第五章 植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)方案

1、第五章植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物組織培養(yǎng)中的基本概念(1)植物組織培養(yǎng)技術(shù)：、組織(形成層，花藥組并給予適當(dāng)?shù)呐嗑哂邪l(fā)育成完整個(gè)體在無菌培養(yǎng)的條件下，將離體的植物器官(根，莖，葉，花，果實(shí)等) 織等)、細(xì)胞(體細(xì)胞，生殖細(xì)胞等)以及原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上, 養(yǎng)條件，使其長成完整植株的過程。(2)理論依據(jù)：植物細(xì)胞的全能性，即指植物機(jī)體的每個(gè)細(xì)胞都含有該物種全套的基因組, 的潛力。(3)外植體：從活體植株上切下的，用于組織培養(yǎng)的細(xì)胞、組織和器官。一般包括莖尖、根、莖、葉、花、種 子等器官以及他們形成的體細(xì)胞胚等材料。分化：結(jié)構(gòu)和功能上形成穩(wěn)定性在個(gè)體發(fā)育過程中，由一種相同的細(xì)胞類型經(jīng)細(xì)胞

2、分裂后逐漸在形態(tài)、 差異，產(chǎn)生不同的細(xì)胞類群的過程稱為細(xì)胞分化。(5)脫分化：已經(jīng)高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞，在切割損傷和培養(yǎng)物內(nèi)外因素的共同作用下，逐漸喪失 原來的分化結(jié)構(gòu)和功能，最后形成無組織的細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織的過程。(6)愈傷組織：(具有細(xì)胞分裂能力)。再分化出根和芽，形成完整植株在人工培養(yǎng)基上由外植體脫分化形成的一團(tuán)無序生長的薄壁細(xì)胞。(7)再分化：已經(jīng)脫分化的細(xì)胞在一定條件下，又可經(jīng)過愈傷組織或胚狀體,這一過程叫作再分化。(8)不定芽：在高等植物正常的個(gè)體發(fā)育中，芽一般是只從莖尖或葉腋等的一定位置生出。所以這種象頂芽、 腋芽、畐y芽等均在一定部位生出的芽，稱為定芽。與此相反，凡從

3、葉、根、或莖節(jié)間等通常不形成芽 的部位生出的芽，則統(tǒng)稱為不定芽。(9)胚狀體：在離體植物細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)過程中，由一個(gè)或一些體細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和發(fā)育過程，形成的與合子胚相類似的結(jié)構(gòu)。二、植物組織培養(yǎng)過程(菊花為例)1、培養(yǎng)基的配制：方法：培養(yǎng)基干粉配制法稱取培養(yǎng)基干粉42g加水加熱煮沸溶解后定溶至1L,按照需要的濃度分別加入激素。(其中生根用的植物激素 NAA為0.2mg/1000ml)用1mol/L NaOH和1mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至5.8。將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至150ml組培瓶中，擰上蓋子，放入滅菌鍋 121 C，滅菌20min。2、菊花接種與培養(yǎng):（1）取材：取菊花生長旺盛

4、的嫩枝。（2）消毒：（省略） 流水沖洗后，加少許洗衣粉刷洗，流水沖20分鐘； 放入70%75%酒精中搖動23次，持續(xù)30秒，無菌水沖洗 23次，用無菌吸水紙吸干； 在2% 10%的次氯酸鈉溶液中消毒 810分鐘，無菌水沖洗 23次，無菌吸水紙吸干。接種：減去嫩枝3-4厘米（帶有3-4片嫩葉）接到培養(yǎng)基中（注意：不能將一片葉子接入進(jìn) 去并務(wù)必要提前做好殺菌、消毒、滅菌措施）培養(yǎng)：將無菌苗培養(yǎng)到光照培養(yǎng)箱中，條件溫度：25度、光照：12小時(shí)，每隔一周觀察幼苗生長情況（3）愈傷組織與不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)選用合適的培養(yǎng)基分別對植物材料進(jìn)行愈傷組織和不定芽的誘導(dǎo)。（4）繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后的連續(xù)

5、數(shù)代的擴(kuò)繁培養(yǎng)過程，目的在于繁殖出相當(dāng)數(shù)量的無菌苗。（5）生根培養(yǎng)當(dāng)無菌苗長到23cm時(shí)，選用生根培養(yǎng)基剪取無菌苗轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)。（6）煉苗、移栽煉苗：當(dāng)無菌苗根系長出約 3cm,把無菌苗進(jìn)行煉苗適應(yīng)外界環(huán)境。先在外界環(huán)境閉瓶鍛煉 3天,再開瓶鍛煉3天（以培養(yǎng)基上開始長出菌為宜）。移栽：去凈培養(yǎng)基，可先在滅過菌的珍珠巖或蛭石上培養(yǎng)使根系發(fā)達(dá)再轉(zhuǎn)移到土壤中。【注意事項(xiàng)】1實(shí)驗(yàn)所使用的器材要嚴(yán)格滅菌，注意無菌操作，避免因染菌導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失??；2、pH值對培養(yǎng)基的硬度有影響，pH過高培養(yǎng)基變硬，pH過低培養(yǎng)基不能凝固，所以要調(diào)整好培養(yǎng)基的pH值；操作不當(dāng)引起的雜菌污染實(shí)驗(yàn)結(jié)果，被雜菌

6、污染培養(yǎng)基3不要將一片葉子接入到培養(yǎng)基中拓展實(shí)驗(yàn)：選取不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽不同外植體的培養(yǎng)基激素配比如下:葉片:6 BA : 2mg/LNAA:0.5mg/L將葉片切成0.5cm*0.5cm小塊二.培訓(xùn)的及要求培訓(xùn)目的莖段：6 BA :NAA:3 mg/L0.2 mg/L將嫩枝切成1cm莖段腋芽：6 BA :NAA:3 mg/L0.2 mg/L將嫩枝切成1 2cm帶腋芽的莖段最后調(diào)節(jié)PH值至6.0(1)20天后，菊花不同外植體培養(yǎng)情況，見圖5:圖520天后菊花不同外植體形態(tài)(從左往右分別為：葉片愈傷、莖段愈傷、腋芽培養(yǎng)形態(tài))圖650天后菊花不同外植體形態(tài)(從左往右分別為：葉片愈傷、莖

7、段愈傷、腋芽培養(yǎng)形態(tài))(2) 50天后，菊花不同外植體培養(yǎng)情況，見圖6其中專業(yè)理論知識內(nèi)容包括：保安理論知識、消防業(yè)務(wù)知識、職業(yè)道德、法律常識、保安禮儀、救護(hù)知識。作技能訓(xùn)練內(nèi)容包括：崗位操作指引、勤務(wù)技能、消防技能、軍事技能。安全生產(chǎn)目標(biāo)責(zé)任書為了進(jìn)一步落實(shí)安全生產(chǎn)責(zé)任制，做到“責(zé)、權(quán)、利”相結(jié)合，根據(jù)我公司2015年度安全生產(chǎn)目標(biāo)的內(nèi)容，現(xiàn)與財(cái)務(wù)部簽訂如下安全生產(chǎn)目標(biāo):2、每月接受主管領(lǐng)導(dǎo)指派人員對安全生產(chǎn)責(zé)任狀的落一、目標(biāo)值:1、全年人身死亡事故為零，重傷事故為零，輕傷人數(shù)為零。2、現(xiàn)金安全保管，不發(fā)生盜竊事故。3、每月足額提取安全生產(chǎn)費(fèi)用，保障安全生產(chǎn)投入資金的到位。4、安全培訓(xùn)合格率

8、為100%。二、本單位安全工作上必須做到以下內(nèi)容:對本單位的安全生產(chǎn)負(fù)直接領(lǐng)導(dǎo)責(zé)任，必須模范遵守公司的各項(xiàng)安全管理制度，不發(fā)布與公司安全管理制度相抵觸的指令，嚴(yán)格履行本人的安全職責(zé)，確保安全責(zé)任制在本單位全面落實(shí)，并全力支持安全工作。保證公司各項(xiàng)安全管理制度和管理辦法在本單位內(nèi)全面實(shí)施，并自覺接受公司安全部門的監(jiān)督和管理。在確保安全的前提下組織生產(chǎn)，始終把安全工作放在首位，當(dāng)“安全與交貨期、質(zhì)量”發(fā)生矛盾時(shí)，堅(jiān)持安全第一的原則。參加生產(chǎn)碰頭會時(shí)，首先匯報(bào)本單位的安全生產(chǎn)情況和安全問題落實(shí)情況；在安排本單位生產(chǎn)任務(wù)時(shí)，必須安排安全工作內(nèi)容，并寫入記錄。在公司及政府的安全檢查中杜絕各類違章現(xiàn)象。組織本部門積極參加安全檢查，做到有檢查、有整改，記錄全。以身作則，不違章指揮、不違章操作。對發(fā)現(xiàn)的各類違章現(xiàn)象負(fù)有查禁的責(zé)任，同時(shí)要予以查處。虛心接受員工提出的問題，杜絕不接受或盲目指揮;發(fā)生事故，應(yīng)立即報(bào)告主管領(lǐng)導(dǎo)，按照“四不放過”的原則召開事故分析會，提出整改措施和對責(zé)任者的處理意見，并填寫事故登記表，嚴(yán)禁隱瞞不報(bào)或