電針聯(lián)合西樂葆緩解大鼠脛骨癌痛

1、電針聯(lián)合西樂葆緩解大鼠脛骨癌痛<                        作者：毛應(yīng)啟梁, 任典寰, 米文麗, 劉瓊, 王彥青 【摘要】   目的：建立大鼠脛骨癌痛模型，觀察電針和西樂葆對大鼠脛骨癌痛的緩解作用。方法：采用經(jīng)皮穿刺技術(shù)將大鼠乳腺癌細胞Walker 256接種至雌性Wistar大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)，建立大鼠脛骨癌痛模型。大鼠造

2、模后，采用電針和西樂葆灌胃 治療 ，觀察其對大鼠骨腫瘤引起的 機械 性痛覺超敏的影響。結(jié)果：模型組大鼠后肢逐漸產(chǎn)生機械性痛覺超敏，接種后第16天脛骨近心端可見顯著的腫瘤生長。單用電針或西樂葆5 mg/(kg·d)治療大鼠，與模型組相比其機械性疼痛閾值差異無 統(tǒng)計 學意義；治療后第22天和第26天，西樂葆10 mg/(kg·d)組大鼠后肢機械性疼痛閾值較溶劑對照組提高（P<0.05）；治療后第10、18和23天，電針合用西樂葆5 mg/(kg·d)組大鼠機械性疼痛閾值高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：電針與小劑量西樂葆具有協(xié)同作用，合用

3、可以增強對大鼠脛骨癌痛的鎮(zhèn)痛效果。 【關(guān)鍵詞】   骨癌痛 電針 西樂葆 鎮(zhèn)痛 大鼠Objective: To establish a proper experimental model of bone cancer pain in rat for acupuncture research, and observe the painrelieving effect of electroacupuncture (EA) and/or Celebrex on bone cancer pain in rats.Methods: The rat model of bone cancer pa

4、in was established by percutaneous direct puncture technique and inoculating the rat mammary gland carcinoma cells Walker 256 into tibial medullary cavity directly, and evaluated by detecting the bone tumor growth and mechanical allodynia. The effects of daily EA treatment and/or Celebrex treatment

5、on the rat mechanical allodynia after intratibial Walker 256 inoculation was observed in this study.Results: Significant mechanical allodynia in ipsilateral hind paw and tumor growth in proximal end of tibial bone of rats in the untreated group were observed after intratibial Walker 256 inoculation.

6、 The mechanical allodynia thresholds in rats that rec Ei ved EA or 5 mg/(kg·d) Celebrex treatment showed no significant difference as compared with that of rats in the untreated group. However, the mechanical allodynia thresholds of rats in 10 mg/(kg·d) Celebrex group showed significant in

7、crease after 22 and 26day treatment as compared with that in the methyl cellulose (MC) group. There was significant difference between rats with EA combined with 5 mg/(kg·d) Celebrex treatment and rats in the untreated group after 10, 18 and 23day treatment.Conclusion: EA and 5 mg/(kg·d) C

8、elebrex have synergistic effect on pain relieving and th EI r combined use may enhance the analgesic effect on bone cancer pain.Keywords: bone cancer pain; electroacupuncture; Celebrex; analgesia; rats癌痛是 臨床 上常見的慢性病理性疼痛，嚴重影響了腫瘤患者的生活質(zhì)量。研究表明，針刺和環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase 2, COX2）抑制劑有緩解癌痛作用13，但有一定的局限性。針藥結(jié)合是提

9、高鎮(zhèn)痛效應(yīng)的重要途徑4，不僅能減少藥物用量及不良反應(yīng)，還能有效克服針刺鎮(zhèn)痛效果有限的缺點。本研究在改進的大鼠脛骨癌痛模型上， 應(yīng)用 電針和（或）COX2抑制劑西樂葆治療，觀察其對骨癌痛大鼠后肢機械性超敏的影響，為臨床推廣針刺鎮(zhèn)痛應(yīng)用，提高鎮(zhèn)痛療效提供實驗依據(jù)。 1  材料與方法 1.1  實驗動物  雌性Wistar大鼠，體質(zhì)量（70±10）g者3只（用于腹水瘤傳代），體質(zhì)量（150±10）g者152只（用于癌痛模型制作與電針或藥物治療），由上海實驗動物中心提供，許可證號為SCXK（滬）20070005。動物飼養(yǎng)于12 h/12 h晝夜交替，室

10、溫（24±0.5）的 環(huán)境 中，自由攝食和飲水，在實驗環(huán)境中適應(yīng)1周后進行實驗。1.2  Walker 256大鼠乳腺癌細胞  大鼠乳腺癌腹水瘤細胞Walker 256購自上海生物 醫(yī)學 工程研究所。取0.5 ml腹水瘤（細胞數(shù)約2.5×107 個/ml）接種至（70±10）g雌性Wistar大鼠腹腔內(nèi)，67 d后抽取5 ml腹水，加入等量PBS充分混勻后1 300 r/min離心3 min，PBS重懸，計數(shù)并離心收集細胞，調(diào)整到所需細胞濃度（1×108個/ml），置于冰盒內(nèi)備用。將配置后的Walker 256細胞用沸水浴處理3 mi

11、n制備熱滅活細胞。1.3  大鼠脛骨癌痛模型的制作  對動物的處理符合國際實驗動物使用準則。本研究參照Medhurst等5報道的大鼠脛骨癌痛模型進行改進，采用微量進樣器直接經(jīng)皮穿刺，向Wistar大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)接種Walker256大鼠乳腺癌細胞，建立新的大鼠脛骨癌痛模型6?；静襟E如下：大鼠腹腔注射8%水合氯醛（5 ml/kg體質(zhì)量）麻醉后，右側(cè)膝關(guān)節(jié)部位剃毛，表面皮膚用70%酒精消毒；左手指固定膝關(guān)節(jié)使其表面皮膚緊張，然后用7號針頭在膝關(guān)節(jié)處（髕韌帶外側(cè)緣）沿脛骨縱軸走向往脛骨遠端鉆孔，深約1 cm，用微量注射器（10 l）向脛骨骨髓腔內(nèi)注射腫瘤細胞建立脛骨癌痛模型。

12、微量進樣器依次吸入：1 l空氣、2 l明膠海綿水溶液、1 l空氣、4 l腫瘤細胞、1 l空氣。另有大鼠注射4 l PBS或熱滅活細胞做為對照。接種后留針片刻。1.4  大鼠脛骨腫瘤生長檢測  實驗結(jié)束后大鼠以水合氯醛麻醉處死，直接取新鮮脛骨，觀察脛骨腫瘤生長情況。1.5  大鼠機械性痛覺超敏測定  在室溫（22±1）的安靜環(huán)境中，采用弗萊毛（von Frey hair，Stoelting, Wood Dale, 美國）細絲測定機械性痛覺超敏來評定癌痛大鼠疼痛狀況。測定時將大鼠置于底為網(wǎng)格的特制有機玻璃格子（26 cm×20 cm

13、15;14 cm）內(nèi)，適應(yīng)20 min后，根據(jù)Dixon7介紹的upanddown法，將一系列von Frey細絲（0.4、0.6、1.4、2.0、4.0、 6.0、8.0、15.0 g）從2.0 g力度開始參照upanddown方法刺激大鼠移植側(cè)腳掌中部皮膚，觀察大鼠縮足反應(yīng)6。無反應(yīng)記為“O”，有反應(yīng)記為“X”。如果第一根毛刺激沒有反應(yīng)，則給予大一級力度的毛刺激；如果有反應(yīng)則改用小一級力度的毛刺激，反復(fù)類推，從有反應(yīng)的那一次開始測5次，得到一串以“O”或“X”組合的序列，將該序列和最后一根毛的力度（f）輸入 軟件 計算 出機械性疼痛閾值作為機械性痛閾值。50縮足反應(yīng)閾值（g）（10Xf+k

14、）/10 000。其中Xflog（f）；為各個毛力度取log后的均差，在此約等于0.224；k為根據(jù)測量所得“X”、“O”序列查表后得到的值，此部分查表和計算均由軟件自動處理。為避免頻繁或長時間的刺激造成動物耐受或痛敏，每根毛每次刺激時間為12 s，前后兩次不同刺激間隔10 min；實驗中間隔4 d以上測量一次機械性痛覺超敏，即弗萊毛實驗。1.6  電針治療方法  室溫（22±1）的安靜環(huán)境中，將大鼠軀干固定于特制固定器上，頭部與四肢可自由活動，待動物靜置20 min后，將針灸針刺入動物右側(cè)足三里（ST 36，位于膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5 mm處，直刺7 mm

15、）與昆侖穴（BL 60，位于后肢外踝與跟腱之間的凹陷中，直刺3 mm），通過G68051A型多功能電針治療儀（上海華誼醫(yī)用儀器廠）給予疏密波，疏波頻率約4 Hz，串長2.5 s，密波頻率約100 Hz，串長5 s，強度以引起大鼠后肢肌肉輕微抖動而不嘶叫為宜（約1 mA）。大鼠自造模后第4天起予電針治療，治療時間為30 min，1次/d，直至整個實驗結(jié)束。1.7  西樂葆配制與給藥方法  甲基纖維素（methyl cellulose，MC）由國藥集團化學試劑有限公司進口分裝，批號為F20050119，0.5 g溶于雙蒸水中定溶至100 ml，配成0.5甲基纖維素溶液。西樂葆，

16、0.2 g/膠囊，由西爾大藥廠波多黎各分廠生產(chǎn)，普強蘇州制藥有限公司進口分包裝，生產(chǎn)批號為520，分包裝批號為0407062，用0.5甲基纖維素水溶液配成所需濃度（質(zhì)量濃度0.05、0.1和0.3）。以特制的灌胃針進行灌胃給藥。1.8  實驗分組與設(shè)計  為評價脛骨癌痛大鼠模型制作是否成功，實驗設(shè)計將40只Wistar大鼠隨機分為正常組、PBS組、熱滅活腫瘤細胞組和Walker 256腫瘤細胞組（模型組），每組10只。所有大鼠在造模前以及造模后第4、8、12和16天采用弗萊毛測定后肢機械性痛閾，造膜16 d后取脛骨觀察腫瘤生長情況。    24

17、只Wistar大鼠脛骨骨髓腔接種腫瘤細胞后隨機分為模型組和電針組，每組12只。分別于造模前和電針治療后第6、12、18和23天采用弗萊毛測定后肢機械性痛閾。    40只Wistar大鼠脛骨骨髓腔接種腫瘤細胞后隨機分為4組：MC對照組（MC灌胃，n=12）、西樂葆5 mg/(kg·d)組(n=12)、西樂葆10 mg/(kg·d)組(n=8)和西樂葆30 mg/(kg·d)組(n=8)。造模后第4天開始灌胃給藥，每天早晚8時各1次。分別在西樂葆治療前和治療后第6、13、18、22和26天采用弗萊毛測定機械性痛閾進行西樂葆劑量篩選。因前

18、期治療鎮(zhèn)痛效果不明顯，西樂葆5 mg/(kg·d)組治療后第26天時未予檢測。    48只Wistar大鼠脛骨骨髓腔接種腫瘤細胞后隨機分為模型組、電針組、西樂葆5 mg/(kg·d)組、電針合用西樂葆5 mg/(kg·d)組，每組12只。大鼠在造模后第4天開始給予西樂葆灌胃治療和/或電針治療，西樂葆于每天早、晚8時各1次灌胃，電針治療1次/d，每次30 min，分別在治療前及治療后第6、10、18、23天測定大鼠后肢機械性痛閾情況。1.9  統(tǒng)計學方法  計量資料實驗數(shù)據(jù)以x±sx表示。應(yīng)用SPSS 1

19、0.0軟件進行統(tǒng)計，采用單因素方差分析，檢驗水準為=0.05。 2  結(jié)果 2.1  大鼠脛骨接種腫瘤細胞后脛骨腫瘤生長情況  與正常組大鼠脛骨相比，Walker 256腫瘤細胞組大鼠脛骨近端1/3骨緣不規(guī)則，表面凹凸不平，色略黃，質(zhì)地變脆易碎（見圖1）。進一步的骨病理切片HE染色顯示，Walker 256腫瘤細胞組脛骨內(nèi)存在顯著的腫瘤生長，骨 組織 破壞，而正常組、PBS以及熱滅活細胞對照組未見有明顯的骨質(zhì)破壞，與 文獻 報道一致6。圖1  正常和Walker 256腫瘤細胞接種后第16天大鼠脛骨（略）Figure 1  Tibial bone of a normal control rat and Walker 256 tumorbearing rat 16 d after tumor inoculation2.2  大鼠脛骨接種腫瘤細胞對機械性痛覺超敏的影響  與正常組大鼠相比，模型組大鼠在接種腫瘤細胞后第8、12和16天，大鼠接種側(cè)后肢機械性疼痛閾值低于正常大鼠，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而