檢疫09-冷藏和冰藏水產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定

1、冷藏和冰藏水產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定冷藏和冰藏水產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定 一、揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定 水蒸氣蒸餾法 1、實(shí)驗(yàn)原理 揮發(fā)性鹽基氮與動(dòng)物性食品新鮮度的關(guān)系。 被檢樣品濾液與弱堿性氧化鎂反應(yīng)后，使被檢樣品 中的堿性含氮物質(zhì)游離，并被蒸餾出來，用吸收液 吸收（含混合指示劑），再以標(biāo)準(zhǔn)酸液滴定，求其 含量。 使游離、蒸餾出 被吸收 被滴定 2、實(shí)驗(yàn)儀器材料與試劑 儀器材料： 半微量凱氏定氮蒸餾裝置、微量酸式滴定管等。 儀器試劑： 1%的氧化鎂混懸液 2%的硼酸吸收液 0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2%甲基紅乙醇溶液 0.1%亞甲基藍(lán)水溶液 3、實(shí)驗(yàn)方法 （1）制備樣品 肉浸液將樣品剔除脂肪、筋腱和

2、骨后，絞碎攪勻，稱 取10g置于錐形瓶中，加入100mL蒸餾水，不時(shí)搖動(dòng)， 浸漬30min后過濾，濾液放入冰箱備用。 （2）預(yù)先將盛有10mL吸收液并加入56滴混合指示劑 的錐形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入錐形瓶?jī)?nèi) 吸收液的液面下。 3、實(shí)驗(yàn)方法 （3）吸取5mL上述樣品肉浸液于蒸餾器反應(yīng)室內(nèi)，加1% 氧化鎂混懸液5mL，迅速蓋塞，并用水封口，通入蒸 汽蒸餾。在冷凝管出現(xiàn)第一滴冷凝水開始計(jì)時(shí)，蒸餾 5min即停止，取下錐形瓶，冷卻。 （4）錐形瓶中吸收液用0.0100mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 ，剛呈藍(lán)紫色為終點(diǎn)，記錄標(biāo)準(zhǔn)酸溶液消耗的體積（ mL）。同時(shí)作空白試驗(yàn)。 （V1-V2）Cs14

3、100 TVBN（mg/100g）= m5/100 式中: V1樣品消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，（mL） V2空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，（mL） Cs鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，（molL） m樣品質(zhì)量，（g） 141mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL相當(dāng)于氮的毫克數(shù) 各種鮮（凍）畜肉中揮發(fā)性鹽基氮含量應(yīng)15mg/100g 鮮（凍）畜肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB27072005 二、 三甲胺氮測(cè)定 1、原理 樣品用三氯乙酸除蛋白后，在強(qiáng)堿性下，三甲胺被甲苯萃取甲 苯經(jīng)脫水后，與苦味酸作用生成黃色的苦味酸三甲胺鹽，比 色定量。 2、主要儀器與試劑 721型分光光度計(jì)； 甲苯(AR，用無水硫酸鈉脫水) 40%三氯乙酸 2%苦味酸甲

4、苯（2g苦味酸(經(jīng)干燥器干燥)溶于100ml脫水甲苯） 0.02苦味酸(將2%苦味酸甲苯用無水甲苯100倍稀釋) 1+1碳酸鉀溶液(100g碳酸鉀加100m1水溶解) 10%甲醛溶液(取38%濃甲醛10m1，加28m1水) 三甲胺氮標(biāo)準(zhǔn)液(0.682g干燥器干燥的鹽酸三甲胺，加1m1 1：3鹽酸，加水定 容100ml，再100倍稀釋成1ml=10g三甲胺氮，即TMAN。一般要定氮，吸三甲 胺貯存液5m1于微量定氮蒸餾器內(nèi)，加約6ml10%氫氧化鈉，然后按總氮測(cè)定操作 ，求出含氮量） 3、試樣制備 取樣品肌肉(去脂肪)，用絞肉機(jī)絞碎或切細(xì)，取20g加 70ml水和10ml 40%三氯乙酸（除蛋白

5、作用），用分散機(jī)均質(zhì) ，用中速濾紙過濾，濾液備檢。 4、測(cè)定 吸濾液5ml(40gTMA-N)，于25m1具塞試管中，加1ml 10%甲 醛，10m1甲苯及3m1 1+1碳酸鉀液，立即緊塞振蕩1min，靜置 分層，吸取上層甲苯約8ml，于盛有0.5g以上無水硫酸鈉的試 管中，振蕩脫水后，吸取5m1于試管中，加5ml 0.02%苦味酸 甲苯混勻，于410nm下用1cm比色皿比色， 同時(shí)制備標(biāo)準(zhǔn)管，吸取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)液(10gm1)0、0.5、1、 2、3、4m1，加水補(bǔ)足5m1，以下同試樣操作，制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 5、計(jì)算 三、K值的測(cè)定 1、原理 ATP（三磷酸腺苷）ADP（腺苷二磷酸）AMP（腺苷酸）

6、IMP（肌苷酸） HxR（次黃嘌呤核苷酸）Hx（次黃嘌呤） 2、儀器與試劑 752C紫外可見分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠) ; 電動(dòng)離心 機(jī)( 上海手術(shù)器械廠) ;層析柱(自制) ; 717 強(qiáng)堿型陰離子 交換樹脂(16-50目) ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx標(biāo)準(zhǔn)品; 高氯酸(PCA) 、三 氯乙酸(TCA) , 丙酮, 氫氧化鈉, 氫氧化鉀, 鹽酸, 氨水, 氯化鈉等皆為分析純. 3、樣品的制備 取魚肉粉碎, 準(zhǔn)確稱取1g 置于10ml 離心試管中, 加 入冰冷的10% PCA 2ml, 用玻璃棒攪拌, 離心, 取上清 液. 沉淀部分再用冰冷的5% PCA處理2次. 合并三

7、次上 清液, 用10 mol/ L KOH 和1 mol / L KOH 中和至pH 為6.5, 沉淀部分離心除去, 用冰水洗滌沉淀, 最后用 10 ml 容量瓶定容后放入- 20的冷凍室內(nèi)保存待用 。 4、樹脂的處理 取717 強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂100 g, 放入1 L 的燒杯 中, 用300 ml 丙酮攪拌浸泡,濾去丙酮, 用去離子水 洗凈, 加入600 ml 1mo l/ L NaOH, 攪拌浸泡, 濾去 堿液, 反復(fù)水洗至呈中性, 加入1 mol/ L 的HCl 溶液 600 ml 攪拌浸泡, 濾去酸液, 多次水洗至呈中性, 最 后一次連水一起灌入瓶?jī)?nèi)放入冰箱內(nèi)冷藏備用. 5、柱子的

8、制備 樹脂柱采用0. 818 cm 玻璃柱, 底部用玻璃纖維墊 底, 柱內(nèi)裝入樹脂高度約8 cm,灌注時(shí)避免有氣泡產(chǎn)生 , 若有氣泡混入, 可在柱內(nèi)加入去離子水, 再用很細(xì) 的玻棒攪拌除去氣泡. 6、上柱操作 取2 ml 魚肉提取液或0.1- 0.5 ml 濃度為10 mmol/ L 的標(biāo)準(zhǔn) 樣品溶液, 置于50 ml燒杯中, 用0.5 mol/ L 的氨水調(diào)節(jié)pH 值 至9.4, 使之通過層析柱, 再在燒杯中用0.5 mol/L 氨水將少量 去離子水調(diào)節(jié)pH 值至9.4, 同樣使之通過層析柱. 當(dāng)樣品液下 降至樹脂上1 cm 左右時(shí), 加入40 ml 去離子水, 去離子水流完 后, 在柱下放上50 ml 容量瓶, 用量筒取0.001 mol/ L HCl 溶 液( A 液) 45 ml , 加一部分到柱中, 然后接上分液漏斗加入 剩下的A液. 待A 液流完后換上另一另50 ml 容量瓶, 同上操作 , 加入0. 6 mo