TFDSA-中藥材中黃曲霉素毒素的測(cè)定編制說(shuō)明

《中藥材中黃曲霉毒素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》編制說(shuō)明一、編制背景黃曲霉毒素具有強(qiáng)烈的毒性和致癌性，對(duì)人體健康的危害性極大。近年來(lái)中藥材黃曲霉毒素污染的現(xiàn)象層出不窮，從中藥材種植/養(yǎng)殖、采收到加工、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)，若溫度、濕度等環(huán)境條件控制不當(dāng)，極易產(chǎn)生黃曲霉毒素。世界衛(wèi)生組織規(guī)定食品黃曲霉毒素B1最大限量為15.00μg/kg，嬰兒相關(guān)食品不能檢出黃曲霉毒素B1；歐盟規(guī)定了其在水果中的限量標(biāo)準(zhǔn)?！吨袊?guó)藥典》規(guī)定柏子仁等藥材及飲片黃曲霉毒素B1不得高于5μg/kg、黃曲霉毒素總量不得高于10μg/kg。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)中藥材中黃曲霉毒素測(cè)定相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定中藥材中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2的檢測(cè)方法的適用范圍、原理、試劑、材料、儀器設(shè)備、試樣處理、測(cè)定、計(jì)算與結(jié)果表述。本標(biāo)準(zhǔn)適用于柏子仁、決明子、陳皮、蓮子、薏苡仁、地龍、螟蚣、馬錢(qián)子、蟬蛻、松香、當(dāng)歸等動(dòng)植物類(lèi)中藥材及飲片中黃曲霉素B1、B2、G1、G2的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中藥材中黃曲霉毒素檢測(cè)方法具有快速靈敏準(zhǔn)確簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，檢測(cè)成本低，定量限（0.1μg/kg）滿(mǎn)足國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量定量檢驗(yàn)的要求，應(yīng)用于中藥材收購(gòu)、倉(cāng)儲(chǔ)、生產(chǎn)、流通、質(zhì)量控制、市場(chǎng)監(jiān)督等領(lǐng)域，能夠通過(guò)快速檢測(cè)發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素污染，對(duì)于保障中藥材的質(zhì)量安全，保護(hù)人體健康，具有重要意義。為了幫助中藥材收購(gòu)、倉(cāng)儲(chǔ)、生產(chǎn)、流通、質(zhì)量控制、市場(chǎng)監(jiān)督等領(lǐng)域，能夠通過(guò)快速檢測(cè)發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素污染，快速靈敏準(zhǔn)確簡(jiǎn)便地檢測(cè)中藥材中黃曲霉毒素的含量，降低檢測(cè)成本，滿(mǎn)足國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量定量檢驗(yàn)的要求，保障中藥材的質(zhì)量安全，保護(hù)人體健康。南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務(wù)平臺(tái)收集相關(guān)資料，進(jìn)行實(shí)際調(diào)研，借鑒《中國(guó)藥典》和SN/T4604-2016《進(jìn)出口中藥材中真菌毒素的測(cè)定》等國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)對(duì)中藥材中黃曲霉毒素含量測(cè)定的要求，聯(lián)合江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院等各相關(guān)單位研究制定該團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。二、任務(wù)來(lái)源根據(jù)中國(guó)食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會(huì)2025年1月發(fā)布的關(guān)于《中成藥中大米源性成分定性檢測(cè)方法PCR法》等兩項(xiàng)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)的公告，由南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務(wù)平臺(tái)有限公司作為團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《中藥材中黃曲霉毒素含量測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的牽頭起草單位，負(fù)責(zé)組織該團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的編制工作。三、標(biāo)準(zhǔn)的編制（一）標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位、起草人及其所做的工作1.項(xiàng)目負(fù)責(zé)人呂興祥：主要負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)總體策劃和協(xié)調(diào)；龔玉霞：負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)內(nèi)容統(tǒng)籌；徐文君、李桂杰負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)的查新、資料和實(shí)際調(diào)研，標(biāo)準(zhǔn)文本的起草和修改及標(biāo)準(zhǔn)的送審及報(bào)批；項(xiàng)偉、孟鵬、盧清瑤、徐曉嵐等負(fù)責(zé)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)文本提出補(bǔ)充和修改意見(jiàn)。2.項(xiàng)目主要起草人：本標(biāo)準(zhǔn)由呂興祥、龔玉霞、徐文君、李豐勇、李桂杰、楊曉莉、項(xiàng)偉、孟鵬、張嬋、盧清瑤、徐曉嵐、韓峰、李義梅、席海明、徐東等專(zhuān)家共同起草。3.標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位本標(biāo)準(zhǔn)由南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務(wù)平臺(tái)有限公司、江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院、青島市華測(cè)檢測(cè)技術(shù)有限公司、內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗(yàn)研究院、延安市藥品檢驗(yàn)所、淄博高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)生物醫(yī)藥研究院（山東大學(xué)淄博生物醫(yī)藥研究院）等單位共同起草。4.標(biāo)準(zhǔn)起草組成員主要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)涉及的相關(guān)技術(shù)問(wèn)題，通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)研、問(wèn)卷咨詢(xún)、網(wǎng)絡(luò)檢索等工作，對(duì)國(guó)外和國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)區(qū)情況進(jìn)行了深入的研究。同時(shí)召開(kāi)研討會(huì)議對(duì)關(guān)鍵性的問(wèn)題征集行業(yè)專(zhuān)家的意見(jiàn)和建議。（二）標(biāo)準(zhǔn)編制的原則和主要工作過(guò)程1.編制原則（1）科學(xué)性原則本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定進(jìn)行編寫(xiě)和表述，力求做到“統(tǒng)一性、協(xié)調(diào)性、適用性、一致性、規(guī)范性”。（2）先進(jìn)性原則本標(biāo)準(zhǔn)為新制定標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容符合檢驗(yàn)檢測(cè)行業(yè)現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)要求，符合國(guó)內(nèi)企事業(yè)單位和檢測(cè)機(jī)構(gòu)的實(shí)際情況，兼顧方法的適用性和可操作性。既能適應(yīng)實(shí)際生產(chǎn)和檢測(cè)需要，又能保證方法的推廣應(yīng)用。填補(bǔ)了中藥材中黃曲霉毒素含量測(cè)定的行業(yè)空白。（3）適用性原則確定了標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍，本標(biāo)準(zhǔn)適用于柏子仁、決明子、陳皮、蓮子、薏苡仁、地龍、螟蚣、馬錢(qián)子、蟬蛻、松香、當(dāng)歸等動(dòng)植物類(lèi)中藥材及飲片中黃曲霉素B1、B2、G1、G2的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。2.主要工作過(guò)程為了確保標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容的準(zhǔn)確性、實(shí)用性，保證標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容科學(xué)、合理、協(xié)調(diào)、可行，南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務(wù)平臺(tái)有限公司、江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院組成制定小組，針對(duì)中藥材中黃曲霉毒素含量測(cè)定國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)制修訂情況進(jìn)行了調(diào)研。2024年9-11月，進(jìn)行資料和實(shí)際調(diào)研，選定標(biāo)準(zhǔn)方向和基本內(nèi)容框架，并編制標(biāo)準(zhǔn)草稿；2024年12月，提出立項(xiàng)申請(qǐng)；2025年1月，本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目通過(guò)立項(xiàng)；2025年1月，編制組形成對(duì)外征求意見(jiàn)稿；2025年1-2月，擬對(duì)外公開(kāi)征求意見(jiàn)，通過(guò)中國(guó)食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會(huì)網(wǎng)站及公眾號(hào)、一對(duì)一郵件等多種方式進(jìn)行。（三）標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容及論據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)新版GB/T1.1的要求編制，對(duì)多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)文件、研究成果進(jìn)行梳理，并依據(jù)中藥材中需要檢測(cè)的黃曲霉毒素情況，結(jié)合實(shí)驗(yàn)情況，確定了本方法。標(biāo)準(zhǔn)制定的主要內(nèi)容及其依據(jù)簡(jiǎn)要介紹如下：1.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2（以下簡(jiǎn)稱(chēng)AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2）的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于柏子仁、決明子、陳皮、蓮子、薏苡仁、地龍、螟蚣、馬錢(qián)子、蟬蛻、松香、當(dāng)歸等動(dòng)植物類(lèi)中藥材及飲片中AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。2.規(guī)范性引用文件GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法3.術(shù)語(yǔ)和定義GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則》和GB/T20001.4-2009《標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第4部分:化學(xué)分析方法》界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。4.標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容（1）原理用甲醇-水溶液提取中藥材試樣中的AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2，固相凈化柱法或免疫磁珠法凈化，凈化液濃縮、定容和過(guò)濾后經(jīng)液相色譜分離，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。（2）樣品制備的要求中藥材樣品顆粒的大小與樣品的均勻性與黃曲霉毒素的提取效率有關(guān)，當(dāng)樣品細(xì)度不足20目時(shí)，黃曲霉毒素的提取效率較低，因此本方法要求取出具有代表性的樣品適量，用高速粉碎機(jī)粉碎至全部過(guò)篩網(wǎng)，使其粒徑小于850μm，充分混合均勻，儲(chǔ)存于潔凈的樣品袋中密封保存，供檢測(cè)用。（3）前處理方法的選擇由于中藥材的基質(zhì)形式、成分復(fù)雜，其中黃曲霉毒素含量較低且受基質(zhì)效應(yīng)影響較大，無(wú)法直接進(jìn)行中藥材中黃曲霉毒素的檢測(cè)，必須先對(duì)試樣進(jìn)行前處理。本方法采用免疫磁珠法凈化和固相凈化柱法凈化，融合和兩者凈化優(yōu)勢(shì)，提高了凈化效率。試劑用量少、效率高、黃曲霉毒素?fù)p失少。因此，本文件對(duì)不同類(lèi)型的中藥材給出了免疫磁珠法凈化和固相凈化柱法兩種前處理方法。（4）線性范圍和檢出限按測(cè)試方法所述實(shí)驗(yàn)步驟，分析系列濃度梯度的黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用響應(yīng)強(qiáng)度對(duì)分析物的質(zhì)量濃度（μg/kg）進(jìn)行線性回歸，黃曲霉毒素均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。以10倍信噪比(S/N=10)確定方法定量限。結(jié)果表明，黃曲霉毒素濃度與響應(yīng)值有較好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)在0.9921～0.9938之間。AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2的檢出限為0.04μg/kg，AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2定量限為0.1μg/kg。本方法測(cè)定低限較低，可以很好地滿(mǎn)足日常測(cè)試工作的需求。（5）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)回收率與精密度分別準(zhǔn)確稱(chēng)取各類(lèi)陰性試樣，分別進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，利用本方法測(cè)定的回收率和精密度結(jié)果。結(jié)果表明，黃曲霉毒素在不同加標(biāo)水平下的加標(biāo)回收滿(mǎn)足要求。四、與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容與現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。五