動(dòng)物肝臟中DNA的提取

1、實(shí)驗(yàn)課程：動(dòng)物肝臟中DNA的提取學(xué)生姓名：學(xué)級(jí)學(xué)長(zhǎng)學(xué)號(hào)：560311xxxx專(zhuān)業(yè)班級(jí)：食科xxx班2017年5月2日實(shí)驗(yàn)背景：DN砸取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?；瘜W(xué)方式如異硫匐酸服法、堿裂解法。生物方式：酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有；硅質(zhì)材料、陰離子交換樹(shù)脂等。真核生物基因組DNAT泛應(yīng)用在動(dòng)植物的遺傳育種、基因圖譜的構(gòu)建、品種鑒定、物種形成和系統(tǒng)演化等方面的研究中.無(wú)論是基因工程，還是蛋白質(zhì)工程，核酸分子都是這些技術(shù)應(yīng)用所涉及的主要對(duì)象，所以DNA的分離與提取是分子生物學(xué)研究中重要的基本技術(shù).哺乳動(dòng)物DNA的分離通常是在存在EDTA

2、及SDS去污劑條件下用蛋白酶K消化細(xì)胞，隨后用酚抽提蛋白質(zhì)而實(shí)現(xiàn)的一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握用濃鹽法從動(dòng)物組織中提取DNA的原理與技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理核酸和蛋白質(zhì)在生物體中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高濃度鹽溶液，但在0.14M的鹽溶液中溶解度很低，而RNP則可溶于低鹽溶液，因此可利用不同濃度的NaCl溶液將其從樣品中分別抽提出來(lái)。將抽提得到的DNP用SDS處理可將其分離成DNA和蛋白質(zhì)，用氯仿-異戊醇將蛋白質(zhì)沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可將其呈纖維狀析出。DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)生成藍(lán)色物質(zhì)，因此可用二苯胺鑒定DNA。實(shí)驗(yàn)儀器和材料1、實(shí)驗(yàn)儀器量筒離心機(jī)離

3、心管移液槍恒溫水浴鍋研缽電子天平2、實(shí)驗(yàn)試劑和材料新鮮豬肝0.1mol/LNaCl-0.05mol/L檸檬酸鈉溶液95%乙醇NaCl固體5%SD珞液V（氯仿）：V（異戊醇）20:1的混合液四、實(shí)驗(yàn)步驟1、稱(chēng)取2.2g質(zhì)量的豬肝，加入2倍肝重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L檸檬酸鈉緩沖液弁用碾碎磨碎；將勻漿倒入兩個(gè)10毫升離心管中，在4000r/min下離心10min,沉淀中再加入8ml緩沖液于4000r/min離心5min；棄上清，取沉淀。2、向沉淀中加入檬酸鈉緩沖液至10ml,搖勻后將溶液平均分裝到2個(gè)10毫升離心管中。每個(gè)管分別加入2.5ml氯仿-異戊醇混合液、0.5mlSD

4、S,振蕩30mi;然后緩慢分別加入固體NaCl0.45g,使其最終濃度為1mol/L；在4000r/min離心5min,用移液槍取上清水相，記錄體積。3、在上述水相溶液中加入等體積的冷95叱醇，邊加邊用玻棒慢慢朝一個(gè)方向攪動(dòng)，將纏繞在玻棒上的凝膠狀物用濾紙吸去多余的乙醇即得DNAS品。取1ml溶液于試管中，加入等量二苯胺溶液進(jìn)行DN濯定，觀察顏色變化。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、數(shù)據(jù)記錄：稱(chēng)取豬肝2.2g,DNA夜體積7.8ml.2、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象離心后分為三層滴加冷乙醇時(shí)，溶液出現(xiàn)白色懸浮物，用玻璃棒攪拌后，棒上出現(xiàn)白色絮狀物（DNA。加入二苯胺后，DNA容液呈現(xiàn)藍(lán)色六、誤差分析和思考題1、誤差分析(1)豬肝較滑，難以研磨充分；(2)離心液倒出時(shí)可能損失部分DNA;(3)部分DNA研磨或搖晃時(shí)被損壞、斷裂2、思考題實(shí)驗(yàn)中的乙醇、SDS、氯仿-異戊醇、NaCl、檸檬酸分別有什么作用？答：加鹽溶解RNP,使得DNP留在沉淀物中。力口SDS使蛋白質(zhì)變性。加氯仿-異戊醇使得蛋白質(zhì)和DNA分離。力口NaCl調(diào)節(jié)濃度使得DNA溶解