喹諾酮類藥物殘留分析技術(shù)測(cè)定方法（四）

1、喹諾酮類藥物殘留分析技術(shù)測(cè)定方法（四） (6)自組裝環(huán)熒光顯微成像技術(shù)(self-ordered ring fluorescence microscopic imaging technique)自組裝環(huán)(selforderedring，sor)熒光顯微成像技術(shù)是通過分析物在環(huán)線上沉積后，運(yùn)用倒置熒光顯微鏡，以電荷耦合元件攝像系統(tǒng)作為顯微鏡圖像獵取技術(shù)采集圖像，將圖像信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)輸入計(jì)算機(jī)舉行數(shù)據(jù)讀取及圖像處理，然后應(yīng)用軟件對(duì)獲得圖像讀取相關(guān)參數(shù)舉行分析。它具有背景干擾小、耗樣量少、容易、迅速及對(duì)環(huán)境無污染等優(yōu)點(diǎn)。鄧鳳玉等采納自組裝環(huán)熒光顯微成像技術(shù)測(cè)定生物樣品中的(tos)，在ph 10.

2、50的氨-氯化銨緩沖溶液和聚乙烯醇-124(pva-124)介質(zhì)中，以mn2+和十六烷基三甲基溴化胺(ctmab)為敏化劑，tos在疏水性玻片表面形成自組裝環(huán)，建立了檢測(cè)tos的迅速辦法。當(dāng)點(diǎn)樣體積為0.20l時(shí)，線性范圍為4.05×10-144.28×10-13 mol/ring，lod為4.10×10-15 mol/ring；兔子灌喂tos藥片后血清中tos濃度的加標(biāo)回收率為90.0%105.0%，rsd為1.9%3.3%；羊組織樣品中tos加標(biāo)回收率在92.0%101.0%，rsd小于2.7%。dong等在疏水性載玻片上，利用sor熒光顯微成像技術(shù)，以zn2

3、+和ctmab作為增敏劑，pva-124及氨-氯化銨緩沖溶液(ph10.00)為介質(zhì)，建立了雞血清、雞肉、雞脂中司帕沙星(spa)殘留量測(cè)定辦法。滴定體積為0.20l，測(cè)定范圍在1.38×10-132.03×10-12 mol/ring之間(或6.90×10-8mol/l)；以或?yàn)樘崛?，spa在全部添加水平的回收率均在90.74%106.61%內(nèi)，rsd小于3.0%。 (7)生物傳感器法(biosensor) 1)分子印跡傳感器(molecularly imprinted sensor) 當(dāng)模板分子(印跡分子)與聚合物單體接觸時(shí)會(huì)形成多重作用點(diǎn)，通過聚合過程這種

4、作用就會(huì)被記憶下來，當(dāng)模板分子除去后，聚合物中就形成了與模板分子空間構(gòu)型相匹配的具有多重作用點(diǎn)的空穴，這樣的空穴將對(duì)模板分子及其類似物具有挑選識(shí)別特性。xuan-anh等建立了基于分子印跡聚合物(mip)的非競(jìng)爭(zhēng)性熒光偏振(fp)辦法來檢測(cè)牛奶中的enr。fp是一種熒光標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)，它把熒光物質(zhì)標(biāo)志在特定物質(zhì)分子，使原本微弱的反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)化成較強(qiáng)的熒光信號(hào)，同時(shí)在光路的合適位置分離加上起偏器和檢偏器就可測(cè)出待測(cè)物的偏振熒光強(qiáng)度，大大提高了辦法的敏捷度和特異性。fp法不需分別游離和結(jié)合的示蹤物，而且全部測(cè)定在溶液中舉行，可以達(dá)到真正的平衡，因而具有所需的樣品量少、敏捷度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便等多種

5、優(yōu)勢(shì)。qns本身具有較強(qiáng)的熒光可建立非競(jìng)爭(zhēng)的挺直fp辦法，辦法對(duì)enr的lod為36ng/l遠(yuǎn)低于其在牛奶中的mrl，而且對(duì)dan也有顯然的交錯(cuò)反應(yīng)。有機(jī)溶劑是常用且十分有效的樣品提取及蛋白沉淀試劑，然而抗體通常難以耐受較高濃度的有機(jī)溶劑。mip是一種化學(xué)合成的識(shí)別分子，對(duì)有機(jī)溶劑有著很高的耐受力，該辦法用兩倍于牛奶樣品體積的乙腈提取藥物，再用緩沖液1倍稀釋便可基本消退基質(zhì)干擾，挺直舉行熒光偏振檢測(cè)，這解釋其起碼可耐受30%的乙腈。 2)表面等離子共振傳感器(surface plasmon resonance sensor) 表面等離子共振(spr)技術(shù)具有敏捷度高、操作容易、能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)

6、的動(dòng)態(tài)過程，只需對(duì)樣品舉行容易的預(yù)處理，無需舉行標(biāo)志，也可以無需純化各種生物組分，耗樣量少，檢測(cè)時(shí)光短，已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)討論領(lǐng)域。marchesini等建立了基于spr的雙通道檢測(cè)辦法來篩選雞肉中的qns殘留。其中1號(hào)通道加入廣譜性多抗可同時(shí)檢測(cè)nor、cip、enr、sar和dif五種化合物，其半數(shù)抑制濃度(ic50)在210ng/l，平均回收率74%；2號(hào)通道挑選特異性多抗檢測(cè)flu的ic50為2.7ng/l，平均回收率88%。同時(shí)將此辦法與高解析lc-qtof/ms串聯(lián)，可在篩選后準(zhǔn)時(shí)舉行質(zhì)譜確證。huet等建立了魚肉、雞肉和雞蛋中13種qns(nor、sar、dif、cip、pef、ofl、flu、oxo、dan、enr、mar、lom和eno)的spr殘留檢測(cè)辦法。以nor為標(biāo)準(zhǔn)參照，在雞肉、雞蛋和魚肉中的cca分離為0.13g/kg、0.29g/kg和0.30g/kg，ic50分離為1g/kg、1.5g/kg和3.1g/kg，在雞蛋和雞肉基質(zhì)中的檢測(cè)范圍為0.110g/kg，在魚肉基質(zhì)中的檢測(cè)范圍為0.1100ug/kg。mellgren等研制了檢測(cè)牛奶中enr及其代謝物cip的spr免疫傳感器，其探頭表面籠罩著可更換的固定有enr的傳感膜，當(dāng)固定enr與制備的抗體發(fā)