結核桿菌及其診斷(1).ppt

結核分枝桿菌及其臨床診斷 郴州市第一人民醫(yī)院醫(yī)學檢驗中心李勝濤 目錄 1結核分枝桿菌感染現(xiàn)狀2結核分枝桿菌生物特性 致病性及臨床診斷3結核分枝桿菌檢測方法及其應用4本室目前結核分枝桿菌檢測試劑情況分析5病例分析 1結核分枝桿菌感染現(xiàn)狀 1我國擁有近5 5億的結核感染人群2我國每年新發(fā)生肺結核患者100萬例3結核病主要經(jīng)呼吸道傳播4只要堅持正規(guī)治療 絕大多數(shù)肺結核患者是可以治愈的AIDS患者極易合并結核分枝桿菌感染 2結核分枝桿菌生物特性與致病性 2 1生物特性抵抗力強 塵埃上保持傳染性8 10d 在干燥痰內可存活6 8個月 痰液可增強結核分枝桿菌的抵抗力 變異性 可發(fā)生形態(tài) 菌落 毒力 免疫原性易發(fā)生耐藥性 MDR和XDR 每年有大約44萬例多藥耐藥型肺結核新患者出現(xiàn) 約15萬患者死于多藥耐藥型肺結核 2 2致病物質 莢膜 親和吞噬細胞 含有多種酶 能抑制溶酶體同吞噬體結合該菌細胞壁脂質含量較高 約占干重的60 索狀因子 主要損傷細胞線粒體和抑制氧化磷酸化過程 抑制粒細胞游走和引起肉芽腫磷脂 能促進單核細胞增生 并使巨噬細胞轉變?yōu)轭惿掀ぜ毎?從而形成肉芽腫硫酸腦苷酯 能抑制溶酶體同吞噬體結合蠟質D 可激發(fā)機體產(chǎn)生遲發(fā)超敏反應蛋白質 可激發(fā)機體產(chǎn)生超敏反應 2 3結核病的臨床診斷流行病學 臨床表現(xiàn) 體征 胸部影像學實驗室檢測 痰涂片細菌培養(yǎng)結核菌素實驗結核抗體檢查 可供參考組織病理檢查 3結核分枝桿菌檢測方法及其應用 3 1染色檢測結核分枝桿菌方法抗酸染色法 玻片法 濃集法 夾層杯法 妻 尼染色法熒光染色法 3 2微生物檢測結核分枝桿菌的方法細菌培養(yǎng)羅 琴氏培養(yǎng)基 2周 5周才能長出菌落BactecTB460 BactecMGIT960 20天液體變色培養(yǎng)基 德國MBRedox系統(tǒng)噬菌體裂解試驗 噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性結核桿菌L型 涂片其形態(tài)不易與其他細菌的L型相區(qū)別 蚌埠醫(yī)學院研制的結核桿菌L型液體培養(yǎng)基使結核桿菌L型生長迅速 3 3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體PPD試驗 結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗LAM 脂阿拉伯甘露聚糖 抗原 敏感74 5 結核菌分泌性蛋白抗原 敏感性70 9 純化BCG 卡介苗 蛋白 敏感性80 0 PPD抗原 敏感性83 6 結核蛋白芯片 ESAT 6 CFP10 LAM 38KD和16KD等 新的免疫檢測技術TSPOTTB技術 QuantiFERON TB利用結核桿菌感染者外周血單核細胞中存在結核特異的活化T淋巴細胞 這些淋巴細胞在受到結核桿菌特異抗原刺激后分泌干擾素而設計的T細胞免疫斑點試驗 3 4結核分枝桿菌分子生物學診斷技術 巢式PCR PCR 免疫層析法 多重PCR 定量PCR 新的PCR技術應用于檢測SSCP 單鏈構象多態(tài)性分析 SSCP用于結核桿菌基因的突變和耐藥性的快速檢測PCR RFLP技術 PCR和限制性內切酶相結合的技術 于鑒定分枝桿菌菌種 基因突變和耐藥性檢測GeneChips 檢測結核桿菌 菌種鑒定 研究耐藥基因以及基因組比較分析有靈敏快速 特異性高等特點 納米技術的應用HSAM 雜交信號放大方法利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNA提取步驟 組裝的納米顆粒作為報告信號的結合載體 擁有數(shù)量巨大的親和素位點 增加了報告信號 Biotin FITC 數(shù)量 放大了信號強度 提高了檢測的靈敏度 3 5上述方法應用比較染色檢測 是臨床診斷快速廉價易行的方法 但是陽性率太低 細菌培養(yǎng) 結核菌感染的診斷金標準 速度太慢 陽性率仍然較低 免疫學方法 一種快速 簡單 有較好敏感性和特異性的結核病輔助診斷 但檢測敏感性和特異性有待提高 但新的免疫方法的應用帶來希望 但還需要大量的樣本認證 分子生物學方法 快速 有效 特異性和敏感性均較高 4免疫室目前結核分枝桿菌檢測試劑應用情況報告 1 檢測結核抗體2 采用是金標法3 應用過二種以上的金標試劑4 采用的原理相同 但針對的特異性抗體不相同5 試劑的準確度 敏感性及特異性還有較大的提升空間 5病例分析 一 男性患者 31歲 因反復咳嗽 咳痰 發(fā)熱 盜汗伴游走性關節(jié)疼痛及結節(jié)性紅斑1年 患者1年前因受涼后發(fā)熱 咳嗽 咯痰 在某院診為 上感 經(jīng)抗生素及對癥治療病情無緩解 咳嗽日漸加重 伴盜汗 乏力 踝 膝關節(jié)游走性紅 腫 熱痛及雙下肢結節(jié)性紅斑 曾就診于數(shù)家醫(yī)院均診斷為風濕性關節(jié)炎并發(fā)慢性支氣管炎 查體 T37 5 P86 分 BP14 7 9 3kPa 發(fā)育正常 貧血貌 心界不大 心率86 心律規(guī)則 各瓣膜區(qū)無雜音 左肺可聞及干啰音 雙膝 踝關節(jié)紅腫 以左踝為著 雙下肢可觸及數(shù)個蠶豆大小結節(jié)性紅斑 實驗室檢查 WBC6 4 109 L N0 65 L0 33 L Hb95g L ESR85mm h 抗 O 450U RF陰性 ECG正常 彩色多譜勒超聲心動圖檢查未見異常 胸片兩肺文理增多 左踝關節(jié)X線攝片骨質未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性 纖維支氣管鏡檢查左上葉支氣管粘膜充血水腫 有粗糙不平小顆粒 刷檢涂片見大量抗酸桿菌 活檢病理診斷為支氣管內膜結核 診斷 支氣管