GB26400-2011食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑二十二碳六烯酸油脂(發(fā)酵法).pdf

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GBGBGBGB 26400-2011中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部發(fā)布2011-03-15 發(fā)布2011-05-15 實(shí)施食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑二十二碳六烯酸油脂（發(fā)酵法）1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑 二十二碳六烯酸油脂（發(fā)酵法）1范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于利用裂壺藻（Schizochytrium sp.）或者吾肯氏壺藻（Ulkenia amoeboida）或者寇氏隱甲藻（Crypthecodinium cohnii）菌種，經(jīng)生物發(fā)酵制得的二十二碳六烯酸（DHA)油脂。2結(jié)構(gòu)式和相對(duì)分子質(zhì)量2.1結(jié)構(gòu)式2.2相對(duì)分子質(zhì)量328.5（按 2007 年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量）3技術(shù)要求3.1感官要求：應(yīng)符合表 1 的規(guī)定。表 1 感官要求項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法色澤淺黃色至橙黃色取試樣 10 mL，置于試管中，于自然光線下采用目測(cè)的方法觀察其色澤及外觀形態(tài)，采用鼻嗅的方法檢查氣味。氣味具有本產(chǎn)品特有的氣味組織狀態(tài)油狀液體3.2理化指標(biāo)：應(yīng)符合表 2 的規(guī)定。2表 2理化指標(biāo)4其他要求產(chǎn)品應(yīng)裝于適宜的避光容器中充氮或真空保存，產(chǎn)品的最佳保存溫度為-5 以下。項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法含量(以 C22H32O2甘油三酯計(jì))，w/%35.0附錄 A 中 A.3不皂化物，w/%4.0GB/T 5535.1 乙醚提取法水分，w/%0.1GB 5009.3 減壓干燥法不溶性雜質(zhì)，w/%0.2GB/T 15688溶劑殘留/（mg/Kg)1.0GB/T 5009.37酸價(jià)（以 KOH 計(jì)）/（mg/g)1.0GB/T 5009.37過(guò)氧化值/（meq/kg）5.0GB/T 5009.37 滴定法反式脂肪酸，w/%1.0GB 5413.36黃曲霉毒素 B1/（g/kg)5.0GB/T 5009.22總砷(以 As 計(jì))/（mg/kg)0.1GB/T 5009.11 氫化物原子熒光光度法鉛(Pb)/（mg/kg)0.1GB 5009.12 石墨爐原子吸收光譜法3附錄A檢驗(yàn)方法A.1安全要求本檢驗(yàn)方法中使用的部分試劑具有毒性和腐蝕性，操作時(shí)須小心謹(jǐn)慎。如濺到皮膚上應(yīng)立即用水沖洗，嚴(yán)重者應(yīng)立即治療。使用易燃品時(shí)，嚴(yán)禁使用明火加熱。A.2一般規(guī)定除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，檢驗(yàn)用水符合GB/T 66822008 中規(guī)定的三級(jí)水。檢驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的規(guī)定制備。A.3二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的測(cè)定A.3.1試劑和材料A.3.1.1二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%。A.3.1.2十三碳烷酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%。A.3.1.3氫氧化鉀。A.3.1.4無(wú)水甲醇。A.3.1.5正庚烷，色譜純。A.3.1.6石油醚, 沸程，3060。A.3.1.7氫氧化鉀甲醇溶液（4 mol/L） ：稱取22.4g氫氧化鉀（A.3.1.3)于燒杯中，加入適量無(wú)水甲醇（A.3.1.4)使溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL的容量瓶中，當(dāng)氫氧化鉀甲醇溶液冷卻至室溫后，用無(wú)水甲醇稀釋至刻度，搖勻。A.3.1.8二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯儲(chǔ)備液（10 mg/mL） ：稱取250 mg（精確至0.000 1 g）二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯（A.3.1.1）于25 mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。A.3.1.9十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（10 mg/mL） ：稱取0.25g（精確至0.000 1 g）十三碳烷酸甘油三酯（A.3.1.2）于25 mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。A.3.1.10標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制按表A.1分別移取適量二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯儲(chǔ)備液（A.3.1.8）于6個(gè)10 mL容量瓶中，分別移入2.0 mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（A.3.1.9），加入正庚烷(A.3.1.5)稀釋至刻度，搖勻。表 A.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯含量編號(hào)加入二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯儲(chǔ)備液的體積(mL)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度（mg/mL）10020.10.130.50.541.01.0452.02.063.03.0A.3.1.11氮?dú)?，純?9.999%。A.3.1.12氦氣，純度99.9999%。A.3.2儀器和設(shè)備A.3.2.1氣相色譜-質(zhì)譜儀。A.3.2.2氣相色譜儀，配氫火焰離子化檢測(cè)器。A.3.2.3分析天平：感量為0.01 g、0.1 mg。A.3.2.4離心機(jī)。A.3.2.5振搖器。A.3.3定性分析A.3.3.1二十二碳六烯酸（DHA)油脂稱取0.25 g（精確至0.01 g）試樣于50 mL容量瓶中，加入適量正庚烷（A.3.1.5）使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取2 mL正庚烷溶解液于10 mL帶蓋離心管中，加入0.2 mL氫氧化鉀甲醇溶液（A.3.1.7），劇烈振蕩1 min以上，放置10 min（甲基化反應(yīng)）。如有機(jī)層渾濁，可離心使之澄清。取上層有機(jī)相溶液備用。A.3.3.2測(cè)定A.3.3.2.1氣相色譜條件a)色譜柱：DB-5ms（ 30.0 m0.25 mm0.25 m）石英毛細(xì)管柱，或相當(dāng)者；b)柱溫程序：100 保持3 min，以10 /min升至260 ，保持8 min；c)載氣：氦氣（A.3.1.12）；d)流速：1.0 mL/min；e)進(jìn)樣口溫度：250 ；f)進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣（分流比為1：10）；g)進(jìn)樣量：1 L。A.3.3.2.2質(zhì)譜條件a)離子源：EI源，70 eV；b)接口溫度：280 ；c)離子源溫度：230 ；d)四極桿溫度：150 ；e)數(shù)據(jù)采集模式：全掃描；f)質(zhì)量掃描范圍：20m/z330m/z；g)溶劑延遲3.5min。A.3.3.3結(jié)果判定試樣的質(zhì)譜圖應(yīng)與二十二碳六烯酸（DHA)甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖（附錄B中圖B.1）一致。A.3.4定量分析A.3.4.1原理5試樣中二十二碳六烯酸（DHA)在氫氧化鉀甲醇作用下，生成二十二碳六烯酸（DHA)甲酯，用配有氫火焰離子化檢測(cè)器的氣相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以內(nèi)標(biāo)法定量，結(jié)果以二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯計(jì)。A.3.4.2試液的制備A.3.4.2.1二十二碳六烯酸（DHA)油脂試樣溶液的制備稱取0.04 g試樣（精確至0.000 1 g）于10 mL容量瓶中，加入2.0 mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（A.3.1.9），以下按A.3.3.1“加入適量正庚烷（A.3.1.5）取上層有機(jī)相溶液備用”操作。每份試液至少做兩個(gè)平行樣。A.3.4.2.2空白溶液的制備除不加試樣外按A.3.4.2.1所述方法進(jìn)行處理。A.3.4.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液甲酯化處理分別準(zhǔn)確吸取A.3.1.10中系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液2 mL于10 mL帶蓋離心管中，以下按A.3.3.1自“加入0.2 mL氫氧化鉀甲醇溶液（A.3.1.7）取上層有機(jī)相溶液備用”操作。A.3.4.4測(cè)定A.3.4.4.1氣相色譜條件a)色譜柱：DB-23（30.0 m0.25 mm0.25 m）石英毛細(xì)管柱，或相當(dāng)者；b)柱溫程序：90 保持5 min，9 /min升至240 ，保持5 min，3 /min升至250 ；c)載氣：氮?dú)猓ˋ.3.1.11）；d)流速：1.33 mL/min；e)進(jìn)樣口溫度：250 ；f） 進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣（分流比為1：100）；g） 檢測(cè)器溫度：300 ；i） 進(jìn)樣量：1 L。A.3.4.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按A.3.4.4.1所列測(cè)定條件，將甲酯化后的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液依次進(jìn)樣，測(cè)量二十二碳六烯酸（DHA)甲酯和十三碳烷酸甲酯的峰面積。二十二碳六烯酸（DHA)甲酯的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度成正比。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，以二十二碳六烯酸（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。二十二碳六烯酸（DHA)甲酯和十三碳烷酸甲酯的色譜圖參見(jiàn)附錄C中圖C.1。按公式（A.1）計(jì)算回歸參數(shù)：()yaxb=+(A.1)式中：y二十二碳六烯酸（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；a回歸曲線的斜率；x標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；b回歸曲線的截距。A.3.4.4.3試液的測(cè)定6將空白溶液（A.3.4.2.2）和試樣溶液（A.3.4.2.1）依次進(jìn)樣，扣除空白值，獲得二十二碳六烯酸（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比。A.3.4.5結(jié)果計(jì)算試樣中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的含量X1按公式（A.2）計(jì)算：%mVab-yX11001=(A.2)式中：X1試樣中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯含量，%；y試液甲酯化后二十二碳六烯酸（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；a回歸曲線的斜率；b回歸曲線的截距；V試液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m試樣的質(zhì)量，單位為毫克（mg）。如含量以二十二碳六烯酸（DHA)計(jì)，乘以換算系數(shù)0.9597。計(jì)算結(jié)果以平行測(cè)定值的算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)點(diǎn)后兩