高三生物二輪復(fù)習(xí)細(xì)胞工程與基因工程課件

專題(十三)細(xì)胞工程與基因工程

明考點(diǎn)·析考情

考點(diǎn)1.植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交技術(shù)。2.動(dòng)物細(xì)胞工程。3.胚胎工程的理論基礎(chǔ)及應(yīng)用。4.基因工程的基本工具、操作程序及應(yīng)用。5.DNA的粗提取與鑒定。6.DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定。7.蛋白質(zhì)工程。8.生物技術(shù)的安全性與倫理問(wèn)題。考情1.細(xì)胞工程、胚胎工程的命題多以選擇題呈現(xiàn)，基因工程的命題多以簡(jiǎn)答題呈現(xiàn)，屬于年年必考的題目。2.試題情境以下列幾種居多：(1)以單克隆抗體為情境考查細(xì)胞工程。(2)以胚胎移植為情境考查胚胎工程。(3)以來(lái)自大學(xué)教材或最新的文獻(xiàn)資料為情境考查基因工程。一、建網(wǎng)絡(luò)·抓主干胚胎工程現(xiàn)代生物科技專題①____________②____________胚胎發(fā)育的場(chǎng)所胚胎的移植期體內(nèi)受精早期胚胎發(fā)育卵母細(xì)胞的采集精子的獲取受精體外受精步驟③_______________________充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑葚胚或囊胚加快繁殖速度選材意義胚胎移植胚胎分割實(shí)質(zhì)優(yōu)勢(shì)輸卵管和子宮桑葚胚、囊胚早期胚胎的空間位置轉(zhuǎn)移植物細(xì)胞工程現(xiàn)代生物科技專題④______________________________原理技術(shù)應(yīng)用植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交植物繁殖的新途徑作物新品種的培育細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物體細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體的制備原理結(jié)果⑤_________獲得新細(xì)胞，不形成個(gè)體原理結(jié)果⑥___________________獲得克隆動(dòng)物個(gè)體原理手段細(xì)胞膜的流動(dòng)性PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法首要步驟所需細(xì)胞最后的篩選⑦_(dá)______________能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞⑧_________________________細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞核的全能性給小鼠注射抗原產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞基因工程現(xiàn)代生物科技專題⑨_________平末端可產(chǎn)生“分子手術(shù)刀”：限制酶“分子縫合針”：DNA連接酶⑩________________T4DNA連接酶常用基本工具主要有?____“分子運(yùn)輸車”：載體應(yīng)用蛋白質(zhì)工程黏性末端E.coliDNA連接酶質(zhì)?，F(xiàn)代生物科技專題基因工程基本操作程序目的基因的篩選與獲取常用的擴(kuò)增方法PCR基因表達(dá)載體的構(gòu)建步驟用限制酶分別切割載體和含有目的基因的DNA片段DNA連接酶連接形成重組DNA分子將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞常用方法植物細(xì)胞：?__________________________動(dòng)物細(xì)胞：?___________微生物細(xì)胞：Ca2+轉(zhuǎn)化法目的基因的檢測(cè)與鑒定包括分子水平：檢測(cè)DNA、mRNA、蛋白質(zhì)個(gè)體生物學(xué)水平花粉管通道法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法命題點(diǎn)2胚胎工程二、命題點(diǎn)分析(1)為獲得更多的囊胚，采用激素注射促進(jìn)雄鼠產(chǎn)生更多的精子(2020·江蘇，23)(

)×提示：為獲得更多的囊胚，應(yīng)采用激素注射促進(jìn)雌鼠產(chǎn)生更多的卵子。(2)胚胎移植時(shí)需使用免疫抑制劑以避免代孕牛對(duì)植入胚胎的排斥反應(yīng)(2018·江蘇，10)(

)×提示：受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，不需要注射免疫抑制劑。(3)利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆優(yōu)質(zhì)奶牛的過(guò)程中，重組細(xì)胞培養(yǎng)至原腸胚后移植(2021·遼寧，13)(

)×提示：胚胎移植的階段為桑葚胚或囊胚。(4)將黑色小鼠囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)部分細(xì)胞注射到白色小鼠囊胚腔中，接受注射的囊胚發(fā)育為黑白相間的小鼠(Mc)，獲得Mc的生物技術(shù)屬于核移植(2022·北京，11)(

)×(5)(2022·全國(guó)甲，38節(jié)選)為了實(shí)現(xiàn)體外受精需要采集良種公羊的精液，精液保存的方法是

。在體外受精前要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理，其原因是___________________________________________________________________；精子體外獲能可采用化學(xué)誘導(dǎo)法，誘導(dǎo)精子獲能的藥物是

。利用該公羊的精子進(jìn)行體外受精需要發(fā)育到一定時(shí)期的卵母細(xì)胞，因?yàn)槁涯讣?xì)胞達(dá)到

時(shí)才具備與精子受精的能力。冷凍保存

剛排出的精子必須在雌性生殖道內(nèi)發(fā)生相應(yīng)生理變化后才能獲得受精能力肝素或Ca2＋載體MⅡ期返回1.哺乳動(dòng)物的早期胚胎發(fā)育過(guò)程(1)受精過(guò)程中的兩個(gè)標(biāo)志：受精的標(biāo)志是觀察到兩個(gè)極體或雌、雄原核；受精完成的標(biāo)志是雌、雄原核融合完成。(2)桑葚胚是由受精卵分裂形成的，沒有分化；而囊胚雖然已進(jìn)行細(xì)胞分化，但囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)仍具有全能性。主干整合2.胚胎移植的操作流程(1)胚胎移植過(guò)程中的兩次檢查：第一次對(duì)收集的胚胎進(jìn)行檢查；第二次對(duì)受體母畜是否妊娠進(jìn)行檢查。(2)胚胎移植產(chǎn)生的后代是有性生殖還是無(wú)性生殖，取決于胚胎發(fā)育的起點(diǎn)。若后代是由受精卵形成的，則為有性生殖；若后代是由核移植技術(shù)形成的重組細(xì)胞或胚胎分割形成的胚胎發(fā)育而成，則為無(wú)性生殖。(3)用于移植的胚胎來(lái)源：體內(nèi)正常受精的胚胎、核移植的胚胎和體外受精獲得的胚胎、轉(zhuǎn)基因獲得的胚胎、胚胎分割獲得的胚胎等。2.(2023·南京高三聯(lián)考)下列有關(guān)胚胎工程的敘述，正確的是A.移入子宮的外來(lái)胚胎，在受體體內(nèi)會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)B.自然條件下，哺乳動(dòng)物的精子獲能發(fā)生在睪丸的曲細(xì)精管內(nèi)C.受精過(guò)程中，透明帶處會(huì)出現(xiàn)阻止多精入卵的生理反應(yīng)D.對(duì)桑葚胚進(jìn)行胚胎分割移植時(shí)，應(yīng)將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割12√受體子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，A錯(cuò)誤；自然條件下，哺乳動(dòng)物的精子獲能發(fā)生在雌性生殖道內(nèi)，B錯(cuò)誤；對(duì)囊胚進(jìn)行胚胎分割移植時(shí)，應(yīng)將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，D錯(cuò)誤。33.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)4.胚胎分割返回命題點(diǎn)3基因工程1.基因工程的理論基礎(chǔ)(1)不同生物的DNA分子能拼接起來(lái)的理論基礎(chǔ)①DNA的基本組成單位都是4種脫氧核苷酸。②DNA分子都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。③雙鏈DNA分子的空間結(jié)構(gòu)都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。(2)外源基因可以在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的理論基礎(chǔ)①基因是控制生物性狀的獨(dú)立遺傳單位。②遺傳信息的傳遞都遵循中心法則。③生物界共用一套遺傳密碼。主干整合2.基因工程的三種基本工具基因工程現(xiàn)代生物科技專題⑨_________平末端可產(chǎn)生“分子手術(shù)刀”：限制酶“分子縫合針”：DNA連接酶⑩________________T4DNA連接酶常用基本工具主要有?____“分子運(yùn)輸車”：載體應(yīng)用蛋白質(zhì)工程黏性末端E.coliDNA連接酶質(zhì)粒3.基因工程的基本操作程序(1)基因工程的四個(gè)主要操作步驟現(xiàn)代生物科技專題基因工程基本操作程序目的基因的篩選與獲取常用的擴(kuò)增方法PCR基因表達(dá)載體的構(gòu)建步驟用限制酶分別切割載體和含有目的基因的DNA片段DNA連接酶連接形成重組DNA分子將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞常用方法植物細(xì)胞：?__________________________動(dòng)物細(xì)胞：?___________微生物細(xì)胞：Ca2+轉(zhuǎn)化法目的基因的檢測(cè)與鑒定包括分子水平：檢測(cè)DNA、mRNA、蛋白質(zhì)個(gè)體生物學(xué)水平花粉管通道法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法(2)基因工程操作程序中的注意點(diǎn)①目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的，基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入在啟動(dòng)子與終止子之間。當(dāng)需要目的基因在特定細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，需要利用特定的啟動(dòng)子，如目的基因要在乳腺細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，啟動(dòng)子要換成乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子。②基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子位于目的基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，終止子位于目的基因的尾端，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止，而起始密碼子和終止密碼子在mRNA上。③植物細(xì)胞的全能性較高，可經(jīng)植物組織培養(yǎng)過(guò)程成為完整植物體，因此植物基因工程的受體細(xì)胞可以是受精卵也可以是體細(xì)胞；高度分化的動(dòng)物細(xì)胞的全能性受到限制，動(dòng)物基因工程中的受體細(xì)胞一般是受精卵。要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素等則需要用真核生物，如酵母菌(需要內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌)等。P1251P1242、(3)題組一基因工程1.如圖1中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性內(nèi)切核酸酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖2為某種基因表達(dá)載體的示意圖(載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點(diǎn)是唯一的)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：12題組集訓(xùn)345(1)經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被_________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是________________________________________。12345Sau3AⅠ兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的黏性末端是GATC－，與Sau3AⅠ酶切后獲得的黏性末端相同，所以經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與被Sau3AⅠ酶切后的產(chǎn)物連接。(2)圖2中啟動(dòng)子的作用是_____________________________，終止子的作用是________________，抗生素抗性基因的作用是________________________。12345RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位使轉(zhuǎn)錄過(guò)程停止啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，與RNA聚合酶結(jié)合后，開始進(jìn)行轉(zhuǎn)錄過(guò)程；終止子使轉(zhuǎn)錄過(guò)程停止；抗生素抗性基因表達(dá)后，生物具有抗生素抗性，便于重組DNA分子的篩選。便于重組DNA分子的篩選(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，還需要用到DNA連接酶。常見的DNA連接酶有_______DNA連接酶和_____DNA連接酶，其中能連接平末端的是______DNA連接酶。12345E.coliT4T4(4)若某人利用圖2所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組DNA分子(如圖3所示)。這三種重組DNA分子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有________，原因是_____________________________________________________________________________________________。12345

甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄甲和丙在基因表達(dá)載體中，目的基因應(yīng)位于啟動(dòng)子和終止子之間才能表達(dá)。甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄。2.(2023·廣東，20)種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對(duì)野生型擬南芥(2n＝10)進(jìn)行誘變篩選到一株種子增大的突變體。通過(guò)遺傳分析和測(cè)序，發(fā)現(xiàn)野生型DAI基因發(fā)生一個(gè)堿基G到A的替換，突變后的基因?yàn)殡[性基因，據(jù)此推測(cè)突變體的表型與其有關(guān)，開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。回答下列問(wèn)題：(1)擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變?cè)斐?，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應(yīng)與________植株的種子大小相近。野生型根據(jù)題干信息可知，突變后的基因?yàn)殡[性基因，則野生型DAI基因?yàn)轱@性基因，因此采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變?cè)斐?，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應(yīng)與野生型植株的種子大小相近。(2)用PCR反應(yīng)擴(kuò)增DAI基因，用限制性內(nèi)切核酸酶對(duì)PCR產(chǎn)物和________進(jìn)行切割，用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá)，其上下游序列需具備________________。載體啟動(dòng)子和終止子利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DAI基因后，應(yīng)該用同種限制性內(nèi)切核酸酶對(duì)DAI基因和載體進(jìn)行切割，再用DNA連接酶將兩者連接起來(lái)；在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子位于目的基因的上游，終止子位于目的基因的下游，因此為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá)，其上下游序列需具備啟動(dòng)子和終止子。(3)轉(zhuǎn)化后，T－DNA(其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時(shí)不發(fā)生交換)可在基因組單一位點(diǎn)插入，也可以同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn)。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單一位點(diǎn)插入的植株，并進(jìn)一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株(如圖)，用于后續(xù)驗(yàn)證突變基因與表型的關(guān)系。①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T0代植株并自交，將T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基上，能夠萌發(fā)并生長(zhǎng)的陽(yáng)性個(gè)體即表示其基因組中插入了____________________________。DAI基因和卡那霉素抗性基因根據(jù)題干信息和圖示分析，將T0代植株的花序浸沒在農(nóng)桿菌(T－DNA上含有DAI基因和卡那霉素抗性基因)菌液中轉(zhuǎn)化，再將獲得的T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基(含有卡那霉素)上，若在選擇培養(yǎng)基上有能夠萌發(fā)并生長(zhǎng)的陽(yáng)性個(gè)體，則說(shuō)明含有卡那霉素抗性基因，即表示其基因組中插入了DAI基因和卡那霉素抗性基因。②T1代陽(yáng)性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽(yáng)性率約____%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。75T1代陽(yáng)性植株都含有DAI基因，由于T－DNA(其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時(shí)不發(fā)生交換)可在基因組單一位點(diǎn)插入，也可以同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn)，所以不確定是單一位點(diǎn)插入還是多位點(diǎn)插入，若是單一位點(diǎn)插入，相當(dāng)于一對(duì)等位基因的雜合子，其自交后代應(yīng)該出現(xiàn)3∶1的性狀分離比，而題干要求選出單一位點(diǎn)插入的植株，因此應(yīng)該選擇陽(yáng)性率約75%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。③將②中選出的T2代陽(yáng)性植株________(填“自交”“與野生型雜交”或“與突變體雜交”)所得的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽(yáng)性率達(dá)到________%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。為便于在后續(xù)研究中檢測(cè)該突變，研究者利用PCR擴(kuò)增野生型和突變型基因片段，再使用限制性內(nèi)切核酸酶X切割產(chǎn)物，通過(guò)核酸電泳即可進(jìn)行突變檢測(cè)，相關(guān)信息如圖，在電泳圖中將酶切結(jié)果對(duì)應(yīng)位置的條帶涂黑。自交100答案將以上獲得的T2代陽(yáng)性植株自交，再將得到的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基上，若某培養(yǎng)基上全部為具有卡那霉素抗性的植株即為需要選擇的植株，即陽(yáng)性率達(dá)到100%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。根據(jù)圖示分析，野生型和突變型基因片段的長(zhǎng)度都是150bp，野生型基因沒有限制酶X的切割位點(diǎn)，而突變型的基因有限制酶X的切割位點(diǎn)，結(jié)合圖中的數(shù)據(jù)分析可知，電泳圖中，野生型只有150bp，突變型有50bp和100bp。4.蛋白質(zhì)工程5.PCR技術(shù)原理與條件6.PCR技術(shù)的過(guò)程變性：加熱超過(guò)90℃，DNA解鏈

↓復(fù)性：冷卻至50℃左右，引物與互補(bǔ)DNA鏈結(jié)合

↓延伸：加熱到72℃左右，在耐高溫的DNA聚合酶的作用下合成子鏈(1)PCR技術(shù)中，不需要解旋酶，需要耐高溫的DNA聚合酶。(2)關(guān)于引物：依據(jù)目的基因兩端的部分核苷酸序列設(shè)計(jì)。兩種引物之間以及每種引物內(nèi)部不能發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)。有時(shí)候引物5′端需要含有某種限制酶的識(shí)別序列。P1242、(2)2.(2023·廣東，20)種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對(duì)野生型擬南芥(2n＝10)進(jìn)行誘變篩選到一株種子增大的突變體。通過(guò)遺傳分析和測(cè)序，發(fā)現(xiàn)野生型DAI基因發(fā)生一個(gè)堿基G到A的替換，突變后的基因?yàn)殡[性基因，據(jù)此推測(cè)突變體的表型與其有關(guān)，開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。回答下列問(wèn)題：(1)擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變?cè)斐?，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應(yīng)與________植株的種子大小相近。野生型根據(jù)題干信息可知，突變后的基因?yàn)殡[性基因，則野生型DAI基因?yàn)轱@性基因，因此采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變?cè)斐?，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應(yīng)與野生型植株的種子大小相近。(2)用PCR反應(yīng)擴(kuò)增DAI基因，用限制性內(nèi)切核酸酶對(duì)PCR產(chǎn)物和________進(jìn)行切割，用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá)，其上下游序列需具備________________。載體啟動(dòng)子和終止子利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DAI基因后，應(yīng)該用同種限制性內(nèi)切核酸酶對(duì)DAI基因和載體進(jìn)行切割，再用DNA連接酶將兩者連接起來(lái)；在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子位于目的基因的上游，終止子位于目的基因的下游，因此為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá)，其上下游序列需具備啟動(dòng)子和終止子。(3)轉(zhuǎn)化后，T－DNA(其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時(shí)不發(fā)生交換)可在基因組單一位點(diǎn)插入，也可以同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn)。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單一位點(diǎn)插入的植株，并進(jìn)一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株(如圖)，用于后續(xù)驗(yàn)證突變基因與表型的關(guān)系。①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T0代植株并自交，將T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基上，能夠萌發(fā)并生長(zhǎng)的陽(yáng)性個(gè)體即表示其基因組中插入了____________________________。DAI基因和卡那霉素抗性基因根據(jù)題干信息和圖示分析，將T0代植株的花序浸沒在農(nóng)桿菌(T－DNA上含有DAI基因和卡那霉素抗性基因)菌液中轉(zhuǎn)化，再將獲得的T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基(含有卡那霉素)上，若在選擇培養(yǎng)基上有能夠萌發(fā)并生長(zhǎng)的陽(yáng)性個(gè)體，則說(shuō)明含有卡那霉素抗性基因，即表示其基因組中插入了DAI基因和卡那霉素抗性基因。②T1代陽(yáng)性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽(yáng)性率約____%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。75T1代陽(yáng)性植株都含有DAI基因，由于T－DNA(其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時(shí)不發(fā)生交換)可在基因組單一位點(diǎn)插入，也可以同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn)，所以不確定是單一位點(diǎn)插入還是多位點(diǎn)插入，若是單一位點(diǎn)插入，相當(dāng)于一對(duì)等位基因的雜合子，其自交后代應(yīng)該出現(xiàn)3∶1的性狀分離比，而題干要求選出單一位點(diǎn)插入的植株，因此應(yīng)該選擇陽(yáng)性率約75%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。③將②中選出的T2代陽(yáng)性植株________(填“自交”“與野生型雜交”或“與突變體雜交”)所得的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽(yáng)性率達(dá)到________%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。為便于在后續(xù)研究中檢測(cè)該突變，研究者利用PCR擴(kuò)增野生型和突變型基因片段，再使用限制性內(nèi)切核酸酶X切割產(chǎn)物，通過(guò)核酸電泳即可進(jìn)行突變檢測(cè)，相關(guān)信息如圖，在電泳圖中將酶切結(jié)果對(duì)應(yīng)位置的條帶涂黑。自交100答案將以上獲得的T2代陽(yáng)性植株自交，再將得到的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基上，若某培養(yǎng)基上全部為具有卡那霉素抗性的植株即為需要選擇的植株，即陽(yáng)性率達(dá)到100%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。根據(jù)圖示分析，野生型和突變型基因片段的長(zhǎng)度都是150bp，野生型基因沒有限制酶X的切割位點(diǎn)，而突變型的基因有限制酶X的切割位點(diǎn)，結(jié)合圖中的數(shù)據(jù)分析可知，電泳圖中，野生型只有150bp，突變型有50bp和100bp。7.DNA的粗提取與鑒定P124判斷（3）、(4)(1)PCR技術(shù)中，提高復(fù)性的溫度能有效減少反應(yīng)非特異條帶的產(chǎn)生(2021·湖北，16)(

)(2)利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)在N0的α和β亞基之間加入一段連接肽，可獲得熱穩(wěn)定的融合型腈水合酶(N1)，加入連接肽需要通過(guò)改造基因?qū)崿F(xiàn)(2021·遼寧，14)(

)(3)用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近(2019·江蘇，10)(

)√√提示：兔血液中的成熟紅細(xì)胞沒有DNA，因此等體積的兔血提取的DNA量小于雞血?！?4)粗提取DNA時(shí)，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌，向過(guò)濾后所得濾液中加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精后再進(jìn)行過(guò)濾，在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對(duì)含量較高的白色絲狀物(2021·山東，13)(

)×提示：向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌，過(guò)濾后在得到的濾液中加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精，此時(shí)DNA析出，不會(huì)進(jìn)入濾液中。8.DNA片段的電泳鑒定返回專題

十三5、75.亞洲棉的突變型光籽和野生型毛籽是一對(duì)相對(duì)性狀。研究發(fā)現(xiàn)，亞洲棉某突變體的光籽表型與8號(hào)染色體的～880kb至～903kb區(qū)間相關(guān)，研究人員根據(jù)野生型毛籽棉的該區(qū)間設(shè)計(jì)連續(xù)的重疊引物進(jìn)行PCR，產(chǎn)物擴(kuò)增結(jié)果如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是A.應(yīng)提取該突變體和野生型亞洲棉的全

部染色體DNA進(jìn)行PCRB.圖中PCR產(chǎn)物的鑒定是通過(guò)瓊脂糖凝

膠電泳來(lái)進(jìn)行的C.據(jù)圖分析可知，分子量較大的擴(kuò)增產(chǎn)物與點(diǎn)樣處的距離較小D.該突變體出現(xiàn)的根本原因是第6對(duì)引物對(duì)應(yīng)區(qū)間發(fā)生了基因突變12345678910√由于8號(hào)染色體的～880kb至～903kb區(qū)間與突變體的光籽表型相關(guān)，故應(yīng)提取突變體和野生型的8號(hào)染色體上的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，A錯(cuò)誤；圖中PCR產(chǎn)物的鑒定是通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)進(jìn)行的，主要依據(jù)分子量不同，采用外加電場(chǎng)使其分開，B正確；由圖可知，分子量較大的擴(kuò)增產(chǎn)物遷移速率慢，與點(diǎn)樣處的距離較小，C正確；根據(jù)野生型和突變體經(jīng)引物6擴(kuò)增的產(chǎn)物不同可知，8號(hào)染色體上的第6對(duì)引物對(duì)應(yīng)的區(qū)間發(fā)生基因突變是光籽性狀出現(xiàn)的根本原因，D正確。7.(2023·賀州高三模擬)如圖1表示限制酶SpeⅠ、XbaⅠ的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，圖2表示基因P(960bp)、基因Q(840bp)的限制酶SpeⅠ、XbaⅠ的酶切圖譜和融合基因，圖3表示幾種基因經(jīng)限制酶SpeⅠ或XbaⅠ處理后進(jìn)行電泳(電泳條帶表示特定長(zhǎng)度的DNA片段)得到的帶譜圖，下列相關(guān)分析不正確的是A.基因P經(jīng)限制酶SpeⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅰ相同B.基因Q經(jīng)限制酶XbaⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅱ相同C.融合基因經(jīng)限制酶SpeⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅲ相同D.融合基因經(jīng)限制酶XbaⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅳ相同12345678910√根據(jù)圖2可知，基因P上有限制酶SpeⅠ的一個(gè)酶切位點(diǎn)，基因P的總長(zhǎng)度為960bp，所以經(jīng)酶切后可以得到兩個(gè)小于960bp的片段，符合圖3中的Ⅰ，A正確；12345678910根據(jù)圖2可知，基因Q上有限制酶XbaⅠ的一個(gè)酶切位點(diǎn)，基因Q的總長(zhǎng)度為