血常規(guī)(血細(xì)胞分析儀、直方圖)

1、 血液檢查血液檢查 海醫(yī)附院檢驗(yàn)科海醫(yī)附院檢驗(yàn)科 潘潘 婉婉第四篇第四篇 實(shí)驗(yàn)診斷實(shí)驗(yàn)診斷 血常規(guī)檢查血常規(guī)檢查 即全血細(xì)胞分析，可以對(duì)感染、炎癥、手術(shù)后、即全血細(xì)胞分析，可以對(duì)感染、炎癥、手術(shù)后、血液系統(tǒng)疾病、肝脾病等進(jìn)行輔助診斷、監(jiān)測(cè)血液系統(tǒng)疾病、肝脾病等進(jìn)行輔助診斷、監(jiān)測(cè)治療效果等治療效果等。標(biāo)本采集與要求標(biāo)本采集與要求 抗凝劑抗凝劑 ：EDTA-K2 靜脈采血方法靜脈采血方法 ：4小時(shí)內(nèi)測(cè)定小時(shí)內(nèi)測(cè)定 毛細(xì)血管采血方法毛細(xì)血管采血方法 ：半小時(shí)內(nèi)測(cè)定：半小時(shí)內(nèi)測(cè)定 手指血與靜脈血有差異，條件允許盡可能靜手指血與靜脈血有差異，條件允許盡可能靜脈采血脈采血 盡可能同一體位（血紅蛋白、血細(xì)胞

2、比容、盡可能同一體位（血紅蛋白、血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)于站位時(shí)增加）、一定時(shí)間和近紅細(xì)胞計(jì)數(shù)于站位時(shí)增加）、一定時(shí)間和近似生理?xiàng)l件下采血似生理?xiàng)l件下采血血細(xì)胞分析儀檢測(cè)指標(biāo)與臨床應(yīng)用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)指標(biāo)與臨床應(yīng)用血細(xì)胞分析儀 血細(xì)胞分析儀實(shí)質(zhì)上是指血細(xì)胞分析儀實(shí)質(zhì)上是指對(duì)一定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異對(duì)一定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器，包括血質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器，包括血細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類(lèi)、血紅蛋白測(cè)細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類(lèi)、血紅蛋白測(cè)定及網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等眾多分定及網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等眾多分析項(xiàng)目，是臨床檢驗(yàn)工作中最析項(xiàng)目，是臨床檢驗(yàn)工作中最常用的儀器。常用的儀器。 40年代末年代末，美國(guó)的庫(kù)爾特，美國(guó)的庫(kù)爾特

3、(W.H.Coulter)發(fā)明了電阻抗法發(fā)明了電阻抗法粒子計(jì)數(shù)技術(shù)的設(shè)計(jì)專(zhuān)利。粒子計(jì)數(shù)技術(shù)的設(shè)計(jì)專(zhuān)利。50年代初年代初，第一臺(tái)血細(xì)胞分析儀，第一臺(tái)血細(xì)胞分析儀(Coulter A型型)應(yīng)用于臨應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。當(dāng)時(shí)這種儀器為一個(gè)通道，僅能進(jìn)行紅細(xì)胞、床檢驗(yàn)。當(dāng)時(shí)這種儀器為一個(gè)通道，僅能進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)，故稱(chēng)為血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或血球計(jì)數(shù)儀。白細(xì)胞計(jì)數(shù)，故稱(chēng)為血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或血球計(jì)數(shù)儀。60年代年代，在原基礎(chǔ)上增加一個(gè)比色系統(tǒng)，可同時(shí)測(cè)定白，在原基礎(chǔ)上增加一個(gè)比色系統(tǒng)，可同時(shí)測(cè)定白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白濃度、平均紅細(xì)胞體積細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白濃度、平均紅細(xì)胞體積和血細(xì)胞比容。和血細(xì)胞比容。

4、70年代年代，開(kāi)發(fā)了血小板計(jì)數(shù)，此時(shí)可做全血細(xì)胞計(jì)數(shù)。，開(kāi)發(fā)了血小板計(jì)數(shù)，此時(shí)可做全血細(xì)胞計(jì)數(shù)。70年代末年代末80年代中年代中，根據(jù)白細(xì)胞大小不同而產(chǎn)生的阻抗值，根據(jù)白細(xì)胞大小不同而產(chǎn)生的阻抗值或散射量的不同，或散射量的不同，已能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)已能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)(兩分群、三分群兩分群、三分群或五分類(lèi)或五分類(lèi))，且一次可報(bào)告，且一次可報(bào)告1314個(gè)分析參數(shù)及紅細(xì)胞個(gè)分析參數(shù)及紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)三個(gè)直方圖。計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)三個(gè)直方圖。80年代末年代末，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，開(kāi)發(fā)了網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，開(kāi)發(fā)了網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。90年代初年代初，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)

5、應(yīng)用到血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上。，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用到血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上。90年代中期年代中期研制出的多功能、多參數(shù)、多分類(lèi)全自動(dòng)血細(xì)研制出的多功能、多參數(shù)、多分類(lèi)全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及檢測(cè)的全自動(dòng)化，把臨床血液學(xué)檢驗(yàn)提高到胞分析儀及檢測(cè)的全自動(dòng)化，把臨床血液學(xué)檢驗(yàn)提高到了一個(gè)全新的水平。了一個(gè)全新的水平。按自動(dòng)化程度可分為按自動(dòng)化程度可分為半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀和全自動(dòng)血細(xì)胞分半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀和全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀。析儀。 半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀需在主機(jī)外匹配稀釋器，采集的血標(biāo)半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀需在主機(jī)外匹配稀釋器，采集的血標(biāo)本經(jīng)稀釋器預(yù)稀釋后再上機(jī)檢測(cè)。這類(lèi)儀器工作效率低，吸樣本經(jīng)稀釋器預(yù)稀釋后再上機(jī)檢測(cè)。這

6、類(lèi)儀器工作效率低，吸樣準(zhǔn)確性差，多為手工加溶血素、混勻等，其加入量及放置時(shí)間、準(zhǔn)確性差，多為手工加溶血素、混勻等，其加入量及放置時(shí)間、因人為因素，隨機(jī)誤差較大，不利于質(zhì)控，并且易發(fā)生因人為因素，隨機(jī)誤差較大，不利于質(zhì)控，并且易發(fā)生“半堵半堵孔孔”或或“堵孔堵孔”現(xiàn)象?，F(xiàn)象。9090年代以來(lái)，在發(fā)達(dá)國(guó)家已被逐步淘汰，年代以來(lái)，在發(fā)達(dá)國(guó)家已被逐步淘汰，國(guó)內(nèi)用戶(hù)也為數(shù)不多，趨于淘汰。國(guó)內(nèi)用戶(hù)也為數(shù)不多，趨于淘汰。1.血細(xì)胞分析儀分型 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀運(yùn)用了較先進(jìn)的計(jì)算機(jī)技術(shù)和機(jī)運(yùn)用了較先進(jìn)的計(jì)算機(jī)技術(shù)和機(jī)械系統(tǒng)，菜單式操作程序，條碼閱讀，自動(dòng)吸取樣品，血械系統(tǒng)，菜單式操作程序，條

7、碼閱讀，自動(dòng)吸取樣品，血液在機(jī)器內(nèi)部自動(dòng)稀釋?zhuān)矢?，檢測(cè)量準(zhǔn)確，有利于質(zhì)液在機(jī)器內(nèi)部自動(dòng)稀釋?zhuān)矢?，檢測(cè)量準(zhǔn)確，有利于質(zhì)控，減少了操作者實(shí)驗(yàn)室感染的幾率。且大部分采用表面控，減少了操作者實(shí)驗(yàn)室感染的幾率。且大部分采用表面活性劑法測(cè)血紅蛋白，避免了氰化物對(duì)環(huán)境的污染，是全活性劑法測(cè)血紅蛋白，避免了氰化物對(duì)環(huán)境的污染，是全面取代半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的必然趨勢(shì)。目前還有將全自面取代半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的必然趨勢(shì)。目前還有將全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀與自動(dòng)涂片染色機(jī)、電腦及應(yīng)用軟件組合動(dòng)血細(xì)胞分析儀與自動(dòng)涂片染色機(jī)、電腦及應(yīng)用軟件組合而成的血液分析工作站，將多臺(tái)全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、全而成的血液分析工作站，將多

8、臺(tái)全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、全自動(dòng)網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀、自動(dòng)涂片染色機(jī)、機(jī)械連接系統(tǒng)、自動(dòng)網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀、自動(dòng)涂片染色機(jī)、機(jī)械連接系統(tǒng)、電腦、高性能應(yīng)用軟件組合為一體的血液分析流水線（如電腦、高性能應(yīng)用軟件組合為一體的血液分析流水線（如HST-330HST-330模塊式全自動(dòng)血液分析流水線）等。模塊式全自動(dòng)血液分析流水線）等。按檢測(cè)原理按檢測(cè)原理電容型電容型：通過(guò)改變兩電極之間電容量，獲得脈沖信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù)。：通過(guò)改變兩電極之間電容量，獲得脈沖信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù)。光電型光電型：利用細(xì)胞和稀釋液對(duì)光的吸收度不同，使光敏元件在細(xì)胞：利用細(xì)胞和稀釋液對(duì)光的吸收度不同，使光敏元件在細(xì)胞通過(guò)時(shí)產(chǎn)生脈沖信號(hào)而計(jì)數(shù)。通過(guò)時(shí)

9、產(chǎn)生脈沖信號(hào)而計(jì)數(shù)。激光型激光型：細(xì)胞受到激光的照射產(chǎn)生光吸收、光散射、發(fā)射熒光，得：細(xì)胞受到激光的照射產(chǎn)生光吸收、光散射、發(fā)射熒光，得到光學(xué)的、電子的信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù)。到光學(xué)的、電子的信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù)。電阻抗型電阻抗型：利用血細(xì)胞的電阻大于電解質(zhì)溶液：利用血細(xì)胞的電阻大于電解質(zhì)溶液( (稀釋液稀釋液) )的電阻，細(xì)的電阻，細(xì)胞通過(guò)微孔時(shí)兩電極之間的阻抗值增大，產(chǎn)生電壓脈沖信號(hào)而進(jìn)胞通過(guò)微孔時(shí)兩電極之間的阻抗值增大，產(chǎn)生電壓脈沖信號(hào)而進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。國(guó)內(nèi)產(chǎn)品均為電阻抗型。行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。國(guó)內(nèi)產(chǎn)品均為電阻抗型。聯(lián)合檢測(cè)型聯(lián)合檢測(cè)型：采用多種現(xiàn)代高科技技術(shù)，如利用電阻抗、激光、高：采用多

10、種現(xiàn)代高科技技術(shù)，如利用電阻抗、激光、高頻電磁波、流式細(xì)胞術(shù)和化學(xué)染色、特殊溶血?jiǎng)┑榷喾轿宦?lián)合檢頻電磁波、流式細(xì)胞術(shù)和化學(xué)染色、特殊溶血?jiǎng)┑榷喾轿宦?lián)合檢測(cè)同一個(gè)血細(xì)胞。此類(lèi)儀器功能多，特異性強(qiáng)、速度快、獲得參測(cè)同一個(gè)血細(xì)胞。此類(lèi)儀器功能多，特異性強(qiáng)、速度快、獲得參數(shù)多、對(duì)環(huán)境污染小。數(shù)多、對(duì)環(huán)境污染小。2.2.電阻抗法血細(xì)胞分析儀電阻抗法血細(xì)胞分析儀 血細(xì)胞與等滲電解質(zhì)溶液相比為相對(duì)的不良導(dǎo)體，血細(xì)胞與等滲電解質(zhì)溶液相比為相對(duì)的不良導(dǎo)體，其電阻值大于稀釋液的電阻值。當(dāng)血細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)器其電阻值大于稀釋液的電阻值。當(dāng)血細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)器小孔管微孔的孔徑感受區(qū)時(shí)，檢測(cè)器內(nèi)外電極之間的小孔管微孔的孔徑感受

11、區(qū)時(shí)，檢測(cè)器內(nèi)外電極之間的恒流源電路上電阻值瞬間增大，造成兩極之間電壓的恒流源電路上電阻值瞬間增大，造成兩極之間電壓的變化，產(chǎn)生一個(gè)電壓脈沖信號(hào)。每次檢測(cè)中產(chǎn)生的脈變化，產(chǎn)生一個(gè)電壓脈沖信號(hào)。每次檢測(cè)中產(chǎn)生的脈沖信號(hào)數(shù)，即相當(dāng)于檢測(cè)出的細(xì)胞數(shù)。沖信號(hào)數(shù)，即相當(dāng)于檢測(cè)出的細(xì)胞數(shù)。 操作時(shí)，位于小孔兩側(cè)的操作時(shí)，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生恒定電流。根據(jù)歐姆電極產(chǎn)生恒定電流。根據(jù)歐姆定律電壓變化與電阻變化成正定律電壓變化與電阻變化成正比，電阻值又同細(xì)胞體積成正比，電阻值又同細(xì)胞體積成正比，比，血細(xì)胞體積越大，電壓越血細(xì)胞體積越大，電壓越高，高，在甄別器上的在甄別器上的脈沖幅度就脈沖幅度就越大越大，各種大

12、小不同細(xì)胞產(chǎn)生，各種大小不同細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖信號(hào)分別送入儀器內(nèi)電的脈沖信號(hào)分別送入儀器內(nèi)電腦的各個(gè)通道，經(jīng)運(yùn)算得出各腦的各個(gè)通道，經(jīng)運(yùn)算得出各種細(xì)胞參數(shù)。目前，多數(shù)儀器種細(xì)胞參數(shù)。目前，多數(shù)儀器在給出細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果的同時(shí)還在給出細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果的同時(shí)還提供細(xì)胞群體大小分布情況圖提供細(xì)胞群體大小分布情況圖形，稱(chēng)之為形，稱(chēng)之為細(xì)胞體積直方圖細(xì)胞體積直方圖。 血細(xì)胞分析儀在進(jìn)行細(xì)胞分析時(shí)，將每個(gè)細(xì)胞的脈沖血細(xì)胞分析儀在進(jìn)行細(xì)胞分析時(shí)，將每個(gè)細(xì)胞的脈沖根據(jù)其體積大小分配并存儲(chǔ)在相應(yīng)的體積通道中，每個(gè)通道根據(jù)其體積大小分配并存儲(chǔ)在相應(yīng)的體積通道中，每個(gè)通道收集的數(shù)據(jù)被統(tǒng)計(jì)出相對(duì)數(shù)，表示在收集的數(shù)據(jù)被統(tǒng)計(jì)出相對(duì)數(shù)

13、，表示在Y Y軸上，體積數(shù)據(jù)以飛軸上，體積數(shù)據(jù)以飛升升(fl)(fl)為單位，表示在為單位，表示在X X軸上。可將白細(xì)胞體軸上?？蓪准?xì)胞體積從積從3030450fl450fl分為分為256256個(gè)通道，每個(gè)通道個(gè)通道，每個(gè)通道1.64fl1.64fl，依據(jù)體積大小分別將其，依據(jù)體積大小分別將其放在不同的通道中，得到白細(xì)胞體積分布直方圖。初步確認(rèn)：放在不同的通道中，得到白細(xì)胞體積分布直方圖。初步確認(rèn)：第一群是小細(xì)胞區(qū)，主要是淋巴細(xì)胞，體積在第一群是小細(xì)胞區(qū)，主要是淋巴細(xì)胞，體積在353590fl90fl之間；之間；第二群是中間細(xì)胞群，主要是單核細(xì)胞，體積在第二群是中間細(xì)胞群，主要是單核細(xì)胞，體

14、積在9090160fl160fl，；第三群為大細(xì)胞區(qū)，主要是中性粒細(xì)胞，它分葉，；第三群為大細(xì)胞區(qū)，主要是中性粒細(xì)胞，它分葉多，顆粒多，體積可大至多，顆粒多，體積可大至160fl160fl以上。以上。中間細(xì)胞中間細(xì)胞 血小板和紅細(xì)胞共用一個(gè)小孔管。正常人紅細(xì)胞體積和血小板血小板和紅細(xì)胞共用一個(gè)小孔管。正常人紅細(xì)胞體積和血小板體積有明顯的界限。因此血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確容易。當(dāng)血細(xì)胞懸液中含有體積有明顯的界限。因此血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確容易。當(dāng)血細(xì)胞懸液中含有異常血細(xì)胞（如小紅細(xì)胞）時(shí)，劃分界限不清。為使血小板計(jì)數(shù)有較異常血細(xì)胞（如小紅細(xì)胞）時(shí)，劃分界限不清。為使血小板計(jì)數(shù)有較高的準(zhǔn)確性，計(jì)算機(jī)對(duì)血小板和紅細(xì)胞

15、分布圖進(jìn)行判斷，將血小板計(jì)高的準(zhǔn)確性，計(jì)算機(jī)對(duì)血小板和紅細(xì)胞分布圖進(jìn)行判斷，將血小板計(jì)數(shù)的上限閾值判定線放在紅細(xì)胞和血小板分布圖交叉部分的最低處計(jì)數(shù)的上限閾值判定線放在紅細(xì)胞和血小板分布圖交叉部分的最低處計(jì)數(shù)數(shù) 。 各項(xiàng)紅細(xì)胞指數(shù)的檢測(cè)原理各項(xiàng)紅細(xì)胞指數(shù)的檢測(cè)原理: :根據(jù)儀器檢測(cè)的根據(jù)儀器檢測(cè)的RBCRBC、HCTHCT和和HbHb的數(shù)據(jù)，經(jīng)儀器內(nèi)存程序換算出紅細(xì)胞平均體積的數(shù)據(jù)，經(jīng)儀器內(nèi)存程序換算出紅細(xì)胞平均體積(MCV)(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白的含量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白的含量(MCH)(MCH)和紅細(xì)胞平均血和紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度紅蛋白濃度(MCHC)(MCHC)。 紅細(xì)胞體積分

16、布寬度紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)(RDW)由血細(xì)胞分析儀在檢測(cè)紅由血細(xì)胞分析儀在檢測(cè)紅細(xì)胞數(shù)量的過(guò)程中細(xì)胞數(shù)量的過(guò)程中 , ,同時(shí)測(cè)量紅細(xì)胞體積大小的差異獲得，同時(shí)測(cè)量紅細(xì)胞體積大小的差異獲得，是反映外周血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)。是反映外周血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)。RDWRDW能直接、客能直接、客觀、及時(shí)地反映紅細(xì)胞大小不等的程度，對(duì)貧血的診斷有觀、及時(shí)地反映紅細(xì)胞大小不等的程度，對(duì)貧血的診斷有重要意義。重要意義。 血紅蛋白測(cè)定原理血紅蛋白測(cè)定原理:在稀釋的血液中加入溶在稀釋的血液中加入溶血?jiǎng)┖蠹t細(xì)胞被溶解，釋放出血紅蛋白血?jiǎng)┖蠹t細(xì)胞被溶解，釋放出血紅蛋白(Hb)(Hb)，后，后者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成HbHb衍生物，進(jìn)入衍生物，進(jìn)入HbHb測(cè)試系統(tǒng)，在特定波長(zhǎng)測(cè)試系統(tǒng)，在特定波長(zhǎng)( (一般在一般在530530550nm)550nm)下下比色，吸光度的變化與液體中比色，吸光度的變化與液體中H H含量成正比，儀器含量成正比，儀器便可顯示其濃度。便可顯示其濃度。3.3.血細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用血細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用 直方圖是血細(xì)胞