顯微制片中一些實用的小技巧

顯微制片中一些實用的小技巧,周建理,工具：美工刀、木工銼、小鋸、鋼絲刷。,在基層，顯微鑒定面臨兩大難題，一是如何制作一個特征明顯方便觀察的制片，二是如何在顯微鏡下找到藥材的鑒別點(diǎn)。今天我是想重點(diǎn)講前一個問題，在這里給大家介紹一下我個人的一些小的技巧。雖然是一些雕蟲小技，但也許比較實用。在顯微鑒定這個已經(jīng)十分成熟的技術(shù)面前，成敗的決定因素也許就是細(xì)節(jié)。我將分講的幾個 小技術(shù),1.如何對硬藥材進(jìn)行徒手切片刮片法2.如何將軟的小的藥材夾著切片用泡沫塑料3.如何做出更容易找到特征的粉末刀鋸銼法4.如何進(jìn)行葉表面制片磨片法5.無火加熱水合氯醛燙片法6.景深合成法在顯微拍攝和照片后處理上的應(yīng)用,一、如何在硬藥材上刮出一片好切片 水浸快刮,黃芪切片,方法：把藥材切面做平，手指蘸一點(diǎn)清水抹在切面上，稍等片刻，用刀在切面上連切帶刮地刮下一片薄片來。原理：硬藥材可以用水浸軟，當(dāng)把水蘸到切面時，水會朝下浸潤，形成上軟下硬的一個介面，如果下刀，只要朝下使點(diǎn)勁，你的刀自然就會在這介面上行走。你會有連切帶刮的手感，刮下一切片來。如何切得薄？關(guān)鍵是搶在合適的時候幾秒到半分鐘，各藥材不一樣，自己體會。如果你保持刀是潮的，你可以繼續(xù)切下去。,鋸出切面,銼刀做平,整出個平的切面,用水將其切面浸潤，13秒鐘后，用刀連切帶刎切出薄片?？梢杂糜才菽芰蠐踉谝粋?cè)，以保護(hù)安全。,入水，刀蘸水，可接著切。切出滿意的為止。,一組地骨皮的切片,地骨皮,地骨皮,地骨皮,黃芪,黃芪,桑寄生,桑寄生,菟絲子的徒手切片,二、如何將軟的小的藥材夾著切片 巧用泡沫塑料,把泡沫塑料切一口子，把泡軟的藥材放在中間，可多放幾個 。,用刀切出平面。,把刀架在前面的泡沫上，輕輕下壓，平切。每一刀壓力加大一點(diǎn)，連續(xù)切。會有幾刀切空，只要稍加壓又能切到。最后前泡沫會明顯高于后面。再切平，可繼續(xù)切。,原理就是利用泡沫的彈性，造成切片時只能切出薄片或切不到，很難切出厚片的情況。只要反復(fù)切，就一定能切到薄的片子。,最后一點(diǎn)的泡沫可不切下，讓切片積在其中和刀片上。,葉子先泡軟，切成條，卷疊起來夾著切。,如果葉子小或窄，可片疊在一起夾著切。,用一稍粗一點(diǎn)的棍扎一個洞，把植物的莖塞進(jìn)去（也可把花、葉子等卷成個棍形），可多塞幾根。,也可用打洞法夾片,酸棗仁可塞可夾,怕切到手的同仁們，硬的材料可以夾著刮。,北五味子這樣切方便,細(xì)小的種子類可粘在膠布條子上，或粘在膠水紙條上。剪下,剪成以上的樣子，折疊過來，兩面都粘上，再卷成小條，塞入泡沫塑料中，,最后就是切,切下的片放入水中，選薄的用。,枳殼種子的橫切,實例照片,垂盆草莖橫切,垂盆草莖橫切,金錢草莖橫切,荷葉的橫切,決明子的橫切,益智仁種子橫切局部,三、如何做出容易找到特征的粉末 刀鋸銼法,先用鋼絲刷清理木工銼。,把藥材放在銼上輕輕的磨，勁使大了粉末會變粗的。濺出的粉末多比較大，可以不要。磨好后，在紙下敲幾下，粉末就出來了。,最后，再用鋼絲刷將木工銼清理干凈。,也可用細(xì)齒鋼鋸輕輕地鋸，取特定部位（如節(jié)）處的粉末,甘草木栓細(xì)胞的專門制片,只要輕輕地對甘草表面進(jìn)行摩擦，并輕輕轉(zhuǎn)動。粉末中的大部分將都是甘草的木栓細(xì)胞。,甘草韌皮部的專門制片,再對清理掉栓皮的甘草銼粉，粉末絕大部分都是韌皮部了，集中見到的是晶纖維。,甘草木質(zhì)部的專門制片,用刀削去形成層之外的部分，下余的再磨粉，粉末的絕大部分將是木質(zhì)部，集中見到的是具緣紋孔導(dǎo)管和網(wǎng)紋導(dǎo)管。,這樣的方法，有助于對藥材顯微的科學(xué)研究，也十分有助于我們在檢定工作中迅速找到我們需要看到的特征。,如果想要細(xì)粉，可用這一類細(xì)鋼銼。最后強(qiáng)調(diào)一下，清理銼的銹和殘渣，最好用鋼絲刷。,四、如何進(jìn)行葉表面制片磨片法,在葉、花、果實的表面顯微觀察時，往往最困難的是如何獲得足夠薄的表面制片。,可以把大葉子剪成小片，小葉子直接上去磨。如果葉片過于皺縮，可先潤后壓平，干燥后再磨。,如果要看下表面，就把下表面朝上，如果要看上表面，就把上表面朝上。,拇指按下，在細(xì)鋼銼上輕輕摩擦，一直把葉面的一小部分磨到通透。用剪刀剪下磨薄的部分透化觀察。,磨后留下上表面的效果,磨后留下下表面的效果,這是磨后的柔毛淫羊藿的下表皮,紫蘇葉下表皮,五、不用酒精燈加熱透化制片燙板法：,這是一個滴定用的加熱保溫燙板，也可用薄層板的加熱顯色用的燙板,把溫度調(diào)到水合氯醛-甘油溶液的沸點(diǎn)以下一點(diǎn)。根據(jù)濃度比不一樣，沸點(diǎn)也稍有別，約100105度，自己一試就知道了。將材料加水合氯醛-甘油溶液，蓋上蓋玻片，放在燙板上，加熱，約1分鐘為輕度透化。約3分鐘為中度透化。約5分鐘為重度透化。,最后用鑷子把玻片推到另一塊板上，冷卻一下，就可以看顯微了。,如果發(fā)現(xiàn)片子上氣泡特多?？梢园褱囟日{(diào)高一點(diǎn)，保持微沸，讓氣泡慢慢地從蓋玻片邊緣逸出，幾十秒到兩分鐘時間，可去掉大部分的氣泡。,黃柏,六、如何克服顯微攝影不清楚的問題 景深合成法的應(yīng)用,做好制片后，現(xiàn)在大都有電腦顯微鏡可在觀察中隨時拍攝。,由于光學(xué)顯微鏡有一個景深特別小的問題。各特征又很難得會在一個平面上，這樣拍的顯微圖很難得有大面積清楚的地方。,連單目的學(xué)生用生物顯微鏡,普通顯微鏡加一個電子目鏡也一樣用。,比如這個理棗仁照片，它就是不清楚的。,我們用微調(diào)不同焦距下拍攝的，22個，沒有一個清楚。,目前世面已經(jīng)出現(xiàn)多家景深合成的軟件，這是合成后的。,黃柏纖維（未合成）,合成后的黃柏纖維（示紋孔）,拍攝顯微拍攝最大的問題是景深太小，無法獲得清楚的照片。我們采用固定樣品，動微調(diào)，拍攝不同焦距的照片。,最近，景深合成技術(shù)日趨成熟，現(xiàn)在許多顯微鏡廠家都已經(jīng)使用或正在開發(fā)這一技術(shù)。轉(zhuǎn)用PHOTOSHOP合成逐漸成為過去。,可以拍攝到一組圖片這是繁縷種子，共拍攝24張。但沒有一張是完全清楚的,啟動Bridge 向PHOTOSHOP中導(dǎo)入需要制作的圖片,過去是用PHOTOSHOP,合成后目前的軟件有稱Z軸合成,對大面積的顯微材料的多照片拼接合成,目前的軟件有稱“X、Y軸合成”,北五味子的合成,這是槲寄生莖橫切面間苯三酚鹽酸染色，再進(jìn)行微性狀景深合成和拼接合成的圖。,中藥微性狀觀察方法的一些新的進(jìn)展：一、放大倍數(shù)更大從100倍到500倍，主要是利用金相顯微鏡的內(nèi)置光源的功能。二、景深合成不用轉(zhuǎn)到PHOTOSHOP，可以在顯微鏡觀察的過程中一步合成。,這是某型號的金相顯微鏡(包括普通和偏光),這個“在Z軸的延伸”就是指景深合成,速度明顯加快了,不同批次的雞冠花子,青箱子種皮表皮細(xì)胞,雞冠花子種皮表皮細(xì)胞,同等條件下拍攝，大小明顯有區(qū)別。但不是十分穩(wěn)定。,青葙子 雞冠花子,在金相顯微鏡下放大到500倍,青葙子 雞