空穴大到水分子可以結(jié)合一個水分子或惰性氣體），沒有重疊，所有內(nèi)部的氫鍵都是最大滿足的（主鏈和側(cè)鏈）。蛋白質(zhì)的氫鍵形成涉及一個交換反應(yīng)，溶劑鍵被蛋白質(zhì)鍵所取代疏水及親水基團(tuán)需要合理的分布在溶劑可及表面及不可及表面。分布代表疏水效應(yīng)的主要驅(qū)動力，金屬Pr中配位殘基的替換要滿足金屬配位幾何。要求圍繞金屬中心放置合適數(shù)目的蛋白質(zhì)側(cè)鏈或溶劑

29、分子，并符合正確的鍵長、鍵角以及整體的幾何。對于金屬Pr，圍繞金屬中心的第二殼層中的相互作用是重要的。氫鍵的第二殼層通常涉及與蛋白質(zhì)主鏈的相互作用。最優(yōu)的aa側(cè)鏈幾何排列。Pr側(cè)鏈構(gòu)象由空間兩個立體因素所決定(一是立體勢壘，二是aa的位置)結(jié)構(gòu)及功能的專一性。這是Pr設(shè)計最困難的問題。31.簡述蛋白質(zhì)分子(fnz)設(shè)計的原則1活性設(shè)計，2對專一性的設(shè)計，3Scaffold設(shè)計(框架(kun ji)，4疏水基團(tuán)與親水基團(tuán)需合理分布，5最優(yōu)的氨基酸側(cè)鏈幾何排列。32.結(jié)合你的專業(yè)，論述(lnsh)線粒體與醫(yī)學(xué)的關(guān)系。線粒體是營養(yǎng)物質(zhì)最終徹底氧化分解的場所,線粒體還是合成嘧啶、血紅素、鐵硫簇等的場所

30、,線粒體與細(xì)胞代謝、免疫、老化、凋亡、自噬等的信號途徑密切相關(guān)。線粒體異常與遺傳異質(zhì)的眾多疾病相關(guān)聯(lián)，累及各種器官系統(tǒng)，各個年齡段，幾乎覆蓋整個醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。線粒體與自由基損傷、細(xì)胞死亡、衰老、代謝病、神經(jīng)肌肉退行、心血管病、創(chuàng)傷、腫瘤、肥胖、糖尿病等的關(guān)系已成為研究熱點。線粒體失調(diào)與氧化損傷、代謝病和老年病密切相關(guān)，天然線粒體營養(yǎng)素和藥物可有效發(fā)揮預(yù)防和治療作用。線粒體保留的少量細(xì)菌和病毒祖先成分對抗生素敏感（如線粒體翻譯對氨基糖甙類和四環(huán)素敏感）。線粒體與運動、營養(yǎng)和藥物的更多關(guān)系還有待深入研究。分子水平出現(xiàn)問題也能導(dǎo)致疾病， 線粒體與衰老有關(guān)。33.線粒體遺傳有哪些特點？線粒體擁有獨特的基因

31、組及復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯系統(tǒng)。線粒體DNA是遺傳系統(tǒng)極度簡化的杰作。僅16.5kb的人mtDNA僅編碼2種rRNA、22種tRNA和13種肽。線粒體遺傳特點：半自主性、高突變率、遺傳密碼特殊、母系遺傳、遺傳瓶頸、閾值效應(yīng)、累加效應(yīng)。線粒體擁有特有的DNA聚合酶、RNA聚合酶和核糖體。使用簡化版遺傳密碼表，因類群而異，通常沒有1度和3度簡并密碼子，有4個終止密碼子。線粒體DNA是嚴(yán)格母系遺傳。精子線粒體不能進(jìn)入卵子，即使偶爾進(jìn)入，也會被降解。因此，動物體的mtDNA只來源于卵細(xì)胞。34.闡述單克隆抗體制備的基本原理，鼠源抗體在臨床應(yīng)用上存在哪些問題，如何用基因工程的方法對鼠源抗體進(jìn)行改造？單克隆抗體

32、是B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞雜交形成的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的，其重鏈和輕鏈所形成的結(jié)構(gòu)域可以識別和結(jié)合特異抗原。不能有效激活人體中補體和FC受體相關(guān)的效應(yīng)系統(tǒng)；被人體免疫系統(tǒng)所識別，產(chǎn)生HAMA（人抗鼠抗體反應(yīng)）效應(yīng)；在人體循環(huán)系統(tǒng)中很快被清除。人鼠嵌合抗體：用人 IgG 的恒定區(qū)取代小鼠IgG的恒定區(qū)，保留鼠單抗的可變區(qū)序列，形成一個人-鼠雜合的抗體。其研制程序快，可大幅度降低異源抗體的免疫原性，卻幾乎保持親本鼠單抗全部的特異性和親和力。另外，它還具有人抗體的效應(yīng)功能，如補體固定、 抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）等。人源化抗體：利用現(xiàn)有的大量已詳細(xì)分析過的小鼠抗體，取其與抗原直接接觸的那段抗體片段（互補決定區(qū)，CDR）與人的抗體框架嫁接，經(jīng)親和力重塑，可維持其特異性和大部分的親和力，同時幾乎完全去除免疫原性和毒副作用。全人抗體：基于噬菌體可把抗體片段表達(dá)在外膜的能力而建立一系列的抗體文庫，然后用目的抗原來篩選文庫中相應(yīng)的抗體片段，再經(jīng)體外加工可形成有功能的完全人抗體。35.闡述多肽類藥物的優(yōu)點以及風(fēng)險，根據(jù)(gnj)不同的風(fēng)險如何進(jìn)行改造？與 小分子化合物藥物相比(xin b)，肽類藥