藥物分析實(shí)驗(yàn)資料

1、藥物分析實(shí)驗(yàn)2012年 9月實(shí)驗(yàn)一薄層色譜檢查雜質(zhì)（一 ） 薄層板的制備（二 ） 自制撲痛的雜質(zhì)檢查實(shí)驗(yàn)二阿司匹林片的分析實(shí)驗(yàn)三鹽酸普魯卡因注射液的分析實(shí)驗(yàn)四高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊的含量實(shí)驗(yàn)五氣色譜法測定酊劑中乙醇含量附錄 13 藥品檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)原料藥檢驗(yàn)報告書成品檢驗(yàn)報告書 標(biāo)準(zhǔn)液配制及標(biāo)定記錄薄層色譜檢查雜質(zhì)一、目的1. 了解藥物雜質(zhì)檢查的意義。2. 掌握薄層色譜檢查雜質(zhì)的原理和方法。3. 掌握雜質(zhì)限量的計算方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（ 一 ） 薄層板的制備1. 羧甲基纖維素鈉溶液的配制稱取羧甲基纖維素鈉1-2g 備用。在帶有攪拌子的燒杯內(nèi)加入200-400ml 純凈水 （加入水量為羧甲基

2、纖維素鈉稱取量的 200倍） ，在開啟攪拌的情況下，將羧甲基纖維素鈉緩慢均勻地撒到燒杯內(nèi)的水中，不停攪拌，使羧甲基纖維素鈉和水充分融合，加完后于攪拌下加熱使羧甲基纖 維素鈉充分溶解，放涼，備用。2. 硅膠板的制作取硅膠H或GF254約2g,以玻棒攪動下緩慢加入0.5 %竣甲基纖維素鈉水溶液適量 調(diào)成粘度適當(dāng)?shù)暮隣?，取少許硅膠糊均勻涂布于玻璃板（5 X 15cm）上，置水平臺上，在空氣中晾干（陰干），待板上濕圈消失后再于110烘0.5-1 小時，取出放置干燥器中備用。（ 二 ） 自制撲痛的雜質(zhì)檢查1. 展開系統(tǒng)預(yù)測取撲熱息痛純品少許，加丙酮（或無水乙醇）完全溶解，取干燥薄層板點(diǎn)樣，以氯仿：丙酮：

3、甲苯（大約比例13 ： 5 ： 2 ）展開，測定藥物斑點(diǎn) Rf,調(diào)整丙酮加入量使 Rf = 0.7 為佳，此時采用的即為合適展開劑。2. 樣品雜質(zhì)觀察取自制撲痛少許，加丙酮（或無水乙醇）完全溶解，點(diǎn)樣，展開，燈下觀察雜質(zhì)情況（多少、斑點(diǎn)位置及明暗程度等）。3. 雜質(zhì)限度檢測取自制撲痛少許，于5ml 容量瓶中加丙酮適量使全部溶解，以丙酮稀釋至刻度，即為樣品液。精密量取樣品液適量，采用不同規(guī)格容量瓶（3 個）以丙酮稀釋100、 150或 200倍，得參比液1、 2 或 3。干燥薄層板，同時取相同體積樣品液和參比液點(diǎn)樣，展開，燈下觀察、比較，對比藥物主斑點(diǎn)與雜質(zhì)斑點(diǎn)。樣品雜質(zhì)斑點(diǎn)不深于參比液藥物主斑

4、點(diǎn)時即檢得雜質(zhì)限度。阿司匹林片的分析一、目的1. 掌握片劑分析的特點(diǎn)及賦形劑的干擾與排除方法。2. 掌握阿司匹林片鑒別、檢查、含量測定的原理及方法。二、操作 鑒別 1 . 取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g） ，加水 10ml 煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色。2 .取本品的細(xì)粉（約相當(dāng)于阿司匹林 0.5g）,加碳酸鈉試液10ml,振搖后，放置5分鐘，濾過，濾液煮沸2 分鐘，放冷，加過量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣。 檢查 游離水楊酸取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g） ， 加無水氯仿3ml， 不斷攪拌2分鐘， 用無水氯仿濕潤的濾紙濾過，濾渣用無水氯仿洗

5、滌2次，每次1ml,合并濾液與洗液，在室溫下通風(fēng)揮發(fā)至干；殘?jiān)脽o水乙醇4ml 溶解后，移至100ml 量瓶中，用少量5乙醇洗滌容器、洗液并入量瓶中，加5%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分取 50ml,立即加新制的稀硫酸鐵鏤溶液取鹽酸液（1mol/L）1ml ， 加硫酸鐵銨指示液2ml 后， 再加水適量使成100ml 1ml， 搖勻；30秒鐘內(nèi)如顯色，與對照液（精密稱取水楊酸0.1g,置1000ml量瓶中，加冰醋酸1ml,搖勻，再加水適量至刻度， 搖勻，精密量取1.5ml,加無水乙醇2ml與5%乙醇使成50ml,再加上述新制的稀硫酸鐵鏤溶液 1ml,搖勻）比較，不得更深。 含量測定取本品 10 片，精

6、密稱定，研細(xì)，精密稱出適量（ 約相當(dāng)于阿司匹林0.3g） ，置錐形瓶中，加中性乙醇（對酚酬:指示液顯中性）20ml ,振搖，使阿司匹林溶解，加酚Mt指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L） 至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）40ml ， 置水浴上加熱15 分鐘并時時振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液（0.05mol/L） 滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L） 相當(dāng)于 18.02mg 的 C9H8O4。本品含阿司匹林（C9H8Q）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0 105.0 %。三、說明1 .楊酸與三氯化鐵試液顯紫堇色。2 .為消

7、除阿司匹林水解產(chǎn)物水楊酸，醋酸及穩(wěn)定劑枸椽酸、 酒石酸對含量測定的影響故采用兩步滴定法。第一次滴定:CH3COOH NaO+CH3COONa H2ONaOHNaOHH2O+ H2OCH 2COONa第二次滴定:+ 3NaOH HO C COONa + 3H 2CH 2cOONa四、思考題1 .簡述鑒別試驗(yàn)的原理。2 .檢查游離的水楊酸時， 為防止阿司匹林水解，操作中應(yīng)注意哪些問題 ？計算供試品中阿司匹林的限量。3 .含量測定時，為什么要作空白試驗(yàn)？空白試驗(yàn)的操彳如何進(jìn)行 ？為什么加中性乙醇溶解供試品？如何制備中性乙醇？4. 你認(rèn)為含量測定時，應(yīng)注意哪些問題才可以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果？鹽酸普魯卡因注射

8、液的分析一、目的1. 掌握用薄層層析法檢查鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸限量的原理及方 法。2. 掌握用分光光度法測定鹽酸普魯卡因含量的原理及方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（ 一 ） 鑒別取本品適量（ 約相當(dāng)于鹽酸普魯卡因50mg）， 加稀鹽酸1ml， 加 0.1mol/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性B-茶酚試液數(shù)滴，生成橙紅色沉淀。（ 二 ） 對氨基苯甲酸的檢查薄層層析法：精密量取本品，加乙醇稀釋成每 1ml中含鹽酸普魯卡因2.5mg的溶液, 作為供試品溶液，另取對氨基苯甲酸對照品，加乙醇制成每1ml含30g的溶液，作為對照品溶液，吸取上述兩種溶液各10仙l ,分別點(diǎn)于含有竣甲基纖維素鈉為粘合 劑的硅膠

9、H薄層板上，用苯一冰醋酸一丙酮一甲醇（14 ： 1 ： 1 ： 4）為展開劑，展開后, 取出晾干，用對一二甲氨基苯甲醛溶液2對一二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成噴霧顯色。供試溶液如顯與對照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。（ 三 ） 含量測定精密量取本品1ml 于 100ml 量瓶中， 加水至刻度，搖勻， 精密量取此稀釋液10ml于另一 100ml量瓶中，加水至刻度（即每1ml含鹽酸普魯卡因10仙g）,搖勻，照分光 1光度法在290nm的波長處測定吸收度，按C3HHQ HCl的吸收系數(shù)（E為680計算，即得。三、說明1.鹽酸普魯卡因，對氨基苯甲酸在冰

10、醋酸中與對二甲氨基苯甲醛縮合而呈色。2H 5)2 . HCH3C.+ H3CCHO H-2CH2N(C 2H 5)2四、思考題計算用TLC法檢查對氨基苯甲酸的限量。高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊含量、目的1 .熟悉HPLCt測定的原理及操作；2掌握外標(biāo)法測定阿莫西林膠囊含量。、操作1鑒別取本品內(nèi)容物適量，在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應(yīng)與對照品主峰的保留時間一致。2含量測定（ 1） 譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（pH5.0）（取磷酸二氫鉀13.6g,加水溶解后稀釋到2000ml,用 8mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0

11、77;0.1 ）-乙月青（96 ： 4）為流動相；流 速為每分鐘約1.0ml ;檢測波長254nm理論板數(shù)按阿莫西林峰計算應(yīng)不低 于 1700。（2）對照溶液配制：取阿莫西林對照品約 30mg精密稱定,置50ml量瓶 中，加磷酸鹽緩沖液（pH5.0）溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。（ 3） 樣品測定：取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量，加磷酸鹽緩沖液（pH5.0）溶解并稀釋成每ml中約含0.6mg的溶液，濾過，取 續(xù)濾液20仙L注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿莫西林對照溶液同法測 定。按外標(biāo)法以峰面積計算出樣品中阿莫西林（C9HwNQS）的含量。本品含阿莫西林（019Hl9NOS）應(yīng)

12、為標(biāo)示量的90.0%110.0%。三、說明1 .阿莫西林結(jié)構(gòu)如下:fj 110H乂3依CuHiOjS SH我國藥典收載的相關(guān)制劑主要有片劑、膠囊劑及注射用阿莫西林鈉。氣相色譜法測定酊劑中乙醇含量一、 目的：1. 熟悉氣相色譜法中內(nèi)標(biāo)加校正因子測定含量的方法。2. 了解氣相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用。二、操作：1. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用直徑為0.250.18mm的二乙烯苯（為橫紅）乙烯苯型高分子高孔小球作為載體，柱溫為120150C；精密量取無水乙醇4、5、6ml,分別精密加入正丙醇 5ml,加水稀釋成100ml,混勻（必要時進(jìn)一步稀釋），取上述三份溶液適量，各進(jìn)樣5次，應(yīng)符合下述要求：用正丙醇計算

13、的塔板數(shù)應(yīng)大于700；乙醇與正丙醇兩峰的分離度應(yīng)大于2；上述 3 份溶液各進(jìn)樣5 次，所得15 個校正因子變異系數(shù)不得大于2.0。2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取恒溫至20c的無水乙醇和正丙醇各 5ml,加水稀釋成100ml,混勻，即得。3. 供試溶液的制備精密量取恒溫至20c的從試品適量（相當(dāng)于乙醇約5ml）和正丙醇5ml,加水稀釋 成100ml,混勻，即得。上述兩種溶液必要時可進(jìn)一步稀釋。4. 測定法取標(biāo)準(zhǔn)溶液與試溶液適量，分別連續(xù)注樣3 次， 并計算出校正因子和供試品的乙醇含量，取3 次計算的平均值作為結(jié)果。三、說明：1 .在不含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試溶液的色譜圖中，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的位置處應(yīng)不出現(xiàn)雜質(zhì)

14、峰。2 .標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試溶液連續(xù) 3次注樣所得各次校正因子和乙醇含量與其相應(yīng)的 平均值的相對偏差，均不得大于1.5%,否則應(yīng)重新測定。3 .選用其他載體時，系統(tǒng)適用性驗(yàn)必須符合本法規(guī)定。4 .色譜柱的理論塔板數(shù)（n）計算公式為：n=5.54（t mJ其中：tR為供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時間，W/2為半高峰寬。5 .分離度（R）的計算公式為：式中：tR2為相鄰后一峰的保留時間tR1為相鄰前一峰的保留時間W1、W為此相鄰二峰的基線峰寬除另有規(guī)定上，分離度應(yīng)大于1.5。6 .拖尾因子（T）的計算公式為：T=W0p5h式中：W05h為0.05峰高處的峰寬；d 1為0.05峰高處峰極大至峰前沿之間

15、的距離。除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.951.05問。7 .校正因子 的計算公式為：式中：As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；Ar為對照品的峰面積或峰高；ms為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量；mr為加入對照品的量。8 . 含量計算公式為：含量(mi)=f x式中： f 為校正因子；Ai 為供試品( 或其雜質(zhì)) 峰面積或峰高；As 為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；m s 為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量。四、思考題1. 氣相色譜分析中有哪幾種定量方法?試簡單闡述各方法的優(yōu)缺點(diǎn)。2. 色譜系統(tǒng)適用試驗(yàn)的目的與指標(biāo)是什么?3. 內(nèi)標(biāo)法定量時，內(nèi)標(biāo)的選擇原則有哪些?附1中華人民共和國專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)ZBC 10001 10007-8藥品檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)原料藥檢驗(yàn)報告書編號:品 名包裝規(guī)格進(jìn)廠編號廠牌來源數(shù) 量取樣日期 年 月 日取樣件數(shù)報告日期 年 月 日依 據(jù)用料車間檢驗(yàn)結(jié)果:判定:質(zhì)檢科長復(fù)核員檢