盾葉薯蕷四倍體株系抗氧化酶活性及有效成分分析

1、盾葉薯蕷四倍體株系抗氧化酶活性及有效成分分析         作者：謝彩俠，史會齊，高山林，胡亞楠，白雨 ，白雁 【摘要】 目的提高盾葉薯蕷藥材的品質(zhì)。方法通過組織培養(yǎng)，對誘導(dǎo)獲得的盾葉薯蕷四倍體株系，進(jìn)行了試管苗抗氧化酶活性及薯蕷皂苷元含量分析。結(jié)果大部分四倍體株系A(chǔ)PX活性、SOD和POD比活力高于或相近于二倍體株系                

2、60;       作者：謝彩俠，史會齊，高山林，胡亞楠，白雨 ，白雁【摘要】  目的提高盾葉薯蕷藥材的品質(zhì)。方法通過組織培養(yǎng)，對誘導(dǎo)獲得的盾葉薯蕷四倍體株系，進(jìn)行了試管苗抗氧化酶活性及薯蕷皂苷元含量分析。結(jié)果大部分四倍體株系A(chǔ)PX活性、SOD和POD比活力高于或相近于二倍體株系。經(jīng)誘導(dǎo)獲得的四倍體株系試管苗與對照相比薯蕷皂苷元含量有較大差異，大部分四倍體株系薯蕷皂苷元含量都超過了二倍體株系。結(jié)論經(jīng)誘導(dǎo)獲得的四倍體株系在抗氧化酶活性及有效成分含量方面與二倍體表現(xiàn)出明顯差異，說明多倍體誘導(dǎo)可以作為盾葉薯蕷優(yōu)良品種選育的途徑。

3、【關(guān)鍵詞】  盾葉薯蕷四倍體抗氧化酶活性薯蕷皂苷元Abstract：ObjectiveTo improve the yield and quality of D.  zingibiernsis C.H.Wright . MethodsThe research project of polyploidy breeding by tissue culture was done. The antioxidant enzyme activities and the diosgenin were analyzed in polyploidy lines. Results The re

4、sults showed that SOD and POD activities in most of autotetraploid lines were not lower than those of diploid line, furthermore，the content of diosgenin in most induced plantlets was higher than that in control. Conclusion There was difference between  autotetraploid and control lines in diosge

5、nin content and antioxidant enzyme activities，therefore，inducing autotetraploid can be effective way to breeding the superior varieties.Key words： D.  zingibiernsisC.H.Wright. ；Antotetraploid,；  Autioxidant enzyme activities；  Diosgenin    盾葉薯蕷D.  zingibiernsis C.H

6、.Wright.屬薯蕷科薯蕷屬根狀莖，又名黃姜、火頭根，其根莖內(nèi)薯蕷皂素的含量一般為2%左右，是目前世界上最好的激素類藥源植物。同時具有清肺止咳、利濕通淋、通絡(luò)止痛、解毒消腫的功能，可治肺熱咳嗽、濕熱淋痛、風(fēng)濕腰痛、癰腫惡瘡、跌打扭傷、蜂螯蟲咬；其水溶性甾體皂苷成分對心肌缺血、胸痹、高脂血癥等有明顯治療作用。    盾葉薯蕷是我國特有資源植物，是世界上薯蕷皂素含量最高的種類，最高單株達(dá)到16.5%，超過了世界王牌墨西哥小穗花薯蕷15%的紀(jì)錄。據(jù)調(diào)查我國10個省市都有盾葉薯蕷分布，其中湖北、湖南、陜西、四川分布最為集中，目前在陜西安康地區(qū)、湖北鄖西地區(qū)、湖南安化地區(qū)

7、、河南南陽地區(qū)都有一定規(guī)模的種植面積。實現(xiàn)人工栽培后，雖然解決了皂素供應(yīng)問題，而原料依舊短缺，主要原因是產(chǎn)量低、皂素含量變化較大，質(zhì)量難以控制。因此有必要進(jìn)行品種選育和提純復(fù)壯的工作。鑒于此，筆者利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了盾葉薯蕷多倍體的誘導(dǎo)，并對誘導(dǎo)株系進(jìn)行了抗氧化酶活性及有效成分分析，為最終選育優(yōu)良品種提供依據(jù)。1  材料與儀器1.1  材料生長2540 d的盾葉薯蕷四倍體、二倍體試管苗新鮮葉片及根莖1。1.2  儀器和試劑BECKMAN DU-600分光光度計，水浴鍋，微量加樣器。酶提取液， pH 7.5的0.05mol/L 的Tris-HCl緩沖液，PBS p

8、H(7.0)，0.1 mmol/L EDTA， 0.1mmol/L H2O2， 0.5 mmol/LASA，丙酮，SOD試劑盒（購于建成生物試劑研究所）。2  方法2.1  SOD，POD，APX活性的測定精密稱取盾葉薯蕷試管苗二倍體及其同源四倍體葉片1.0 g，每份材料加5ml預(yù)冷的提取緩沖液（pH7.5的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液）及少量石英砂，置于冰浴中研磨后，4冷凍離心機6 000 r/min離心10min，上清液即為酶提取液。SOD活性按南京建成生物工程研究所試劑盒說明書操作。POD總活力按文獻(xiàn)2的方法進(jìn)行，酶的比活力用OD470/ (mg

9、83;min)(protein)表示。APX活性參照文獻(xiàn)2的方法，酶活單位定義為每小時氧化1mol ASA的酶量為一個酶活單位。2.2  盾葉薯蕷試管苗薯蕷皂苷元含量分析2.2.1  樣品制作盾葉薯蕷試管苗在MS/2+IAA 0.2 mg/L+NAA0.2 mg/L培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，待苗長至3035d左右，洗凈根上的培養(yǎng)基，將根剪掉，在60下烘干，粉碎，過60目篩，供含量分析用。2.2.2  薯蕷皂苷元的測定供試品溶液制備3，4：精密稱取盾葉薯蕷粉末0.71.0 g，置于三角瓶中，加2.0 mol/L的硫酸50 ml，在100水浴鍋中水解4 h，放冷過濾，藥渣用蒸餾水洗至中性，60干燥后，用石油醚（6090）50 ml在90水浴中索市氏提取5h，提取液回收至干后用無水乙醇溶解，過濾至5ml的容量瓶中，用無水乙醇定容待測定。    對照品溶液制備：準(zhǔn)確稱取薯蕷皂苷元標(biāo)樣0.001 g，置2 ml容量瓶中，用無水乙醇溶解，稀釋至刻度，得0.5 g/l的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。    色譜條件選擇5，6：儀器：Agilent 1100 Series。分析條件：Microsorb-MV100 C18 (5m，4.6