生物制藥技術(shù)復(fù)習(xí)題

1、生物制藥技術(shù)復(fù)習(xí)題生物制藥工藝學(xué) 習(xí)題集生物藥物概述填空 :、我國(guó)藥物的三大藥源指的是化學(xué)藥物、生物藥物、中藥。 12、現(xiàn)代生物藥物已形成四大類(lèi)型，包括基因重組多肽和蛋白質(zhì)、基因藥物、天然生化藥物、合成與部分合成的生物藥物。、請(qǐng)寫(xiě)出下列藥物英文的中文全稱(chēng):IFN(Interferon) 干擾素、IL(Interleukin) 白介素、 CSF(Colony 3Stimulating Factor) 集落刺激因子、 EPO(Erythropoietin) 促紅細(xì)胞生成素、 EGF(Epidermal Growth Factor) 表皮生長(zhǎng)因子、 NGF(Nerve Growth Factor)

2、神經(jīng)生 長(zhǎng)因子、 rhGH(Recombinant Human GrowthHormone)重組人生長(zhǎng)激素、Ins(Insulin)胰島素、HCG(Human Choriogonadotrophin)人絨毛膜促性腺激素、LH促黃體生成素、SODS氧化物歧 化酶、 tPA 組織纖溶酶原激活物4、常用的B-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素有 青霉素、頭抱菌素；氨基糖甘類(lèi)抗生素有鏈霉 素 ; 大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素有紅霉素 ; 四環(huán)類(lèi)抗生素有土霉素 ; 多肽類(lèi)抗生素有桿菌肽; 多烯類(lèi)抗生素有兩性霉B; 蒽環(huán)類(lèi)抗生素有阿霉素。5、嵌合抗體是指用人源抗體恒定區(qū)替換鼠源抗體恒定區(qū)，保留抗體可變區(qū); 人源化抗體是指抗體可變區(qū)中僅

3、CDR(決定簇互補(bǔ)區(qū))為鼠源，具FR(骨架區(qū))及恒定 區(qū)均來(lái)自人源。6、基因工程技術(shù)中常用的基因載體有質(zhì)粒、噬菌體 (phage) 、黏粒 (cosmid) 、 病毒載體等。 選擇題 :1、以下能用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的藥物為(B)A、維生素B、生長(zhǎng)素C、肝素D、鏈霉素2、下面哪一種藥物屬于多糖類(lèi)生物藥物 ( C )A洛伐他汀B、干擾素C、肝素D、細(xì)胞色素C3、能用于防治血栓的酶類(lèi)藥物有( D )A、SOD B胰島素C、L-天冬酰胺酶D、尿激酶4、環(huán)孢菌素是微生物產(chǎn)生的 ( A )A免疫抑制劑B、酶類(lèi)藥物C、酶抑制劑D、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素5、下列屬于多肽激素類(lèi)生物藥物的是( D )A、ATP R四

4、氫葉酸C、透明質(zhì)酸D、降鈣素6、蛋白質(zhì)工程技術(shù)改造的速效胰島素機(jī)理是( D )1A.將豬胰島素B30位改造為丙氨酸，使之和人胰島素序列一致B.將A21位替換成甘氨酸，B鏈末端增加兩個(gè)精氨酸，使之在 pH4溶液中可溶C.將B29位賴(lài)氨酸用長(zhǎng)鏈脂肪酸修飾，改變其皮下擴(kuò)散和吸收速度D.將人胰島素B28位與B29位氨基酸互換，使之不易形成六聚體名詞解釋 :藥物 Medicine(remedy): 用于預(yù)防、治療或診斷疾病或調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能、促進(jìn)機(jī)體康復(fù)保健的物質(zhì)，有4 大類(lèi) : 預(yù)防藥、治療藥、診斷藥和康復(fù)保健藥。生物藥物 (biopharmaceutics): 是以生物體、生物組織或其成份為原料(

5、包括組織、細(xì)胞、細(xì)胞器、細(xì)胞成分、代謝、排泄物 ) 綜合應(yīng)用生物學(xué)、物理化學(xué)與現(xiàn)代藥學(xué)的原理與方法加工制成的藥物 基因藥物 (gene medicine): 是以基因物質(zhì)(RNA或DNAS其#J生物)作為治療的物質(zhì)基礎(chǔ)，包括基因治療用的重組目的DNAt段、重組疫苗、反義藥物和核酶等反義藥物：是以人工合成的十至幾十個(gè)反義寡核甘酸序列，它能與模板DNA或mRNA：補(bǔ)形成穩(wěn)定的雙鏈結(jié)構(gòu)，抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄和mRN副譯，從而達(dá)到抗月中瘤和抗病毒作用生物制品 （biologics）: 是應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料

6、制備的，用于人類(lèi)疾病預(yù)防、治療和診斷的藥品RNArF涉（RNAi, RNA interference）:是指在生物體細(xì)胞內(nèi)，dsRN聞I起同源mRNAfi特異性降解，因而抑制相應(yīng)基因表達(dá)的過(guò)程siRNA （small interfering RNA）:是一種小 RNAb子（21-25 核甘酸），由Dicer（RNAase ?家族中對(duì)雙鏈RNAM有特異性的酶）加工而成。siRNA是siRISC （RNA-induced silencing complex 由核酸內(nèi)切酶、核酸外切酶、解旋酶等構(gòu)成，作用是對(duì)靶mRNAS行識(shí)別和切割）的主要成員，激發(fā)與之互補(bǔ)的目標(biāo)mRNA勺沉默問(wèn)答題基因重組藥物與基因

7、藥物有什么區(qū)別 ,答:基因重組藥物是指應(yīng)用重組 DNA技術(shù)（包括基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)） 制造的重組多肽、蛋白質(zhì)類(lèi)藥物和疫苗、單克隆抗體與細(xì)胞因子等，藥物的化學(xué)成分屬于多肽或蛋白質(zhì)；基因藥物是以基因物質(zhì)（RNA或DNAS其4J生物）作為治療的 物質(zhì)基礎(chǔ)，包括基因治療用的重組目的DNAt段、重組疫苗、反義藥物和核酶等，藥物的化學(xué)成分為核酸或其衍生物。生物藥物有那些作用特點(diǎn) ,2答:1） 藥理學(xué)特性有:藥理活性高 ; 治療針對(duì)性強(qiáng) ; 毒副作用較少，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高 ;生理副作用常有發(fā)生等。 2） 理化特性有: 生物材料中的有效物質(zhì)含量低，雜質(zhì)種類(lèi)多且含量相對(duì)較高 ; 生物活性物質(zhì)組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜，穩(wěn)

8、定性差 ; 生物材料易染菌，腐敗 生物藥物制劑有特殊要求?；蚬こ趟幬镏饕心膸最?lèi), 試舉例說(shuō)明。答 : 基因工程藥物是指應(yīng)用基因工程或蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造的重組活性多肽、蛋白質(zhì)及其修飾物，包括:1） 重組細(xì)胞因子類(lèi): 如干擾素 （IFN） 、白介素 （IL） 和腫瘤壞死因子（TNF）;2）重組生長(zhǎng)因子類(lèi)：如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）, 以及促進(jìn)造血系統(tǒng)的生長(zhǎng)因子：如促紅細(xì)胞生成素（EPO）、集落刺?因子等（CSF）；3） 重組多肽與蛋白質(zhì)類(lèi)激素 : 如重組人胰島素 （rhInsulin） 、重組人生長(zhǎng)激素等（rhGH）;4）心血管病治療劑及酶制劑：如水蛭素、tPA（組織纖溶

9、酶原激活物）、天冬 酰胺酶、超氧化物歧化酶（SOD污o 5）重組疫苗及單抗制品：如重組乙肝表面抗原疫 苗（酵母 ） 、腫瘤疫苗等。第二章 生物制藥工藝技術(shù)基礎(chǔ)一、填空題1、從生物材料中提取天然大分子藥物時(shí)，常采用的措施有采用緩沖系統(tǒng)、添加保護(hù)劑、抑制水解酶作用等。2、生化活性物質(zhì)濃縮可采用的方法有鹽析濃縮、有機(jī)溶劑沉淀濃縮、超濾濃縮、真空減壓濃縮或薄膜濃縮、用葡聚糖凝膠濃縮、用聚乙二醇濃縮。3、生化活性物質(zhì)常用的干燥方法有減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥。4、冷凍干燥是在低溫、低壓條件下，利用水的升華性能而進(jìn)行的一種干燥方法。5、微生物菌種的分離和純化可以用的方法有平板劃線法、稀釋涂布平板法。6、

10、微生物菌種的自然選育是指利用微生物在一定條件下產(chǎn)生自發(fā)突變的原理，通過(guò)分離、篩選排除衰變型菌落，選擇維持原有生產(chǎn)水平的菌株。7、誘變時(shí)選擇出發(fā)菌株時(shí)應(yīng)考慮出發(fā)菌株的穩(wěn)定性、選用具備某種優(yōu)良特性、對(duì)誘變劑敏感、菌種的生理狀態(tài)及生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)間等問(wèn)題。8、目前常用的誘變劑可分為物理誘變因子、化學(xué)誘變劑、生物誘變因子三大類(lèi)。9、常用的菌種保藏方法有：斜面低溫保藏法、液體石蠟封藏法、冷凍干燥保藏法、液氮超低溫保藏法、甘油保藏法、沙土管保藏等。10、微生物生長(zhǎng)需要的六大營(yíng)養(yǎng)要素是碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、水。11、生物藥物制備過(guò)程中，常用的滅菌及除菌方法有 ：加熱滅菌、輻射滅 菌（紫外殺菌）、介質(zhì)

11、過(guò)濾除菌、化學(xué)滅菌法。312、獲得具有遺傳信息的目的基因的方法有鳥(niǎo)槍克隆法（DNA文庫(kù)）、cDNW庫(kù)法、化學(xué)合成法、PCFRfco13、PC時(shí)3個(gè)基本反應(yīng)組成，即高溫變性、低溫退火、適溫延伸。14、基因工程中原核表達(dá)常用的宿主有大腸桿菌、枯草桿菌等；常用的真核表達(dá)系統(tǒng)有酵母、動(dòng)物（植物）細(xì)胞等。15、大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的缺點(diǎn)是不能進(jìn)行翻譯后加工 （糖基化），因而像EPOI亨 基因的表達(dá)需使用真核（酵母）表達(dá)系統(tǒng)。16、分泌表達(dá)是指將目的基因嵌合在信號(hào)肽基因下游進(jìn)行表達(dá)，從而使目的基因分泌到細(xì)胞周質(zhì)或培養(yǎng)基中。17、固定化酶常采用的方法可分為吸附、包埋、交聯(lián)、共價(jià)鍵結(jié)合四大類(lèi)。18、下面酶固定化示

12、例圖分別代表哪種固定化方法：A( 吸附 B. 共價(jià)鍵結(jié)合C. 交聯(lián) D. 包埋二、選擇題1、如果想要從生物材料中提取輔酶Q1Q應(yīng)該選取下面哪一種動(dòng)物臟器(D )A、胰臟B、肝臟C、小腸D、心臟2、目前分離的1000 多種抗生素，約 2/3 產(chǎn)自 (B )A、真菌B、放線菌C、細(xì)菌D、病毒3、由于目的蛋白質(zhì)和雜蛋白分子量差別較大，擬根據(jù)分子量大小分離純化并獲得目的蛋白質(zhì)，可采用( C )A SDSS膠電泳B、鹽析法C、凝膠過(guò)濾D、吸附層析4、以下可用于生物大分子與雜質(zhì)分離并純化的方法有( D )A、蒸儲(chǔ)B、冷凍干燥C、氣相色譜法D、超濾5、分離純化早期，由于提取液中成分復(fù)雜，目的物濃度稀，因而易

13、采用( A )A分離量大分辨率低的方法 B、分離量小分辨率低的方法C、分離量小分辨率高的方法 D、各種方法都試驗(yàn)一下，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定46、以下可用于菌種純化的方法有(B )A、高溫滅菌B、平板劃線C、富集培養(yǎng)D、誘變處理7、能夠?qū)崿F(xiàn)微生物菌種定向改造的方法是( D )A紫外誘變B、自然選育C、制備原生質(zhì)體D、基因工程8、能夠用沙土管保存的菌種是( C )A、大腸桿菌B、酵母菌C、青霉菌D、乳酸桿菌9、以下關(guān)于PCR勺說(shuō)法錯(cuò)誤的是(C )A、PC阪應(yīng)必須要有本K板、引物、dNT可口 DNA合酶B、應(yīng)用PC叱術(shù)可以進(jìn)行定點(diǎn)突變C、PCR勺引物必須完全和模板互補(bǔ)配對(duì)D PCRK應(yīng)中，僅介于兩引物間

14、的 DNAt段得到大量擴(kuò)增三、名詞解釋1、酶工程 (enzyme engineering): 是從應(yīng)用目的出發(fā)，研究酶和應(yīng)用酶的特異催化功能，并通過(guò)工程化過(guò)程將相應(yīng)原料轉(zhuǎn)化成所需產(chǎn)物的技術(shù)。2、固定化酶(immobilized enzyme): 是指借助于物理和化學(xué)的方法把酶束縛在一定空間內(nèi)并具有催化活性的酶制劑，酶經(jīng)固定化以后穩(wěn)定性有所提高，而且可以反復(fù)使用，并能實(shí)現(xiàn)反應(yīng)連續(xù)化、自動(dòng)化，簡(jiǎn)化產(chǎn)品的純化工藝。3、原生質(zhì)體融合: 用脫壁酶處理將微生物細(xì)胞壁去除，制成原生質(zhì)，再用聚乙二醇(PEG)促進(jìn)原生質(zhì)體發(fā)生融合，從而獲得融合子的技術(shù)。4、雜交育種 : 雜交育種一般指將兩個(gè)基因型不同的菌株通過(guò)

15、接合使遺傳物質(zhì)重新組合，再?gòu)闹蟹蛛x和篩選出具有新性狀的菌株。雜交后的雜種不僅能克服原有菌種活力衰退的趨勢(shì)，而且，雜交育種使得遺傳物質(zhì)重新組合，擴(kuò)大了變異范圍，改善了產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量。5、誘變育種 : 誘變育種是指有意識(shí)地將生物體暴露于物理的、化學(xué)的或生物的一種或多種誘變因子下，促使生物體發(fā)生突變，進(jìn)而從突變體中篩選具有優(yōu)良性狀的突變株的過(guò)程。6、感受態(tài)細(xì)胞: 在分子克隆過(guò)程中，宿主細(xì)胞需經(jīng)過(guò)人工處理成能吸收重組DN吩子的敏感細(xì)胞才能用于轉(zhuǎn)化，此時(shí)的細(xì)胞稱(chēng)為感受態(tài)細(xì)胞。7、原代細(xì)胞: 是直接取自動(dòng)物組織器官，經(jīng)過(guò)分散、消化制得的細(xì)胞懸液。8、二倍體細(xì)胞系 : 原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)傳代、篩選、克隆，從而由

16、多種細(xì)胞成分的組織中挑選強(qiáng)化具有一定特性的細(xì)胞株，其特點(diǎn)是 :1) 染色體組織仍然是2n 的模型 ;2) 具有明顯貼壁依賴(lài)和接觸抑制特性;3) 具有有限的增殖能力 ;4) 無(wú)致癌性。5四、問(wèn)答題1、生物藥物分離制備的基本特點(diǎn)有哪些 ,答:1) 生物材料組成非常復(fù)雜;2) 有些化合物在生物材料中含量極微;3) 生物活性成分離開(kāi)生物體后，易變性破壞，因而須注意保護(hù)其生理活性;4) 生物制藥中的分離方法常帶有很大的經(jīng)驗(yàn)成分;5) 生物制藥中的分離方法多采用溫和的“多階式”方法進(jìn)行;6) 生物產(chǎn)品最后均一性的證明與化學(xué)上純度的概念不完全相同。2、 簡(jiǎn)述單克隆抗體(monoclonal antibody

17、) 的制備原理。答 :B 細(xì)胞群受抗原刺激后能產(chǎn)生針對(duì)抗原決定簇的特異性抗體，一個(gè)集體可產(chǎn)生多達(dá) 100 萬(wàn)種特異性不同的抗體，但一個(gè)B 細(xì)胞卻只能分泌一種特異性抗體。將B 細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合后，用有限稀釋法把產(chǎn)生不同抗體的雜交瘤細(xì)胞分開(kāi)，挑選出單個(gè)雜交瘤細(xì)胞，每個(gè)雜交瘤細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。培養(yǎng)單個(gè)雜交瘤細(xì)胞，使之無(wú)性繁殖形成細(xì)胞集落( 稱(chēng)之為克隆) ，同一個(gè)克隆的雜交瘤基因相同，合成并分泌的特異性抗體質(zhì)地均一，這種抗體稱(chēng)為單克隆抗體。3、 簡(jiǎn)述生物活性物質(zhì)分離純化的主要原理。答: 生物大分子分離純化的主要原理是:1) 根據(jù)分子形狀和大小不同進(jìn)行分離，如差速離心與超離心、膜分離、凝

18、膠過(guò)濾等;2) 根據(jù)分子電離性質(zhì)(帶電性 )差異進(jìn)行分離，如離子交換法、電泳法、等電聚焦法 ;3) 根據(jù)分子極性大小及溶解度不同進(jìn)行分離，如溶劑提取法、逆流分配法、分配層析法、鹽析法、等電點(diǎn)沉淀及有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀等;4) 根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)的不同進(jìn)行分離，如選擇性吸附與吸附層析等;5) 根據(jù)配體特異性進(jìn)行分離，如親和層析法等。第三章 生物材料的預(yù)處理、細(xì)胞破碎和液- 固分離一、填空題1、確定生物材料的預(yù)處理方法的依據(jù)是生物活性物質(zhì)存在方式與特點(diǎn)、后續(xù)操作的要求、目的物穩(wěn)定性。2、高價(jià)金屬離子的去處常用的方法: 離子交換法、沉淀法。3、常用的細(xì)胞破碎方法: 機(jī)械法、物理法、化學(xué)法、生物法。物理法主

19、要包括干燥法、反復(fù)凍融法、滲透壓沖擊法。生物法主要包括: 酶解法、組織自溶法。4、常規(guī)的固液分離技術(shù)主要有過(guò)濾和離心分離等。二、問(wèn)答1、簡(jiǎn)述錯(cuò)流過(guò)濾的優(yōu)點(diǎn)及其原因。答:?過(guò)濾收率高，由于過(guò)濾過(guò)程中，洗滌充分、合理，少量多次，故濾液稀釋量不大的情況下，獲得高達(dá)97-98%的收率。?濾液質(zhì)量好，凡體積大于膜孔的固體，包括菌體、培養(yǎng)基、雜蛋白等均不能通過(guò)6膜進(jìn)入濾液，大部分雜質(zhì)被排除掉，給后續(xù)分離及最終產(chǎn)品質(zhì)量均帶來(lái)好處。減少處理步驟，鼓式真空過(guò)濾器一般需涂助濾劑，板框過(guò)濾器則需清洗，拆裝費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，而錯(cuò)流過(guò)濾只需在18-20h 連續(xù)操作之后，用清水沿原管流洗4-6h 。 ?對(duì)染菌罐易于批處理，也容

20、易進(jìn)行擴(kuò)大生產(chǎn)。2、簡(jiǎn)述影響液- 固分離的因素。答:？微生物種類(lèi)對(duì)液固分離的影響；？發(fā)酵液的粘度；？發(fā)酵液的PH溫度和加熱 時(shí)間。3、簡(jiǎn)述離心分離法的優(yōu)缺點(diǎn)。答 : 離心分離法速度快，效率高，操作時(shí)衛(wèi)生條件好，占地面積小，能自動(dòng)化、連續(xù)化和程序控制，適合于大規(guī)模的分離過(guò)程，但是設(shè)備投資費(fèi)用高、耗能也較高。4、簡(jiǎn)述細(xì)胞及蛋白質(zhì)的預(yù)處理方式。答:?加入凝聚劑 ;?加入絮凝劑 ;?變性沉淀 ;?吸附 ;?等電點(diǎn)沉淀;?加各種沉淀劑沉淀第四章 萃取分離法一、填空題1、常用的萃取方法有: 單級(jí)萃取、多級(jí)錯(cuò)流萃取、多級(jí)逆流萃取。2、影響溶劑萃取的因素：乳化和破乳化、PH的影響、溫度和萃取時(shí)間的影響、鹽析作

21、用的影響、溶劑種類(lèi)、用量及萃取方式的影響。3、破乳方法有: 加入表面活性劑、離心、加電解質(zhì)、加熱、吸附法破乳、高壓電破乳、稀釋法、超濾、反應(yīng)萃取。4、常用的破乳劑有: 陽(yáng)離子表面活性劑、陰離子表面活性劑。二、名詞解釋1、 液 - 液萃取: 是指用一種溶劑將物質(zhì)從另一種溶劑 （ 如發(fā)酵液 ） 中提取出來(lái)的方法，根據(jù)所用溶劑的性質(zhì)不同或萃取機(jī)制不同，可將液-液萃取分為多種類(lèi)型。2、 萃取 : 在溶劑萃取中，被提取的溶液稱(chēng)為料液，其中與提取的物質(zhì)稱(chēng)溶 質(zhì)，而用以進(jìn)行萃取的溶劑稱(chēng)為萃取劑。料液與萃取劑接觸后，料液中的溶質(zhì)向萃取劑轉(zhuǎn)移的過(guò)程稱(chēng)為萃取，達(dá)到萃取平衡后，大部分溶質(zhì)轉(zhuǎn)移到萃取劑中，這種含有溶質(zhì)

22、的萃取劑溶液稱(chēng)為萃取液，而被萃取出溶質(zhì)以后的料液稱(chēng)為萃余液。3、 反萃取 (stripping): 是將萃取液與反萃取劑 ( 含無(wú)機(jī)酸或堿的水溶液，有時(shí)也可以是水) 相接觸，使某種被萃入有機(jī)相的溶質(zhì)轉(zhuǎn)入水相，可把這種過(guò)程看作萃取的逆過(guò)程。4、 分配定律 : 即在一定溫度，一定壓力下，某一溶質(zhì)在互不能相溶的兩種溶劑間分配時(shí)，達(dá)到平衡后，在兩相中的活度之比為一常數(shù)。75、 萃取因素 : 也稱(chēng)萃取比，其定義為被萃取溶質(zhì)進(jìn)入萃取相的總量與該溶質(zhì)在萃余相中總量之比，通常以 E 表示。6、 萃取率 (percentage extraction): 生產(chǎn)上常用萃取率來(lái)表示一種萃取劑對(duì)某種溶質(zhì)的萃取能力，計(jì)算

23、萃取效果，其公式為 :萃取相中溶質(zhì)總量E , ， 100%,， 100%原始料液中溶質(zhì)總量E， 17、 分離因素 : 在同一萃取體系內(nèi)兩種溶質(zhì)在同樣條件下分配系數(shù)的比值。一、 問(wèn)答1、 簡(jiǎn)述溶劑萃取法的優(yōu)點(diǎn)。答:?操作可連續(xù)化，反應(yīng)速度快，生產(chǎn)周期短 ;?對(duì)熱敏物質(zhì)破壞少;? 采用多級(jí) 萃取時(shí)，溶質(zhì)濃縮倍數(shù)大、純化度高。2、 簡(jiǎn)述選擇萃取溶劑應(yīng)遵守的原則。答:?分配系數(shù)愈大愈好，若分配系數(shù)未知，則可根據(jù)“相似相容”的原則，選擇與藥物結(jié)構(gòu)相近的溶劑 ;?選擇分離因數(shù)大于1 的溶劑 ;?料液與萃取溶劑的互溶度愈小愈好 ;?盡量選擇毒性低的溶劑;?溶劑的化學(xué)穩(wěn)定性要高，腐蝕性低，沸點(diǎn)不宜太高，揮發(fā)性

24、要小，價(jià)格便宜，來(lái)源方便，便于回收。第五章 沉淀法一 . 填空1. 固相析出法主要包括鹽析法，有機(jī)溶劑沉淀法，等電點(diǎn)沉淀法，結(jié)晶法及其它多種沉淀方法等。 2. 按照一般的習(xí)慣，析出物為晶體時(shí)稱(chēng)為結(jié)晶法，析出物為無(wú)定形固體則稱(chēng)為沉淀法。 3. 影響鹽析的因素有: 無(wú)機(jī)鹽的種類(lèi)、溶質(zhì)( 蛋白質(zhì)等 )種類(lèi)的影響、蛋白質(zhì)濃度的影響、溫度的影響、pH的影響。4. 結(jié)晶包括三個(gè)過(guò)程:(1) 形成過(guò)飽和溶液;(2) 晶核形成 ;(3) 晶體生長(zhǎng)。5. 影晶體大小的主要因素，歸納起來(lái)與過(guò)飽和度、溫度、攪拌速度、晶種等直接有關(guān)。 6. 晶體的質(zhì)量主要是指晶體的大小、形狀和純度等3 個(gè)方面二(選擇、在一定的pH和

25、溫度下改變離子強(qiáng)度(鹽濃度)進(jìn)行鹽析，稱(chēng)作(A) 1A(K鹽析法B(B鹽析法C(重復(fù)鹽析法D(分部鹽析法S2、當(dāng)向蛋白質(zhì)純?nèi)芤褐屑尤胫行喳}時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度( C )A(增大B.減小C.先增大，后減小D.先減小，后增大83、鹽析法與有機(jī)溶劑沉淀法比較，其優(yōu)點(diǎn)是( B )A. 分辨率高 B. 變性作用小 C. 雜質(zhì)易除 D. 沉淀易分離4、當(dāng)向蛋白質(zhì)純?nèi)芤褐屑尤胫行喳}時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度( C )A(增大B.減小C.先增大，后減小D.先減小，后增大5、鹽析常數(shù)Ks 是生物大分子的特征常數(shù)，它與下列哪種因素關(guān)系密切。( B )A(鹽濃度B.鹽種類(lèi)C.溶質(zhì)濃度D介質(zhì)pH6. 將配基與可溶性的載體偶聯(lián)后形成

26、載體- 配基復(fù)合物，該復(fù)合物可選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，在一定條件下沉淀出來(lái)，此方法稱(chēng)為 ( A)A(親和沉淀B(聚合物沉淀C(金屬離子沉淀D(鹽析沉淀7、將四環(huán)素粗品溶于pH2的水中，用氨水調(diào)pH4.54.6, 28,30?保溫，即有四環(huán)素沉淀結(jié)晶析出 。此沉淀方法稱(chēng)為 (B )A(有機(jī)溶劑結(jié)晶法B(等電點(diǎn)法C(透析結(jié)晶法D(鹽析結(jié)晶法8、影響體大小的主要因素與下列哪些因素?zé)o關(guān)( D )A(過(guò)飽和度B(溫度C(攪拌速度D(飽和度9、下列沉淀試劑不屬于表面活性劑的是( D)A(CTAB B(CPC C(SDS D(PEG三 名詞解釋 :1. 鹽析法 : 是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異，

27、通過(guò)向溶液中引入一定數(shù)量的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉淀析出，達(dá)到純化目的的方法。2. Ks鹽析：在一定的pH和溫度下改變離子強(qiáng)度(鹽濃度)進(jìn)行鹽析，稱(chēng)作Ks鹽 析法。Ks鹽析法多用于提取液的前期分離工作。3(0鹽析：在一定離子強(qiáng)度下僅改變pH和溫度進(jìn)行鹽析，稱(chēng)作B鹽析法。在分離的后期階段，為了求得較好的分辨率，或者為了達(dá)到結(jié)晶的目的，有時(shí)應(yīng)用B鹽析法。B鹽析法由于溶質(zhì)溶解度變化緩慢且變化幅度小，沉淀分辨率比 K鹽析法好。 S4( 親和沉淀 : 利用親和反應(yīng)原理，將配基與可溶性的載體偶聯(lián)后形成載體- 配基復(fù)合物 ( 親和沉淀劑 ) ，該復(fù)合物可選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，在一定條件下沉淀出 來(lái)。四

28、問(wèn)答1. 什么是鹽析作用 , 鹽析的原理是什么 ,答 : 鹽析作用 : 向蛋白質(zhì)溶液中逐漸加入中性鹽，在高鹽濃度時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度隨之減小，發(fā)生了鹽析作用。產(chǎn)生鹽析作用的一個(gè)原因是由于鹽離子與蛋白質(zhì)表面具相反電性的離子基團(tuán)結(jié)合，形成離子對(duì)，因此9鹽離子部分中和了蛋白質(zhì)的電性，使蛋白質(zhì)分子之間電排斥作用減弱而能相互靠攏，聚集起來(lái)。鹽析作用的另一個(gè)原因是由于中性鹽的親水性比蛋白質(zhì)大，鹽離子在水中發(fā)生水化而使蛋白質(zhì)脫去了水化膜，暴露出疏水區(qū)域，由于疏水區(qū)域的相互作用，使其沉淀。2. 如何選擇鹽析所用中性鹽,(1) 鹽析作用要強(qiáng)。一般來(lái)說(shuō)多價(jià)陰離子的鹽析作用強(qiáng)，有時(shí)多價(jià)陽(yáng)離子反而使鹽析作用降低。 (2)

29、 鹽析用鹽要有足夠大的溶解度，且溶解度受溫度影響應(yīng)盡可能小。這樣便于獲得高濃度鹽溶液，有利于操作，尤其是在較低溫度下的操作，不致造成鹽結(jié)晶析出，影響鹽析效果。(3) 鹽析用鹽在生物學(xué)上是惰性的，不致影響蛋白質(zhì)等生物分子的活性，最好不引入給分離或測(cè)定帶來(lái)麻煩的雜質(zhì)。(4) 來(lái)源豐富、經(jīng)濟(jì)。3. 有機(jī)溶劑沉淀的原理是什么 ,答 : 親水性有機(jī)溶劑加入溶液后降低了介質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)分子之間的靜電引力增加，聚集形成沉淀; 水溶性有機(jī)溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度，壓縮了親水溶質(zhì)分子表面原有水化層的厚度，降低了它的親水性，導(dǎo)致脫水凝集。4. 有機(jī)溶劑沉淀影響沉淀效果的因素有那些 ,5. (1)

30、 有機(jī)溶劑種類(lèi)及用量(2)pH 的影響(3) 溫度無(wú)機(jī)鹽的含量(4) 某些金屬離子的助沉淀作用(5) 樣品濃度第六章 吸附分離法( 習(xí)題 )一、填空1、吸附劑按其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為兩大類(lèi): 一類(lèi)是有機(jī)吸附劑，如 活性炭 、 淀粉 、大孔吸附樹(shù)脂等 ; 另一類(lèi)是無(wú)機(jī)吸附劑，如白陶土、 氧化鋁 、 硅膠 、 硅藻土 等。 2 、常用的吸附劑有活性炭 、 硅膠 和 白陶土 等。3、大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑是在樹(shù)脂聚合時(shí)加入 惰性 致孔劑，待網(wǎng)格骨架固化和鏈結(jié)構(gòu)單元形成后，用溶劑萃取或蒸餾水洗將致孔劑去掉，形成不受外界環(huán)境條件影響的 孔隙，其孔徑遠(yuǎn)大于2,4nm,可達(dá)100nm ,故稱(chēng)“大孔”。4、大孔網(wǎng)狀聚

31、合物吸附劑按骨架的極性強(qiáng)弱，可分為非極性、中等極性、極性和強(qiáng)極性吸附劑四類(lèi)。 二、選擇題101、用大網(wǎng)格高聚物吸附劑吸附的弱酸性物質(zhì)，一般用下列哪種溶液洗脫( D )A. 水 B. 高鹽 C. 低 pH D. 高 pH2、“類(lèi)似物容易吸附類(lèi)似物”的原則 , 一般極性吸附劑適宜于從何種溶劑中吸附極性物質(zhì)( B )A. 極性溶劑 B. 非極性溶劑 C. 水 D. 溶劑3、“類(lèi)似物容易吸附類(lèi)似物”的原則 , 一般非極性吸附劑適宜于從下列何種溶劑中吸附非極性物質(zhì)。 ( A )A. 極性溶劑 B. 非極性溶劑 C. 三氯甲烷 D. 溶劑4、下列屬于無(wú)機(jī)吸附劑的是: (A)A. 白陶土 B. 活性炭 C.

32、 淀粉 D. 纖維素5、活性炭在下列哪種溶劑中吸附能力最強(qiáng) , (A)A. 水 B. 甲醇 C. 乙醇 D. 三氯甲烷6、 關(guān)于大孔樹(shù)脂洗脫條件的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是: (A)A . 最常用的是以高級(jí)醇、酮或其水溶液解吸。B. 對(duì)弱酸性物質(zhì)可用堿來(lái)解吸。C. 對(duì)弱堿性物質(zhì)可用酸來(lái)解吸。D.如吸附系在高濃度鹽類(lèi)溶液中進(jìn)行時(shí)，則常常僅用水洗就能解吸下來(lái)。三、名詞解釋D. 吸附法 (adsorption method): 指利用吸附作用，將樣品中的生物活性物質(zhì)或雜質(zhì)吸附于適當(dāng)?shù)奈絼┥?，利用吸附劑?duì)活性物質(zhì)和雜質(zhì)間吸附能力的差異，使目的物和其它物質(zhì)分離，達(dá)到濃縮和提純目的的方法。E. 大網(wǎng)格高聚物吸附劑

33、(macroreticular adsorbent):在合成樹(shù)脂時(shí)，加入一種惰性組分，它不參與聚合反應(yīng)，但能和單體互溶，稱(chēng)為致孔劑。待網(wǎng)絡(luò)骨架固化和鏈結(jié)構(gòu)單元形成后，用溶劑萃取或水洗蒸餾的方法將致孔劑去掉，就留下了不受外界條件影響的永久孔隙，其孔徑遠(yuǎn)大于24nm，可達(dá)到100nm茂至1000nm以上，故稱(chēng)“大孔”。與大孔網(wǎng)狀離子交換樹(shù)脂相比，它不含離子交換樹(shù)脂的功能團(tuán)，僅保留了多孔的骨架，其性質(zhì)與活性炭、硅膠等吸附劑相似，稱(chēng)為大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑。11四、問(wèn)答題1、簡(jiǎn)述吸附法的定義和特點(diǎn)。吸附法 (adsorption method) 指利用吸附作用，將樣品中的生物活性物質(zhì)或雜質(zhì)吸附于適當(dāng)?shù)奈?/p>

34、附劑上，利用吸附劑對(duì)活性物質(zhì)和雜質(zhì)間吸附能力的差異，使目的物和其它物質(zhì)分離，達(dá)到濃縮和提純目的的方法。吸附法具有下列特點(diǎn) :(1) 設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、價(jià)廉、安全。(2) 少用或不用有機(jī)溶劑，吸附與洗脫過(guò)程中 pH 變化小，較少引起生物活性物質(zhì)的變性失活。(3) 天然吸附劑 ( 特別是無(wú)機(jī)吸附劑 ) 的吸附性能和吸附條件較難控制，吸附選擇性差，收率不高，難以連續(xù)操作。2、影響吸附的因素有哪些,(1) 吸附劑的特性:吸附現(xiàn)象在界面發(fā)生，因此吸附劑比表面積愈大，吸附量愈多。通過(guò)活化的方法也可增加吸附劑的吸附容量。另外還要求吸附劑的機(jī)械強(qiáng)度好，吸附速度快(2) 吸附物的性質(zhì):能使表面張力降低的物質(zhì)，

35、易為表面所吸附; 一般極性吸附劑易吸附極性物質(zhì)，非極性吸附劑易吸附非極性物質(zhì); 溶質(zhì)從較易溶解的溶劑中被吸附時(shí)，吸附量較少 ; 對(duì)于同系列物質(zhì)，吸附量的變化是有規(guī)則的 ; 吸附物若能與溶劑形成氫鍵，則吸附物極易溶于溶劑之中。(3) 吸附條件 :溫度 : 吸附熱越大，溫度對(duì)吸附的影響越大。PH值:溶液的pH值溶液pH值可控制吸附劑或吸附物解離情況，進(jìn)而影響吸附 量，對(duì)蛋白質(zhì)或酶類(lèi)等兩性物質(zhì)，一般在等電點(diǎn)附近吸附量最大。鹽濃度 :溶劑的影響 : 單溶劑與混合溶劑對(duì)吸附作用有不同的影響。(4) 吸附物濃度與吸附劑用量一般情況下吸附物濃度大時(shí)，吸附量也大。第七章 凝膠層析一、填空題1、凝膠層析的分離原

36、理有平衡排除理論、擴(kuò)散分離理論、流動(dòng)分離理論。這三種分離原理是互相補(bǔ)充的，在通常情況下平衡排除理論起主導(dǎo)作用 ; 擴(kuò)散分離理論的作用隨流速增加而加強(qiáng) ; 只有在流速很高時(shí)流動(dòng)分離理論才起作用。122、瓊脂糖凝膠的一個(gè)特征是分離的分子量范圍非常大，其分離范圍隨著凝膠濃度上升而下降 ，顆粒強(qiáng)度隨濃度上升而提高 。3、凝膠粒度的大小對(duì)分離效果有直接的影響。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)粒凝膠柱流速低，洗脫峰窄，分辨率高 ，多用于 精制分離 等。粗粒凝膠柱流速高，洗脫峰平坦，分辨率低 ，多用于脫鹽等。 4 、在作分級(jí)分離時(shí)，為了提高分辨率，多采用比樣品體積大25 倍以上的柱體積，25 以上的柱比，較大 吸液量、較細(xì) 粒

37、的凝膠固定相。5、溶質(zhì)通過(guò)色譜柱時(shí)造成的峰加寬效應(yīng)包括分子擴(kuò)散 、渦流擴(kuò)散、 流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力 、 固定相中傳質(zhì)阻力。6、葡聚糖凝膠的孔徑大小取決于 交聯(lián)度 ，其越小，凝膠孔徑越 大 ; 而瓊脂糖凝膠的孔徑卻依賴(lài)于 瓊脂糖濃度。二、選擇題1、凝膠層析中，有時(shí)溶質(zhì)的Kd1,其原因是(B )A. 凝膠排斥B. 凝膠吸附C. 柱床過(guò)長(zhǎng)D. 流速過(guò)低2、凝膠層析中，有時(shí)小分子溶質(zhì)的Kd-lLJ iAfttrH 1 7#fAlp（ipH3L5）h r p|-j 號(hào)（iJfLCpW S-7 p答：陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，0.05mol/L氨水，0.1mol/L氨水，2mol/L氨水濾液調(diào)節(jié)到pH2.5時(shí)，氨基酸帶

38、正電荷，因此選用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，之后根據(jù)氨基酸等電點(diǎn)的不同，依次用 0.05mol/L氨水，0.1mol/L氨水，2mol/L氨水洗脫。酸性氨基酸等電點(diǎn)低，因此用 0.05mol/L氨水就可洗脫下來(lái)，而堿性氨基酸等 電點(diǎn)高，因此需用2mol/L氨水才能將之洗脫下來(lái)。第九章親和純化技術(shù)、填空題1、親和層析洗脫方法有非專(zhuān)一性洗脫，特殊洗脫，專(zhuān)一性洗脫。2、親和力大小除由親和對(duì)本身的 解離常數(shù) 決定外，還受許多因素的影響，其中包括親和吸附劑微環(huán)境、載體空間位阻、載體孔徑、配基和配體的濃 度、配基結(jié)構(gòu) 等。3、親和層析中常用作分離酶的配基有 酶抑制劑，輔 酶，底物和底物結(jié)構(gòu)類(lèi)似物。4、親和層析中非專(zhuān)一

39、性吸附有離子效應(yīng)、疏水基團(tuán)、復(fù)合親和力。5、親和過(guò)濾指的是將 親和層析和膜過(guò)濾技術(shù)結(jié)合運(yùn)用，它包括 親和錯(cuò)流 過(guò)濾和親和膜分離兩大方法。二、選擇題1、下面關(guān)于親和層析載體的說(shuō)法錯(cuò)誤的是 （B ）A.載體必須能充分功能化。B.載體必須有較好的理化穩(wěn)定性和生物親和性，盡量減少非專(zhuān)一性吸附。C.載體必須具有高度的水不溶性和親水性。D.理想的親和層析載體外觀上應(yīng)為大小均勻的剛性小球。2、制備親和柱時(shí)，應(yīng)首先選用的配基是( A )18A. 大分子的 B. 小分子的 C. 中等大小的 D. 不確定3、親和層析的洗脫過(guò)程中，在流動(dòng)相中加入配基的洗脫方法稱(chēng)作( C )A. 陰性洗脫 B. 劇烈洗脫 C. 競(jìng)爭(zhēng)

40、洗脫 D. 非競(jìng)爭(zhēng)洗脫4、親和層析的洗脫過(guò)程中，在流動(dòng)相中減去配基的洗脫方法稱(chēng)作( D )A. 陰性洗脫 B. 劇烈洗脫 C. 正洗脫 D. 負(fù)洗脫三、名詞解釋1、親和反膠團(tuán)萃取(Affinity-based resersed micellar extraction):是指在反膠團(tuán)相中除通常的表面活性劑(如AOT以外，添加另一種親水頭部為目標(biāo)分子 的親和配基的助表面活性劑，通過(guò)親和配基與目標(biāo)分子的親和結(jié)合作用，促進(jìn)目標(biāo)產(chǎn)物在反膠團(tuán)相的分配，提高目標(biāo)產(chǎn)物的分配系數(shù)和反膠團(tuán)萃取分離的選擇性。2、親和膜 : 利用親和配基修飾微濾膜為親和吸附介質(zhì)親和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)，是固定床親和層析的變型。將一張微濾膜

41、比喻為一個(gè)固定床，則膜厚即為床層高度優(yōu)點(diǎn)是傳質(zhì)阻力小，達(dá)到吸附平衡的時(shí)間短，配基利用率高 ; 壓降小，流速快，設(shè)備體積小，配基用量低。3、二次作用親和沉淀(secondary-effect affinity precipitation):利用在物理場(chǎng)(如pH離子強(qiáng)度、溫度和添加金屬離子等)改變時(shí)溶解度下降、發(fā)生可逆性沉淀的水溶性聚合物為載體固定親和配基，制備親和沉淀介質(zhì)。親和介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)分子后，通過(guò)改變物理場(chǎng)使介質(zhì)與目標(biāo)分子共同沉淀的方法成為二次作用親和沉淀。4、親和萃?。豪镁垡叶?PEG)/葡聚糖(Dx)或聚乙二醇/無(wú)機(jī)鹽等雙水相系 統(tǒng)萃取分離蛋白質(zhì)等大生物分子，特別是胞內(nèi)酶的雙水相萃取

42、法。利用偶聯(lián)親和配基的PEG為成相聚合物進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物的雙水相萃取，可在親和配基的親和結(jié)合作用下促進(jìn)目標(biāo)產(chǎn)物在PEG目(上相)的分配，提高目標(biāo)產(chǎn)物的分配系數(shù)和選擇性。5、親和吸附劑 : 由載體及配基偶聯(lián)構(gòu)成，在親和層析中起可逆結(jié)合的特異性物質(zhì)稱(chēng)為配基(Ligand) ，與配基結(jié)合的層析介質(zhì)稱(chēng)為載體(Matrix) 。6、負(fù)洗脫: 在雙底物反應(yīng)中，與配基互補(bǔ)的酶的親和吸附，如果吸附取決于 A物的存在與否，則洗脫液中除去A 物時(shí)，吸附在配基上的互補(bǔ)分子也會(huì)洗脫下來(lái)，這種洗脫方法也稱(chēng)負(fù)洗脫。 四、問(wèn)答題1、親和層析的原理是什么 , 主要特點(diǎn)是什么 ,答:親和層析的設(shè)計(jì)和過(guò)程大致分為以下三步 :1) 配

43、基固定化 : 選擇合適的配基與不溶性的支撐載體偶鏈，或共價(jià)結(jié)合成具有特異親和性的分離介質(zhì);2) 吸附樣品 :親和層析介質(zhì)選擇性吸附酶或其他生物活性物質(zhì)，雜質(zhì)與層析介質(zhì)間沒(méi)有親和作用，故不能被吸附而被洗滌去除;3) 樣品解析 : 選擇適宜的條件使被吸附的親和介質(zhì)上的酶或其他生物活性物質(zhì)解析下柱。19親和層析技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)在于，利用它從提取液中經(jīng)過(guò)一次簡(jiǎn)單的處理便可得到所需的高純度活性物質(zhì)。此外親和層析還有對(duì)設(shè)備要求不高、操作簡(jiǎn)便、適用范圍廣、特異性強(qiáng)、分離速度快、分離效果好、分離條件溫和等優(yōu)點(diǎn) : 其主要缺點(diǎn)是親和吸附劑通用性較差，故要分離一種物質(zhì)差不多都得重新制備專(zhuān)用的吸附劑。另外由于洗脫條件較苛刻，須很好地控制洗脫條件，以避免生物活性物質(zhì)的變性失活。1VK0LLVe-702、對(duì)親和層析的公式 進(jìn)行說(shuō)明。設(shè)K=10,求L 0L,Ve 為洗脫體積（1 分 ）;V固定相（柱床）體積（1分）;0L 為固定化配基濃度（1 分）; 0K為親和對(duì)解離常數(shù)（親和勢(shì)）（1分）；L只有當(dāng)阻留值?10時(shí)，親