小鼠同型半胱氨酸Hcy試劑盒使用方法

1、小鼠同型半胱氨酸（ Hcy）試劑盒使用方法檢測范圍： 96T 0.8 mol/L -20 mol/L使用目的： 本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中同型半胱氨酸（Hcy ）含量。實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠同型半胱氨酸（ Hcy ）水平。用純化的小鼠 同型半胱氨酸（ Hcy ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入同型 半胱氨酸（ Hcy ），再與 HRP 標記的同型半胱氨酸（ Hcy ）抗體結合，形成抗體 -抗原 -酶標抗 體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在 酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色

2、。顏色的深淺和樣品中的同型半胱氨酸（Hcy ）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（ OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠同型半胱氨酸 （Hcy ）濃度。試劑盒組成130 倍濃縮洗滌液20ml× 1瓶7終止液6ml × 1 瓶2酶標試劑6ml × 1 瓶8標準品（ 40mol/L ）0.5ml ×1 瓶3酶標包被板12孔× 8條9標準品稀釋液1.5ml ×1 瓶4樣品稀釋液6ml × 1 瓶10說明書1份5顯色劑 A 液6ml × 1 瓶11封板膜2張6顯色劑 B 液6ml×1/瓶12密封

3、袋1個標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20保存，但應避免反復凍融2不能檢測含 NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。 操作步驟1. 標準品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標準品一支， 用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。20mol/L5 號標準品150l的原倍標準品加入 150l 標準品稀釋液10mol/L4 號標準品150l的 5 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液5mol/L3 號標準品150l的 4 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液2.5mol/L2 號標準品150l的

4、3 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液1.25mol/L1 號標準品150l的 2 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液2. 加樣： 分別設空白孔 （空白對照孔不加樣品及酶標試劑， 其余各步操作相同） 、標準孔、 待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40l， 然后再加待測樣品 10l（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置 37溫育 30 分鐘。4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置

5、 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50l ，空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 l，再加入顯色劑 B50l，輕輕震蕩混勻， 37避光顯色 15 分鐘 .10. 終止：每孔加終止液 50 ，l終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。11. 測定：以空白空調(diào)零， 450nm 波長依序測量各孔的吸光度（ OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結：計算以標準物的濃度為橫坐標， OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或

6、用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的 OD 值代入方程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（× n× 5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格