國標-菌落總數(shù)測定

1、食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定1主題內容與適用范圍本標準規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測定方法.本標準適用于食品中菌落總數(shù)的測定.2術語菌落總數(shù)是指食品檢樣經過處理,在一定條件下培養(yǎng)后如培基成分、培養(yǎng)溫度和時間、pH、需氧性質等,所得1mLg瀚樣中所含菌落的總數(shù).本方法規(guī) 定的培養(yǎng)條件下所得結果,只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧 的菌落總數(shù).菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標志,也可以應用這一方法觀察 細菌在食品中繁殖的動態(tài),以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價時提供依據(jù).3引用標準GB 4789.28食品衛(wèi)生微生物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑4設備和材料4.1 溫箱：36±C.4.

2、2 冰箱：04C.4.3 恒溫水?。?6 ±£.4.4 天平.4.5 電爐4.6 吸管.4.7 xx瓶或三角瓶：容量為500mL.4.8 玻璃珠:直徑約5mm4.9 平皿：直徑為90mm.4.10 試管.4.11 放大鏡.4.12 菌落計數(shù)器.4.13 酒精燈.4.14 均質器或乳缽.4.15 試管架.4.16 滅菌刀或剪子.4.17 滅菌鐐子.4.18 和試劑5.1 營養(yǎng)xx培養(yǎng)基：按 GB 4789.28xx4.7M定.5.2 磷酸鹽緩沖稀釋液：按 GB 4789.28xx3.2颯定5.3生理鹽水.5.475%乙醇.6檢驗程序菌落總數(shù)的檢驗程序如下.圖略7操作步驟7.1

3、 檢樣稀釋及培養(yǎng)7.1.1 以無菌操作,將檢樣25g或mL潮碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或 其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內瓶內預置適當數(shù)量的玻璃珠或滅菌乳缽內,經充分 振搖或研磨做成1 ： 10的均勻稀釋液.固體檢樣在參加稀釋液后,最好置均質器中以8000100r/min的速度處理1min,做成1 ： 10的均勻稀釋液.7.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1 ： 10稀釋液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL滅 菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液,振搖試 管,混合均勻,做成1 ： 100的稀釋液.7.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作順序,做 10倍遞增稀釋液,如此每 遞增

4、稀釋一次,即換用1支1mL火菌吸管.7.1.4 根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或對標本污染情況的估計,選擇 23個適宜稀 釋度,分別在做10倍遞增稀釋的同時,即以吸取該稀釋度的吸管移 1mL稀釋液 于滅菌平皿內,每個稀釋度做兩個平皿.7.1.5 稀釋液移入平皿后,應及時將涼至 46c營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基可放置于 46 ± C水浴保溫注入平皿約15mL,并轉動平皿使混合均勻.同時將營養(yǎng)瓊脂培 養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內作空白對照7.1.6 待瓊脂凝固后,翻轉平板,置 36±C溫箱內培養(yǎng)48±2h7.2 菌落計數(shù)方法做平板菌落計數(shù)時,可用肉眼觀查,必要時用放大鏡檢查,以防遺

5、漏.在 記下各平板的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù).7.3 菌落計數(shù)的報告7.3.1 平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準.一個稀釋度使 用兩個平板,應采用兩個平板平均數(shù),其中一個平板有較大片狀菌落生長時, 那么不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù),假設片狀菌 落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù).平皿內如有鏈狀菌落生長時菌落之間無明顯界線,假設僅有一條鏈,可視為一個菌落；如果有不同來源的幾條鏈,那么應將每條鏈作為一個 菌落計.7.3.2 稀釋度的選擇7.3.2.1 應選擇平均菌落

6、數(shù)在30300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報告之 見表中例1.7.3.2.2 假設有兩個稀釋度,其生長的菌落數(shù)均在30300之間,那么視兩者之比方何來決定.假設其比值小于或等于2,應報告其平均數(shù)；假設大于2那么報告其中較小的數(shù)字見表中例2及3.7.3.2.3 假設所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300,那么應按稀釋度最高的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之見表中例4.7.3.2.4 假設所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30,那么應按稀釋度最低的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之見表中例5.7.3.2.5 假設所有稀釋度均無菌落生長,那么以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之見表中例6.7.3.2.6 假設所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在 30300之間,其中一局部大于 300或小于30時,那么以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之見 表中例7.7.3.3 菌落數(shù)的報告菌落數(shù)在100以內時,按其實有數(shù)報告,大于100時,采用二位有效數(shù) 字,在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入方法計算.為了縮短數(shù)字后面的 零數(shù),也可用10的指數(shù)來表示見表中 報告方式