GB5413.26-2010食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中?；撬岬臏y定.pdf

中華人民共和國國家標準中華人民共和國國家標準GB 5413.262010食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中?；撬岬臏y定 National food safety standard Determination of taurine in foods for infants and young children, milk and milk products 中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實施GB 5413.262010 I 前 言 本標準第二法等同采用國際分析家學會（AOAC）AOAC 997.05 Taurine in powdered milk and powdered infant formulae。 本標準代替GB/T 5413.26-1997嬰幼兒食品和乳粉 ?；撬岬臏y定。 本標準與GB/T 5413.26-1997相比，主要變化如下： 將原標準方法OPA柱后衍生高效液相色譜法定為第一法； 增加單磺酰氯柱前衍生高效液相色譜法為第二法； 對原標準的結(jié)構(gòu)進行了修改。 外標法定量采用標準曲線法； 增加附錄 A 標樣的液相色譜圖。 本標準附錄A為資料性附錄。 本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB/T 5413.26-1997。 GB 5413.262010 1 食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中牛磺酸的測定 1 范圍 本標準規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中?；撬岬臏y定方法。 本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中?；撬岬臏y定。 2 規(guī)范性引用文件 本標準中引用的文件對于本標準的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。 第一法 OPA 柱后衍生法 3 原理 樣品用偏磷酸溶液溶解，經(jīng)超聲波振蕩提取、離心、微孔濾膜過濾后，通過鈉離子色譜柱分離，與鄰苯二甲醛（OPA）衍生反應(yīng)，用熒光檢測器進行檢測，外標法定量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級水。 4.1 偏磷酸（HPO3）。 4.2 檸檬酸三鈉(Na3C6H5O72H2O)。 4.3 苯酚(C6H6O)。 4.4 硝酸(HNO3)。 4.5 甲醇(CH3OH)：色譜純。 4.6 硼酸(H3BO3)。 4.7 氫氧化鉀(KOH)。 4.8 鄰苯二甲醛(C8H6O2)（OPA）。 4.9 2-巰基乙醇(C2H6OS)。 4.10 聚氧乙烯月桂酸醚（Brij-35）。 4.11 ?；撬針藴势罚杭兌?9%。 4.12 偏磷酸溶液（10 g/L）：稱取 10.0 g 偏磷酸（4.1），用水溶解并定容至 1000 mL。 GB 5413.262010 2 4.13 檸檬酸緩沖液：稱取 19.6 g 檸檬酸三鈉（4.2），加 950 mL 水溶解，加入 1 mL 苯酚（4.3），用硝酸（4.4）調(diào) pH 值至 3.103.25，經(jīng) 0.45m 微孔濾膜過濾。 4.14 柱后熒光衍生溶劑（鄰苯二甲醛溶液） 4.14.1 硼酸鉀溶液（0.5 mol/L）：稱取 30.9 g 硼酸（4.6），26.3 g 氫氧化鉀（4.7），用水溶解并定容至 1000 mL。 4.14.2 鄰苯二甲醛衍生溶液：稱取 0.60 g 鄰苯二甲醛（4.8），用 10 mL 甲醇（4.5）溶解后，加入 0.5 mL 2-巰基乙醇（4.9）和 0.35 g Brij-35（4.10），用 0.5 mol/L 的硼酸鉀溶液（4.14.1）定容至 1000 mL，經(jīng) 0.45 m 微孔濾膜過濾。臨用前配制。 4.15 ?；撬針藴嗜芤?4.15.1 牛磺酸標準儲備溶液（1mg/mL） ：準確稱取 0.1000 g ?；撬針藴势罚?.11） ，用水溶解并定容至 100 mL。儲備液在 4下可保存 7 天。 4.15.2 牛磺酸標準工作液：將?；撬針藴蕛湟海?.15.1）用水稀釋制備一系列標準溶液，標準系列濃度為：0、5、10、15、20 g/mL。臨用前配制。 5 儀器和設(shè)備 5.1 高效液相色譜儀，帶有熒光檢測器。 5.2 柱后反應(yīng)器。 5.3 熒光衍生溶劑輸液泵。 5.4 超聲波振蕩器。 5.5 pH 計：精度為 0.01。 5.6 離心機：轉(zhuǎn)速5000 轉(zhuǎn)/分鐘。 5.7 0.45 m 微孔濾膜。 5.8 天平：感量為 1mg，0.1mg。 6 分析步驟 6.1 試樣的處理 準確稱取固體樣品 1 g5 g 試樣，液體樣品 5 g20 g（精確至 0.01g，試樣中含?；撬?5 g 以上） ，加 30 mL 偏磷酸溶液 （4.12） 溶解， 充分搖勻， 移入 100 mL 容量瓶中； 放入超聲波振蕩器中振蕩 10 min15 min， 取出冷卻至室溫后， 用水定容至刻度； 樣液在 5000 轉(zhuǎn)/分鐘條件下離心 10 min， 取上清液經(jīng) 0.45 m 微孔膜（5.7）過濾，接取中間濾液以備進樣。 6.2 測定 6.2.1 參考色譜條件 色譜柱：鈉離子氨基酸分析專用柱（250 mm4.6 mm）或同等性能的色譜柱。 流動相：檸檬酸緩沖液（4.13） 。 流動相流速：0.30 mL/min。 GB 5413.262010 3 熒光衍生溶劑流速：0.30 mL/min。 柱溫：55 。 檢測波長：激發(fā)波長：338 nm，發(fā)射波長：425 nm。 進樣量：20 L。 6.2.2 標準曲線繪制 將?；撬針藴氏盗泄ぷ饕海?.15.2）依次經(jīng)衍生后按上述推薦色譜條件上機測定，記錄色譜峰面積，色譜圖參見附錄 A。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 6.2.3 試液測定 將試液按上述推薦色譜條件上機測定，從標準曲線中查得試液相應(yīng)的濃度。 7 分析結(jié)果的表述 7.1 結(jié)果計算 1000100=mVcX(1) 式中： X 試樣中?；撬岬暮?，單位為毫克/100 克（mg/100g） ； c 試液的進樣濃度，單位為微克/毫升（g/mL） ； V試樣定容容積，單位為毫升（mL） ； m試樣質(zhì)量，單位為克（g） 。 7.2 結(jié)果表示 以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。 第二法 單磺酰氯柱前衍生法 9 原理 樣品用水溶解，用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白質(zhì)。取上清液用丹磺酰氯衍生反應(yīng)，衍生物經(jīng) C18反相色譜柱分離，用紫外檢測器（波長 254 nm）或熒光檢測器（激發(fā)波長 330 nm，發(fā)射波長 530 nm）檢測，外標法定量。 10 試劑和材料 除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級水。 10.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。 10.2 冰乙酸（CH3COOH） 。 10.3 鹽酸。 10.4 無水碳酸鈉（Na2CO3） 。 GB 5413.262010 4 10.5 亞鐵氰化鉀K4Fe(CN)6。 10.6 乙酸鋅Zn(CH3COO)2。 10.7 乙酸鈉Na(CH3COO)。 10.8 鹽酸甲胺（甲胺鹽酸鹽） （CH3NH2HCl）。 10.9 丹磺酰氯（5-二甲氨基萘-1-磺酰氯）：色譜純。 注：丹磺酰氯對光和濕敏感不穩(wěn)定。 10.10 牛磺酸標準品：純度99%。 10.11 鹽酸（1 mol/L） ：吸取 9 mL 鹽酸（10.3） ，用水稀釋并定容到 100 mL。 10.12 沉淀劑 10.12.1 沉淀劑：稱取 15.0 g 亞鐵氰化鉀（10.5） ，用水溶解并定容至 100 mL。該沉淀劑在室溫下 3個月內(nèi)穩(wěn)定。 10.12.2 沉淀劑：稱取 30.0 g 乙酸鋅（10.6） ，用水溶解并定容至 100 mL。該沉淀劑在室溫下 3 個月內(nèi)保持穩(wěn)定。 10.13 碳酸鈉緩沖液（pH 9.5） （80 mmol/L） ：稱取 0.424 g 無水碳酸鈉（10.4） ，加 40 mL 水溶解，用1 mol/L 鹽酸（10.11）調(diào) pH 值至 9.5，用水定容至 50 mL。該溶液在室溫下 3 個月內(nèi)穩(wěn)定。 10.14 丹磺酰氯溶液 （1.5 mg/mL） ： 稱取 0.15 g 丹磺酰氯 （10.9） ， 用乙腈 （10.1） 溶解并定容至 100mL。臨使用前配制。 10.15 鹽酸甲胺溶液（20 mg/mL） ：稱取 2.0 g 鹽酸甲胺（10.8） ，用水溶解并定容至 100 mL。該溶液在 4下 3 個月內(nèi)穩(wěn)定。 10.16 乙酸鈉緩沖液（pH4.2） （10 mmol/L） ：稱取 0.820 g 乙酸鈉（10.7） ，加 800 mL 水溶解，用冰乙酸（10.2）調(diào)節(jié) pH 值至 4.2，用水定容至 1000 mL，經(jīng) 0.45 m 微孔濾膜過濾。 10.17 牛磺酸標準溶液 10.17.1 ?；撬針藴蕛淙芤海? mg/mL） ：稱取 0.1000 g 牛磺酸標準品（10.10） ，用水溶解并定容至100 mL。儲備液在 4下可保存 7 天。 10.17.2 ?；撬針藴使ぷ饕海ㄗ贤鈾z測用） ：將?；撬針藴蕛湟海?0.17.1）用水稀釋制備一系列標準溶液，標準系列濃度為：0、5、10、15、20 g/mL。臨用前配制。 10.17.3 ?；撬針藴使ぷ饕海晒鈾z測用） ：將牛磺酸標準儲備液（10.17.2）用水稀釋制備一系列標準溶液，標準系列濃度為：0、0.5、0.10、0.15、0.20 g/mL。臨用前配制。 11 儀器和設(shè)備 11.1 高效液相色譜儀，帶紫外檢測器或二極管陣列檢測器或者熒光檢測器。 11.2 pH 計：精度為 0.01。 11.3 渦旋混合器。 11.4 超聲波振蕩器。 GB 5413.262010 5 11.5 離心機：轉(zhuǎn)速5000 轉(zhuǎn)/分鐘。 11.6 0.45 m 微孔濾膜。 11.7 天平：感量 1mg，0.1mg。 12 操作步驟 12.1 試樣的處理 12.1.1 試液提取 稱取固體樣品 1 g5 g，液體樣品 5 g30 g 試樣（精確至 0.01 g，若用紫外檢測器，試樣中含?；撬嵋嗽?1 g 以上， 若用熒光檢測器， 試樣中含牛磺酸宜在 50g 以上） 于 100 mL 容量瓶中， 加入 80 mL溫水（50 60 ）溶解，充分混勻，置超聲波振蕩器上振蕩 10 min，冷卻到室溫。加 1.0 mL 沉淀劑（10.12.1） ，渦旋混合，1.0 mL 沉淀劑（10.12.2） ，渦旋混合，用水定容至刻度，充分混勻，試液于 5000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心 10 min，取上清液備用。上清液在 4 暗處保存放置 24 h 穩(wěn)定。 12.1.2 試液衍生化 吸取 1.00 mL 上述上清液到 10 mL 具塞玻璃試管中，加入 1.00 mL 碳酸鈉緩沖液（10.13） ，1.00 mL丹磺酰氯溶液（10.14） ，充分混合，室溫避光衍生反應(yīng) 2 h（1 h 后需搖晃 1 次） ，加入 0.10 mL 鹽酸甲胺溶液（10.15）渦旋混合，以終止反應(yīng)，避光靜置至沉淀完全。取上清液經(jīng) 0.45 m 微孔濾膜（11.6）過濾，取濾液備用。衍生物在 4 可避光保存 48 h。 另取 1.00 mL 標準工作液（10.17.2），與試液同步進行衍生。 12.2 測定 12.2.1 參考色譜條件 色譜柱：C18反相色譜柱（粒徑 5 m，250 mm4.6 mm）或同等性能色譜柱。 流動相：10 mmol/L 乙酸鈉緩沖液（10.16）乙腈（10.1）70+30。 流速：1.00 mL/min。 柱溫：室溫。 檢測波長：紫外檢測器或二極管陣列檢測器：254 nm； 或熒光檢測器：激發(fā)波長：330 nm；發(fā)射波長：530 nm。 進樣量：20 L。 12.2.2 標準曲線繪制 將?；撬針藴氏盗泄ぷ饕?（紫外檢測用）（10.17.2） 或?；撬針藴氏盗泄ぷ饕?（熒光檢測用）（10.17.3）的衍生物依次按上述推薦色譜條件上機測定， 記錄色譜峰面積， 色譜圖參見附錄 A。 以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 12.2.3 試液測定 將試液衍生物按上述推薦色譜條件上機測定，從標準曲線中查得試液相應(yīng)的濃度。 13 分析結(jié)果的表述 試樣中牛磺酸的含量按式（2）計算： 1000100=mVcX(2) 式中： X試樣中?；撬岬暮?，單位為毫克/100 克（mg/100g） ； GB 5413.262010 6 c試液的進樣濃度，單位為微克/毫升（g/mL） ； V試樣定容體積，單位為毫升（mL） ； m試樣質(zhì)量，單位為克（g） 。 以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 14 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。 15 其他 本標準的定量限為： 當取樣量為10.00 g時， 第一法0.5 mg/100g ， 第二法中紫外檢測法為5 mg/100g，熒光檢測法為 0.1 mg /100 g。 GB 5413.262010 7 附錄 A （資料性附錄） 標準溶液液相色譜