天然藥物化學成分提取分離方法專家講座

1化學成份提取分離方法天然藥品化學研究常從有效成份或生理活性成份提取、分離工作開始。在進行提取之前，應了解所用材料基源（如動、植物學名）、產(chǎn)地、藥用部位、采集時間與方法等。目標物為已知成份或已知化學結(jié)構類型，如從甘草中提取甘草酸、麻黃中提取麻黃堿，或從植物中提取某類成份如總生物堿或總酸性成份時，工作比較簡單。普通宜先查閱相關資料，搜集比較該種或該類成份各種提取方案，尤其是工業(yè)生產(chǎn)方法，在依據(jù)詳細條件加以選取。從中草藥或天然藥品中尋找未知有效成份或有效部位時，情況就比較復雜。只能依據(jù)預先確定目標，在適當活性測試體系指導下，進行提取、分離并以對應動物模型篩選、臨床驗證、重復實踐，才能到達目標。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第1頁2一、有效成份提?、迦軇┨崛》á嫠魵庹麴s法㈢升華法天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第2頁3㈠溶劑提取法溶劑提取法系選擇適當溶劑將中草藥中化學成份從藥材中提取出來。天然藥品中化學成份在溶劑中溶解度直接與溶劑性質(zhì)相關。溶劑可分為水、親水性有機溶劑和親脂性有機溶劑。一些常見溶劑脂性強弱次序以下：石油醚>苯>氯仿>乙醚>乙酸乙酯>丙酮>乙醇>甲醇>水天然藥品化學成份可經(jīng)過結(jié)構預計它們極性。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第3頁4㈠溶劑提取法甙類分子中結(jié)合有糖分子，羥基數(shù)目多，能表現(xiàn)強親水性，而甙元則屬于親脂性化合物，而生物堿鹽，能夠離子化，加大了極性，就變成了親水性化合物。鞣質(zhì)是多羥基衍生物，列為親水性化合物。油脂、揮發(fā)油、蠟、脂溶性色素都是強親脂性成份。萜類、甾體等脂環(huán)類及芳香類化合物因為極性較小，易溶于氯仿、乙醚等親脂性溶劑中；糖苷、氨基酸等成份極性較大，易溶于水及含水醇中；酸性、堿性及兩性化合物，因為存在狀態(tài)（分子或離子形式）隨溶液而異，故溶解度將隨pH而改變。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第4頁5㈠溶劑提取法只要中草藥成份親水性和親脂性與溶劑此項性質(zhì)相當，就會在其中有較大溶解度，即所謂“相同相溶”規(guī)律。這是選擇適當溶劑自中草藥中提取所需要成份依據(jù)之一。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第5頁6㈡水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法只適合用于含有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞，與水不發(fā)生反應，且難溶或不溶于水成份提取。天然藥品中揮發(fā)油、一些小分子生物堿如麻黃堿、煙堿、檳榔堿以及一些小分子酚性物質(zhì)如牡丹酚等提取可采取水蒸氣蒸餾法。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第6頁7㈢升華法一些固體物質(zhì)如水楊酸、苯甲酸、樟腦等受熱在低于其熔點溫度下，不經(jīng)過熔化就可直接轉(zhuǎn)化為蒸氣，蒸氣遇冷后又凝結(jié)成固體稱為升華。天然藥品中有一些成份含有升華性質(zhì)，能利用升華法直接中藥材中提取出來。但天然藥品成份普通可升華極少。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第7頁8二、有效成份分離與精制天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第8頁9化學成份分離精制慣用方法原理㈠依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進行分離

㈡依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進行分離㈢依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進行分離㈣依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第9頁10㈠依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進行分離

1、利用溫度不一樣引發(fā)溶解度改變2、改變混合溶劑極性3、調(diào)整溶液pH值，改變分子存在狀態(tài)4、沉淀法

5、鹽析法

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第10頁111、利用溫度不一樣引發(fā)溶解度改變判定中草藥化學成份，研究其化學結(jié)構，必須首先將中草藥成份制備成單體純品。中草藥化學成份在常溫下多半是固體物質(zhì)，常含有結(jié)晶性通性，能夠依據(jù)溶解度不一樣用結(jié)晶法來到達分離精制目標。中草藥化學成份，一旦取得結(jié)晶，就能有效地深入精制成為單體純品。純化合物結(jié)晶有一定熔點和結(jié)晶學特征，有利于判定。所以，求得結(jié)晶并制備成單體純品，就成為判定中草藥成份、研究其分子結(jié)構主要一步。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第11頁121、利用溫度不一樣引發(fā)溶解度改變結(jié)晶法是選取適當溶劑，將混合物加熱溶解，形成有效成份飽和溶液，趁熱過濾除去不溶雜質(zhì)，濾液低溫放置或蒸去部分溶劑后再低溫放置，使有效成份大部分析出結(jié)晶，因為初析出結(jié)晶總會帶一些雜質(zhì)，所以需要經(jīng)過重復結(jié)晶即所謂重結(jié)晶方法，才能得到高純度晶體。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第12頁13⑴雜質(zhì)除去結(jié)晶法所用樣品必須是已經(jīng)用其它方法提得比較純時候才能采取此法精制。結(jié)晶乃同類分子自相排列，假如雜質(zhì)過多，則妨礙分子排列。假如粗提取部分純度很差則極難得到結(jié)晶。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第13頁14⑴雜質(zhì)除去①用溶劑溶出雜質(zhì)，或只溶出所需要成份。②用少許活性炭等進行脫色處理，以除去有色雜質(zhì)。③經(jīng)過氧化鋁、硅膠柱色譜處理（注意所需要成份也可能被吸附而損失）。④制備其晶態(tài)衍生物（如游離生物堿可制備各種生物堿鹽類，羥基化合物可轉(zhuǎn)變成乙?；?，碳基化合物可制備成苯腙衍生物結(jié)晶）。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第14頁15⑵溶劑選擇適宜溶劑是在冷時對所需要成份溶解度較小，而熱時溶解度較大。溶劑沸點亦不宜太高。普通慣用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙酯等。有些化合物在普通溶劑中不易形成結(jié)晶，而在一些溶劑中則易于形成結(jié)晶。比如葛根素、逆沒食子酸（ellagicacid）在冰醋酸中易形成結(jié)晶，大黃素）在吡啶中易于結(jié)晶，萱草毒素在DMF中易得到結(jié)晶，而穿心蓮亞硫酸氫鈉加成物在丙酮一水中較易得到結(jié)晶。又如蝙蝠葛堿通常為無定形粉未，但能和氯仿或乙醚形成為加成物結(jié)晶。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第15頁16⑶結(jié)晶溶液制備制備結(jié)晶溶液為過飽和溶液。普通是應用適量溶劑在加溫情況下，將化合物溶解再放置冷處。假如在室溫中能夠析出結(jié)晶，就不一定放置于冰箱中，以免伴隨結(jié)晶析出更多雜質(zhì)。無定形粉未狀物質(zhì)，遠較晶體物質(zhì)溶解度大，易于形成過飽和溶液。普通經(jīng)過精制化合物，在蒸去溶劑抽松為無定形粉未，加入少許溶劑，往往馬上能夠溶解，稍稍放置即能析出結(jié)晶。比如長春花總?cè)鯄A部分抽松后加入1.5倍量甲醇溶解，放置后很快析出長春堿結(jié)晶。又如蝙蝠葛堿在乙醚中極難溶解，但當其鹽水溶液用氨液堿化，并馬上用乙醚萃取，所得乙醚溶液，放置后即可析出蝙蝠葛堿乙醚加成物結(jié)晶。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第16頁17⑶

結(jié)晶溶液制備制備結(jié)晶溶液，除用單一溶劑外，也常采取混合溶劑。普通是先將化合物溶于易溶溶劑中，再在室溫下滴加適量難溶溶劑，直至溶液微呈渾濁，并將此溶液微微加溫，使溶液完全澄清后放置。β一細辛醚重結(jié)晶時，可先溶于乙醇，再滴加適量水，即可析出很好結(jié)晶?；⒄戎刑崛∷苄曰⒄冗皶r，在已精制飽和水溶液上添加一層乙醚放置，現(xiàn)有利于溶出其共存脂溶性雜質(zhì)，又可降低水極性，促使虎杖甙結(jié)晶化。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第17頁18(4)結(jié)晶純度判定結(jié)晶純度可由化合物晶形、色澤、熔點和熔距、薄層色譜或紙色譜等作初步判定。一個單體純化合物普通都有一定熔點和較小熔距，同時在薄層色譜或紙色譜中經(jīng)數(shù)種不一樣展開劑系統(tǒng)檢定，也為一個斑點者，普通能夠認為是一個單體化合物。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第18頁19⑹結(jié)晶純度判定注意，有化合物在普通層析條件下，即使只展現(xiàn)一個斑點，但并不一定是單體成份。比如鹿含草中主成份為高熊果甙、異高熊果甙極難用普通方法分離，經(jīng)重復結(jié)晶后，在紙層及聚酞胺薄層上都只有一個斑點，易誤認為單一成份，但測其熔點在115～125℃，熔距很長。經(jīng)制備其甲醚后，再經(jīng)紙層層析檢定，能夠出現(xiàn)兩個斑點，異高熊果甙比移值大于高熊果甙。HPLC是近年來能夠用作判斷有效成份純度一個主要伎倆。另外，GC、UV光譜等，都有利于檢識結(jié)晶樣品純度。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第19頁20單晶結(jié)構測定單晶X射線衍射單晶X射線分析是提供晶態(tài)下分子三維結(jié)構，確定分子立體結(jié)構（構型、構象等）最有效方法。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第20頁212、改變混合溶劑極性在溶液中加入另一個溶劑以改變混合溶劑極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出，從而實現(xiàn)分離。在藥材濃縮水提取液中加入數(shù)倍量高濃度乙醇，以沉淀除去多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)（水/醇法）；在濃縮乙醇提取液中加入數(shù)倍兩量水稀釋，放置以沉淀除去樹脂、葉綠素等水不溶性雜質(zhì)（醇/水法）；在乙醇濃縮液中加數(shù)倍兩乙醚（醇/醚法）或丙酮（醇/丙酮法），可使皂苷沉淀析出，而脂溶性樹脂等類雜質(zhì)則留在母液中。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第21頁223、加酸堿調(diào)整溶液pH值對酸性、堿性或兩性有機化合物來說，?？山?jīng)過加入酸、堿以調(diào)整溶液pH值，改變分子存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變?nèi)芙舛榷鴮崿F(xiàn)分離。內(nèi)酯類化合物不溶于水，但遇堿開環(huán)生成羧酸鹽溶于水，再加酸酸化，又重新形成內(nèi)酯環(huán)從溶液中析出，從而與其它雜質(zhì)分離（堿/酸法）；生物堿普通不溶于水，遇酸生成生物堿鹽而溶于水，再加堿堿化，又重新生成游離生物堿（酸/堿法）。這些化合物能夠利用與水不相混溶有機溶劑進行萃取分離。能夠分為強酸性、弱酸性和酚性三種，它們分別溶于碳酸氫鈉、碳酸鈉和氫氧化鈉，借此可進行分離。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第22頁234、沉淀法在中草藥提取液中加入一些試劑使產(chǎn)生沉淀，以取得有效成份或除去雜質(zhì)方法。⑴鉛鹽沉淀法⑵試劑沉淀法天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第23頁24⑴鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離一些中草藥成份經(jīng)典方法之一。醋酸鉛及堿式醋酸鉛，能與各種化學成份生成難溶鉛鹽或絡鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成份與雜質(zhì)分離。中性醋酸鉛可與酸性物質(zhì)或一些酚性物質(zhì)結(jié)合成不溶性鉛鹽。所以，慣用以沉淀有機酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、酸性皂甙、部分黃酮等。與堿式醋酸鉛產(chǎn)生不溶性鉛鹽或絡合物范圍更廣。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第24頁25⑵試劑沉淀法在生物堿鹽溶液中，加入一些生物堿沉淀試劑（見生物堿性質(zhì)下），則生物堿生成不溶性復鹽而析出。水溶性生物堿難以用萃取法提取分出，常加入雷氏銨鹽使生成生物堿雷氏鹽沉淀析出用明膠、蛋白溶液沉淀鞣質(zhì)；膽甾醇也慣用以沉淀洋地黃皂甙等。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第25頁265、鹽析法鹽析法是在中草藥水提液中、加入無機鹽至一定濃度，或到達飽和狀態(tài)，可使一些成份在水中溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大雜質(zhì)分離。鹽析用無機鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。三七水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七皂甙乙即可沉淀析出，自黃藤中提取掌葉防己堿，自三顆針中提取小檗堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸銨鹽析制備。有些成份如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大，在提取時，亦往往先在水提取液中加入一定量食鹽，再用有機溶劑萃取。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第26頁27㈡依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進行分離分配系數(shù)（K）兩種相互不能任意混溶溶劑（如氯仿與水）如置分液漏斗中充分振搖，放置后即可分成兩相。此時假如其中含有溶質(zhì)，則溶質(zhì)在兩相溶劑中分配比（K）在一定溫度及壓力下為一常數(shù)，能夠下式表示：K=CU/CLK：分配系數(shù)；CU：溶質(zhì)在上相溶劑中濃度；CL：溶質(zhì)在下相溶劑中濃度。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第27頁28㈡依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進行分離1、液-液萃取法2、逆流連續(xù)萃取法3、逆流分配法（CounterCurrentDistribution，CCD）

4、液滴逆流色譜法（DCCC）5、高速逆流色譜法（HSCCC）6、氣液分配色譜（GC或GLC）7、液-液分配色譜（LC或LLC）天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第28頁291、液-液萃取法利用混合物中各成份在兩種互不相溶溶劑中分配系數(shù)不一樣而到達分離方法。萃取時假如各成份分配系數(shù)相差越大，分離效率越高。水提取液中有效成份是親脂性物質(zhì)，普通多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃??；有效成份是偏于親水性物質(zhì)，需用弱親脂性溶劑，比如乙酸乙酯、丁醇等。提取黃酮類成份多用乙酸乙脂和水兩相萃取。提取親水性強皂甙則多項選擇取正丁醇、異戊醇和水作兩相萃取。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第29頁30液-液萃取法操作注意事項⑴先用小試管猛烈振搖約1分鐘，觀察萃取后二液層分層現(xiàn)象。假如輕易產(chǎn)生乳化，大量提取時要防止猛烈振搖，可延長萃取時間。如碰到乳化現(xiàn)象，可將乳化層分出，再用新溶劑萃??；或?qū)⑷榛瘜映闉V，或?qū)⑷榛瘜由陨约訜幔换蜉^長時間放置并不時旋轉(zhuǎn)，令其自然分層。乳化現(xiàn)象較嚴重時，能夠采取二相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置。⑵水提取液濃度最好在比重1.1～1.2之間，過稀則溶劑用量太大，影響操作。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第30頁312、高速逆流色譜

(High-speedCountercurrentChromatography，HSCCC)大多數(shù)色譜法都需要有固相載體某種形式選擇性吸附作用。在應用固相載體色譜分離中，往往會存在不一樣程度不可逆吸附，造成被分離樣品損失，尤其在分離微量樣品時受到限制。高速逆流色譜，是近十年快速發(fā)展起來新型液—液分配色譜技術。與其它液相色譜分離方法相比．它不使用固相載體作固定相，被分離物質(zhì)在互不相溶兩相分配分離，克服了固相載體帶來樣品吸附、損失、污染、峰形拖尾等缺點。且花費溶劑少，分辨率高，可進行純品制備。利用HSCCC，中草藥粗提物分離純化制備可同時完成，被分離物可定量回收。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第31頁32⑴HSCCC工作原理兩種互不相溶溶劑在聚四氟乙烯管內(nèi)作高速行星運轉(zhuǎn)，其中一相溶劑作固定相，用恒流泵輸送載有樣品另一相溶劑穿過固定相，兩相溶劑在螺旋管中實現(xiàn)高效接觸、混合、分配和傳遞。因為樣品中各組分在兩相中分配能力不一樣，造成在聚四氟乙烯管中移動速度也不一樣，從而使樣品中各組分得到分離。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第32頁33⑵HSCCC特點1、應用范圍廣，適應性好

因為溶劑系統(tǒng)組成與配比能夠是無限多，因而HSCCC適合用于任何極性范圍品分離，尤其適合用于分離極性大組分以及一些生物大分子。2、操作簡便，輕易掌握

對樣品預處理要求低，普通粗提物即可進行HSCCC制備分離或分析。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第33頁34⑵HSCCC特點3、回收率高固定相為液體，無需固體作載體，克服氣、液相色譜使用固相載體帶來樣品吸附、損失、污染、峰形拖尾等缺點。4、重現(xiàn)性好分離過程穩(wěn)定、峰保留相對標準偏差小于2％，天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第34頁35⑵HSCCC特點5、分離效率高，分離量較大

與普通色譜分離方式不一樣，能實現(xiàn)梯度操作和反相操作、亦能進行重復進樣，尤其適合用于制備性分離，產(chǎn)品純度高，制備量大，溶劑消耗少。較大制備型HSCCC，柱容積可達530ml，一次最多進樣可達20g粗品；較小分析型HSCCC柱容積為8mL，進樣量為幾十微克，最大轉(zhuǎn)速可達4000r／min.所以，被廣泛地應用于植物化學成份分離制備研究。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第35頁36⑵HSCCC特點依據(jù)以上特點，HSCCC適合于中藥成份分離和分析。當前高速逆流色譜儀已成功地開發(fā)出分析型和制備型兩大系列。制備或半制備HSCCC特點是高流速、高濃度，不但適合用于非極性化合物分離，也適合用于極性化合物分離。在制備分離方面，可用于中藥粗提物中各組分分離，也可深入精制，甚至直接從從粗提物—步純化到純品，來制備中藥化學成份標準品。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第36頁37⑵HSCCC應用HSCCC分離效率與氣相色譜和高效液相色譜等技術相比較，前者不宜用它完成組成復雜混合物全譜分離分析。而其對于樣品預處理條件較放松及回收率高，制備量大，尤其適合用于特定部位和特定組分分離純化與制備。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第37頁38⑶HSCCC應用制備中藥化學對照品

中草藥化學對照品應含有高度均勻性，量值準確性和良好穩(wěn)定性，其純度要求很高。制備型HPLC曾是國外慣用主要伎倆。不過其設備和載體填料價格很高．對樣品前期處理要求嚴格，存在不可逆吸附，溶劑用量大缺點。所以致力于HSCCC分離、統(tǒng)化、制備中草藥有效成份對照品研究和產(chǎn)業(yè)化，含有現(xiàn)實意義。從銀杏葉中制備異鼠李素、山奈酚、槲皮索、白果內(nèi)酯和橙皮甙；從大黃制備大黃羥基蒽醌甙元；從洋地黃葉中制備洋地黃毒甙；從虎杖中分離提純白藜蘆醇和白藜蘆醇甙等。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第38頁393、高效液相色譜(HPLC)HPLC是在經(jīng)典液相色譜基礎上引入氣相色譜塔板理論，并采取了高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，含有分析速度快、分離效率高和操作自動化特點一個色譜技術。HPLC尤其適合高沸點、大分子和熱穩(wěn)定性差化合物分離分析。中藥成份非常復雜，以往慣用薄層色譜等方法因其精密度、準確度、靈敏度、重現(xiàn)性差而不能滿足中藥當代化發(fā)展需要。高效液相色譜正是以其穩(wěn)定、可靠、高效特點成為中藥研究最主要分析方法。慣用于中藥質(zhì)量控制、天然藥品化學成份分離及分析測定等。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第39頁403、高效液相色譜(HPLC)檢測器是液相色譜三大關鍵部件（高壓輸液泵、高效色譜柱和檢測器）之一。其發(fā)展在某種意義上決定著HPLC技術進步。理想檢測器應含有以下特點：⑴靈敏度高；⑵對溫度改變和流量波動不敏感；⑶死體積小，不使峰額外地擴展；⑷對溶劑無響應，能用于梯度洗脫操作⑸線性范圍寬；⑹對全部樣品都有響應；⑺對樣品無破壞性。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第40頁413、高效液相色譜(HPLC)檢測器種類繁多，至今還沒有一個檢測器能夠同時滿足以上幾點要求。有紫外—可見分光檢測器、熒光檢測器、示差折光檢測器、電化學檢測器、二極管陣列檢測器、測定大分子絕對分子量多角度激光光散射儀。另外還有蒸發(fā)光檢測器、化學發(fā)光檢測器、手性檢測器(旋光檢測器、圓二色檢測器)、分子量檢測器、放射性檢測器、熱學性質(zhì)檢測器、光電導檢測器、磁旋光檢測器等。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第41頁42慣用HPLC檢測器⑴紫外-可見分光檢測器⑵示差折光檢測器⑶二極管陣列檢測器⑷蒸發(fā)光檢測器天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第42頁43⑴紫外檢測器（UVD）優(yōu)點

UVD結(jié)構簡單，使用方便，售價廉價、高靈敏度和穩(wěn)定性。不足

UVD檢測物質(zhì)必須含有吸收紫外光生色團，而對應流動相在檢測波長下則應該是無紫外吸收。這一特征大大限制了其能檢測物質(zhì)范圍和一些良好溶劑使用。許多成份沒有紫外吸收或為紫外末端吸收，有時可用低波長紫外檢測器，但梯度洗脫時出現(xiàn)基線漂移，溶劑峰干擾，溶劑選擇受其截止波長限制。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第43頁44㈡示差折光檢測器(RID)RID是一個通用檢測器，它基于色譜柱流出物光折射率改變來連續(xù)測定樣品濃度。特點

穩(wěn)定、易于操作，樣品不被破壞和含有很好靈敏度。缺點

對工作環(huán)境要求很苛刻，要求恒溫、恒流速，且無法采取梯度洗脫．其檢測靈敏度也不夠高。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第44頁45⑶光電二極管陣列檢測器(DAD)原理

光源經(jīng)光學反射鏡經(jīng)過流動池，再經(jīng)分光系統(tǒng)、狹縫照射到一組光電二極管上，由數(shù)據(jù)搜集系統(tǒng)實時統(tǒng)計下組分光譜吸收，得到三維立體譜圖。用一組光電二極管同時檢測透過樣品全部波長紫外光，而不是某一個或幾個波長，和普通紫外—可見分光檢測器不一樣是進入流動池光不再是單色光。它含有以下優(yōu)點：⑴可得任意波長色譜圖，極為方便；⑵可得任意時間光譜圖，相當于與紫外聯(lián)用；⑶提供組分定性信息。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第45頁46⑷蒸發(fā)光檢測器（ELSD）

ESLD是質(zhì)量型、高靈敏度通用液相色譜檢測器。它檢測三個主要過程：

⑴霧化

色譜柱流出物經(jīng)過針頭式細導管進入霧化器，與氣體混合噴成均勻一致霧滴；⑵蒸發(fā)

霧滴經(jīng)過加熱漂移管，流動相被蒸發(fā)，溶質(zhì)形成極細顆粒；⑶檢測

溶質(zhì)顆粒氣體在檢測池發(fā)生散射作用，經(jīng)光電倍增管成電信號輸出。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第46頁47ESLD優(yōu)點⑴適用范圍廣

標準上對全部化合物都能測定，不論化合物是否存在生色團或電活性基團。⑵適合用于梯度洗脫流動相在樣品檢測前揮去；⑶高靈敏度

與示差檢測器(RI)及低波長紫外檢測相比。

因為它這些優(yōu)點，它有可能像氣相色譜中氫火焰檢測器(FID)那樣成為液相色譜高靈敏度通用檢測器。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第47頁48ESLD應用⑴沒有紫外吸收或為紫外末端弱吸收樣品ELSD響應與被測物質(zhì)量成正比，而不依賴于被測物光學特征及官能團。理論上可用于揮發(fā)性低于流動相任何組分檢測。在天然藥品化學成份中常見有糖類、皂甙類（皂甙無紫外吸收或僅為末端吸收，使得皂甙測定在應用HPLC-UV法及選擇流動相優(yōu)化分離時均存在一定困難。ELSD檢測則很好地處理了這個問題。從當前國內(nèi)文件報道來看，ELSD應用亦以分析這類成份及甾類等最多。

⑵流動相有紫外吸收干擾或梯度洗脫時基線漂移影響測定情況

用ELSD檢測，流動相在漂移管便氣化蒸發(fā)，不影響樣品檢測。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第48頁49高效液相色譜應用中藥化學成份分析成份分離制備(1)尤其適合用于極性較大成份(如皂苷類)分離；(2)先以分析色譜探索分離條件；(3)樣品一定要用流動相溶解，再以濾膜過濾。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第49頁50㈢依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進行分離在天然有機化合物分離及精制工作中，吸附現(xiàn)象利用得十分廣泛。其中又以固-液吸附用得最多，其分：物理吸附(表面吸附，physicaladsorption)：以硅膠、氧化鋁及活性炭為吸附劑化學吸附（chemicaladsorption）半化學吸附（semichemicaladsorption）：聚酰胺層析天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第50頁511、物理吸附液-固物理吸附色譜是利用較多一個方法，尤其適合用于很多中等分子量樣品（分子量小于1，000低揮發(fā)性樣品）分離，尤其是脂溶性成份。普通不適合用于高分子量樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水性化合物等分離。吸附層析分離效果，決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物性質(zhì)這三個原因。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第51頁52⑴吸附劑①硅膠②氧化鋁③活性炭天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第52頁53①硅膠

層析用硅膠為一多孔性物質(zhì)，分子中含有硅氧烷交鏈結(jié)構，同時在顆粒表面又有很多硅醇基。硅膠吸附作用強弱與硅醇基含量多少相關。硅醇基能夠經(jīng)過氫鍵形成而吸附水分，所以硅膠吸附力隨吸著水分增加而降低。硅膠是一個酸性吸附劑，適合用于中性或酸性成份層析。同時硅膠又是一個弱酸性陽離子交換劑，其表面上硅醇基能釋放弱酸性氫離子，當碰到較強堿性化合物，則可因離子交換反應而吸附堿性化合物。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第53頁54②氧化鋁氧化鋁帶有堿性，對于分離一些堿性中草藥成份，如生物堿類分離頗為理想。不過氧化鋁不宜用于醛、酮、酸、內(nèi)酯等類型化合物分離。因為堿性氧化鋁可與上述成份發(fā)生次級反應，如異構化、氧化、消除反應等。用稀硝酸或稀鹽酸處理氧化鋁，不但可中和氧化鋁中含有堿性雜質(zhì)，并可使氧化鋁顆粒表面帶有NO3-或Cl-陰離子，從而含有離于交換劑性質(zhì)，適合于酸性成份層析，這種氧化鋁稱為酸性氧化鋁。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第54頁55③活性炭是一個非極性吸附劑?；钚蕴恐饕糜诜蛛x水溶性成份，如氨基酸、糖類及一些甙?；钚蕴繛槲阶饔?，在水溶液中最強，在有機溶劑中則較低弱。故水洗脫能力最弱，而有機溶劑則較強。比如以醇-水進行洗脫時，則隨乙醇濃度遞增而洗脫力增加?；钚蕴繉Ψ枷阕寤衔镂搅Υ笥谥咀寤衔?，對大分子化合物吸附力大于小分子化合物。利用這些吸附性差異，可將水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)分開，單糖與多糖分開，氨基酸與多肽分開。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第55頁56吸附劑特點硅膠和氧化鋁為極性吸附劑，有以下特點：①對極性物質(zhì)含有較強親和能力。故同為溶質(zhì)，極性強者將被優(yōu)先吸附。②溶劑極性越弱，則吸附劑對溶質(zhì)將表現(xiàn)出越強吸附能力。溶劑極性增強，則吸附劑對溶質(zhì)吸附能力即隨之減弱。③溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附，但一旦加入極性較強溶劑時，又可被后者置換洗脫下來。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第56頁57吸附劑特點活性炭因為是非極性吸附劑，故與硅膠、氧化鋁相反，對非極性物質(zhì)含有較強親和能力，在水中對該類物質(zhì)表現(xiàn)出強吸附能力。溶劑極性降低，則活性炭對該類物質(zhì)吸附能力也隨之降低。故從活性炭上洗脫被吸附物質(zhì)時，洗脫溶劑洗脫能力將隨溶劑極性減弱而增強。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第57頁58⑵溶劑洗脫劑選擇，須依據(jù)被分離物質(zhì)與所選取吸附劑性質(zhì)這二者結(jié)合起來加以考慮。在用極性吸附劑進行層析時，當被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，普通選取弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強極性成份，則須選取極性溶劑為洗脫劑。假如對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑極性亦須對應降低。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第58頁59⑶被分離物質(zhì)性質(zhì)被分離物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同組成吸附層析中三個要素，彼此緊密相連。在指定吸附劑與洗脫劑條件下，各個成份分離情況，直接與被分離物質(zhì)結(jié)構與性質(zhì)相關。對極性吸附劑而言，成份極性大，吸附性強。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第59頁60化合物極性及其強弱判斷①官能團極性強弱②化合物極性則由分子中所含官能團種類、數(shù)目及排列方式等綜合原因所決定。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第60頁61①官能團極性強弱官能團極性R-COOH大Ar-OHR-OHR-NH2,R-NH-R’,R-N-R`2R-CO-NR2R-CHOR-CO-R’R-CO-OR’R-O-R’小天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第61頁62②化合物極性化合物極性則由分子中所含官能團種類、數(shù)目及排列方式等綜合原因所決定。極性基團數(shù)目愈多，化合物極性越大，被吸附性能就會更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會強些?？傊?，只要兩個成份在結(jié)構上存在差異，就有可能分離，關鍵在于條件選擇。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第62頁63②化合物極性被分離物質(zhì)極性很小為不含氧萜烯，或雖含氧但非極性基團，則需選取吸附性較強吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進行洗脫。但多數(shù)中藥成份極性較大，則需要選擇吸附性能較弱吸附劑（普通Ⅲ～Ⅳ級）。采取洗脫劑極性應由小到大梯度遞增，或可應用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中分離情況。另外，能否取得滿意分離，還與選擇溶劑梯度有很大關系。多組分混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、甾醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當以硅膠為吸附劑時，使油脂被吸附后選取一系列混合溶劑進行洗脫，油脂中各單一成份即可按其極性大小不一樣依次被洗脫。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第63頁642、吸附簿層色譜薄層層析是一個簡便、快速、微量層析方法。普通將吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進行層析時，即稱薄層層析。針對一些性質(zhì)特殊化合物分離與檢出，有時需采取一些特殊薄層。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第64頁65特殊薄層

①熒光薄層②絡合薄層③酸堿薄層和PH緩沖薄層

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第65頁66①熒光薄層有些化合物本身無色，在紫外燈下也不顯熒光，又無適當顯色劑時，則可在吸附劑中加入熒光物質(zhì)制成熒光薄層進行層析。展層后置于紫外光下照射，薄層板本身顯熒光，而樣品斑點處不顯熒光，即可檢出樣品層析位置。慣用熒光物質(zhì)多為無機物。其一是在254nm紫外光激發(fā)下顯出熒光，如錳激化硅酸鋅。另一個為在365nm紫外光激發(fā)下發(fā)出熒光，如銀激化硫化鋅、硫化鎬。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第66頁67②絡合薄層慣用有硝酸銀薄層，用來分離碳原子數(shù)相等而其中C一C雙鍵數(shù)目不等一系列化合物，如不飽和醇、酸等。其主要機理是因為C-C鍵能與硝酸銀形成絡合物，而飽和C-C鍵則不與硝酸銀絡合。所以在硝酸銀薄層上，化合物可因為飽和程度不一樣而取得分離。層析時飽和化合物因為吸附最弱而Rf最高，含一個雙鍵較含兩個雙鍵Rf值高，含一個三鍵較含一個雙鍵Rf值高。在一個雙鍵化合物中，順式與硝酸銀絡合較反式易于進行。所以，還可用來分離順反異構體。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第67頁68③酸堿薄層和pH緩沖薄層為了改變吸附劑原來酸堿性，可在鋪制薄層時采取稀酸或稀堿以代替水調(diào)制薄層。比如硅膠帶微酸性，有時對堿性物質(zhì)如生物堿分離不好，如不能展層或拖尾，則可在鋪薄層時，用稀堿溶液0.1～0．5NNa0H溶液制成堿性硅膠薄層。比如豬屎豆堿在以硅膠為吸附劑時，以氯仿-丙酮-甲醇（8∶2∶1）為展開劑Rf＜0.1，采取堿性硅膠薄層用上述相同展開劑，Rf值增至0.4左右。說明豬屎豆堿為--堿性生物堿。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第68頁69

薄層層析法應用①化學成份預試②化學成份判定③探索柱層分離條件天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第69頁70①化學成份預試用薄層層析法進行中草藥化學成份預試，可依據(jù)各類成份性質(zhì)及熟知條件，有針對性地進行。因為在薄層上展層后，可將一些雜質(zhì)分離，選擇性高，可使預試結(jié)果更為可靠。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第70頁71②化學成份判定以薄層層析法進中草藥化學成份判定，最好要有標準樣品進行共薄層層析。如用數(shù)種溶劑展層后，標準品和判定品Rf值、斑點形狀顏色都完全相同，則可作初步結(jié)論是同一化合物。但普通需進行化學反應或紅外光譜等一個儀器分析方法加以查對。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第71頁72③探索柱層分離條件在進行柱層分離時，首先考慮選取何種吸附劑與洗脫劑。在洗脫過程中各個成份將按何種次序被洗脫，每一洗脫液中是否為單一成份或混合體，均可由薄層分離得到判斷與檢驗。經(jīng)過薄層預分離，還能夠了解多組分樣品組成與相對含量。如在薄層上探索到比較滿意分離條件，即可將此條件用于干柱層析。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第72頁733、制備薄層色譜（PTLC）一個是流動相靠毛細管作用力流經(jīng)固定相（傳統(tǒng)制備型薄層薄層色譜），另一些方法是流動相靠外力強制流動，如離心薄層色譜和加壓薄層色譜。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第73頁743、制備薄層色譜（PTLC）吸附劑硅膠是最慣用吸附劑。上樣量與吸附劑厚度相關。上樣上樣是進行PTLC分離一個最關鍵步驟。上樣前先用樣品溶于少許溶劑，低揮發(fā)性溶劑可引發(fā)點樣帶變寬，所以最好選取揮發(fā)性溶劑（如己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等）。樣品濃度應在5%-10%左右。點樣帶應盡可能狹窄，以取得更加好分離效果。點樣可用手工進行或自動點樣儀。展開劑選擇及展開在進行PTLC之前應用分析型TLC預試驗來確定展開劑。被分離物質(zhì)回收

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第74頁753、吸附柱色譜（柱層析）⑴吸附劑用量

普通為樣品量30～60倍。樣品極性較小、難以分離者，吸附劑用量可適當提升到樣品量100～200倍。據(jù)此可選擇適當規(guī)格色譜管，試驗室中慣用色譜管規(guī)格以下所表示，其高度與直徑比（h/d）約為（15∶1）～（20：1）。柱色譜用硅膠及氧化鋁通常以100～200目或200～300目為宜，或甚至直接采取薄層色譜用規(guī)格，其分離效果能夠大大提升。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第75頁764、吸附柱色譜⑵洗脫劑選擇，以TLC探索洗脫條件裝柱，濕法裝柱（以起始洗脫劑拌勻裝柱）或干法裝柱天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第76頁774、吸附柱色譜（3）樣品預處理能直接溶于洗脫劑樣品用適量洗脫劑溶解樣品，盡可能少，以利樣品在吸附劑柱上形成狹窄原始譜帶。不能溶解于洗脫劑樣品，則將用能使之溶解溶劑溶解后，再用少許吸附劑拌勻，并減壓抽干溶劑或在60℃下加熱揮盡溶劑，置真空干燥器中減壓干燥或直接減壓抽干、研粉后再小心鋪在吸附劑柱上。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第77頁784、吸附柱色譜（4）洗脫用溶劑極性宜逐步增加，跳躍不能太大。實踐中多用混合溶劑，并經(jīng)過巧妙調(diào)整百分比以改變極性，到達梯度洗脫分離物質(zhì)目標。普通混合溶劑中強極性溶劑影響比較突出，故不可隨意將極性差異很大兩種溶劑組合在一起使用。試驗室中最常應用混合溶劑組合以下：天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第78頁79吸附柱色譜慣用混合洗脫溶劑

己烷-苯極苯-乙醚苯-乙酸乙酯性氯仿-乙醚氯仿-乙酸乙酯遞氯仿-甲醇丙酮-水增甲醇-水天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第79頁804、吸附柱色譜（5）為防止發(fā)生化學吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠、堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁進行分離。硅膠、氧化鋁用適當方法處理成中性時，情況會有所緩解。通常在分離酸性（或堿性）物質(zhì)時，洗脫溶劑中分別加入適量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），?？墒盏筋A防拖尾、促進分離效果。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第80頁815、聚酰胺吸附色譜法聚酰胺（poliamide）吸從屬于氫鍵吸附，是一個用途十分廣泛分離方法，極性物質(zhì)與非極性物質(zhì)均可適用，但尤其適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第81頁82（1）聚酰胺吸附原理系經(jīng)過分子中酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物酚羥基，或酰胺鍵上游離胺基與醌類、脂肪羧酸上羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。至于吸附強弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵能力。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第82頁83⑵聚酰胺吸附原理在含水溶劑中大致有以下規(guī)律：①形成氫鍵基團數(shù)目越多，則吸附能力越強。②成鍵位置對吸附力也有影響。易形成份子內(nèi)氫鍵者，其在聚酰胺上吸附即對應減弱。③分子中芳香化程度高者，則吸附性增強；反之，則減弱。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第83頁84⑵聚酰胺吸附原理吸附因為是在溶液中進行，故溶劑也會參加吸附劑表面爭奪，或經(jīng)過改變聚酰胺對溶質(zhì)氫鍵結(jié)合能力而影響吸附過程。聚酰胺與酚類或醌類等化合物形成氫鍵締合能力在水中最強，在含水醇中則隨醇濃度增高而對應減弱，在高濃度醇或其它有機溶劑中則幾乎不締合。故在聚酰胺柱色譜分離時，通慣用水裝柱，樣品也盡可能作成水溶液上柱以利聚酰胺對溶質(zhì)充分吸附，隨即用不一樣濃度含水醇洗脫，并不停提升醇濃度，逐步增強從柱上洗脫物質(zhì)能力。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第84頁85⑵聚酰胺吸附原理甲酰胺、二甲基甲酰胺及尿素水溶液因分子中都有酰胺基，作為第三者能夠同時與聚酰胺及酚類等化合物形成氫鍵締合，故有很強洗脫能力。另外，水溶液中加入堿或酸均可破壞聚酰胺與溶質(zhì)之間氫鍵締合，也有較強洗脫能力，可用于聚酰胺精制及再生處理。慣用聚酰胺再生劑有10%醋酸、3%氨水及5%氫氧化鈉水溶液等。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第85頁86⑵聚酰胺吸附原理各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫能力由弱至強，可大致排列成以下次序：水〈甲醇〈丙酮〈氫氧化鈉水溶液〈甲酰胺〈二甲基甲酰胺〈尿素水溶液天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第86頁87⑶聚酰胺色譜應用聚酰胺對普通酚類、黃酮類化合物吸附是可逆（鞣質(zhì)除外），分離效果好，加以吸附容量又大，故聚酰胺色譜尤其適合于該類化合物制備分離。對生物堿、萜類、甾體、糖類、氨基酸等其它極性與非極性化合物分離也有廣泛用途。因為對鞣質(zhì)吸附特強，近乎不可逆，故用于植物粗提取物脫鞣質(zhì)處理尤其適宜。聚酰胺色譜也有薄層色譜和柱色譜兩種方式。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第87頁886、大孔吸附樹脂大孔吸附樹脂是一個含有多孔立體結(jié)構人工合成聚合物吸附劑，含有很好吸附性能。它吸附作用是經(jīng)過表面吸附、表面電性或形成氫鍵。大孔樹脂吸附分離技術是采取特殊吸附劑，選擇地吸附其中有效成份，去除無效成份一個提取精制新工藝。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第88頁89⑴大孔吸附樹脂性質(zhì)大孔吸附樹脂多為白色球狀顆粒．粒度多為20—60目，通常分為非極性和極性兩大類，依據(jù)極性大小還可分為弱極性、中等極性和強極性。慣用為苯乙烯型和丙烯腈型，在樹脂合成時依據(jù)需要引入極性基團則成為極性樹脂從而增強吸附能力。大孔吸附樹脂理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機溶劑。對有機物選擇性很好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在影響。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第89頁90⑵大孔吸附樹脂分離原理吸附性

范德華引力或生成氫鍵結(jié)果。篩選原理

本身多孔性結(jié)構所決定。因為吸附和篩選原理，有機化合物依據(jù)吸附力不一樣及分子量大小，在大孔吸附脂上經(jīng)一定溶劑洗脫而分開。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第90頁91⑵大孔吸附樹脂分離原理⑴有機物與無機物分離

普通吸附樹脂對溶液中無機離子沒有任何吸附能力，在吸附混合物時，有機物被樹脂吸附，無機離子則隨水流出，因而很輕易將二者分離。在中藥成份提取中，此特征可使提取物中重金屬和灼燒灰分降至要求范圍內(nèi)。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第91頁92⑵大孔吸附樹脂分離原理⑵解離物與非解離物分離

吸附樹脂對有機解離物與非解離物吸附能力有很大差異。所以，可將二者分離。如有機酸在高pH值成鹽，極難被吸附，所以在堿性條件下可把有機酸分離出來。生物堿在酸性介質(zhì)中能夠成鹽，因而能經(jīng)過調(diào)整pH值進行分離。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第92頁93⑵大孔吸附樹脂分離原理⑶普通有機物與強水溶性物質(zhì)分離

普通有機物，包含大多數(shù)中藥有效成份，是指有一定水溶性，但溶解度不大物質(zhì)，這些物質(zhì)輕易被樹脂吸附。強水溶性物質(zhì)如低級醇類、低級胺類、糖及多糖、多數(shù)氨基酸、肽類、蛋白質(zhì)等，難被普通吸附樹脂吸附。用普通樹脂可很輕易地將此兩類物質(zhì)分離。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第93頁94（3）大孔吸附樹脂分離條件確實立1、樹脂選擇

首先，要依據(jù)被分離化合物分子體積大小經(jīng)過預試驗確定適當孔徑樹脂。其次，要依據(jù)分子中是否含有酚羥基、羧基或堿性氮原子來確定樹脂型號和分離條件。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第94頁95⑷大孔吸附樹脂分離條件確實立2、洗脫液選擇

對非極性大孔吸附樹脂，洗脫劑極性越小，洗脫能力越強。對中等極性大孔樹脂和極性較大化合物來說，則用極性較大洗脫劑為佳。依據(jù)吸附力強弱選取不一樣洗脫劑及濃度。為到達滿意效果，可經(jīng)過幾個洗脫劑濃度比較來確定最正確洗脫濃度。實際工作中甲醇、乙醇、丙酮應用較多。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第95頁96⑸大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應用優(yōu)點1、縮小劑量，提升制劑內(nèi)在質(zhì)量

大孔吸附樹脂處理可降低提取物中雜質(zhì)，提升效成份含量，使制劑劑量減小，有利于制成當代劑型中藥制劑，并便于質(zhì)量控制。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第96頁97⑸大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應用優(yōu)點2、減小產(chǎn)品吸濕性

傳統(tǒng)提取方法所提中成藥大部分含有較強吸潮性，是中藥生產(chǎn)及儲備中長久存在問題。而經(jīng)大孔吸附樹脂處理可有效去除吸潮成份，增強產(chǎn)品穩(wěn)定性。3、有效去除重金屬

既確保了患者用藥安全，同時也處理了中藥重金屬超標難題，為中藥進入國際市場創(chuàng)造了條件。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第97頁98⑹大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應用⑴活性成份提取分離

如皂甙（人參總皂甙、蒺藜總皂昔）、黃酮（葛根總黃酮、山楂總黃酮、淫羊藿總黃酮）、內(nèi)酯、生物堿等化合物；天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第98頁99⑹大孔吸附樹脂在中藥生產(chǎn)中應用⑵質(zhì)量標準制訂除去干擾成份，如金向群等在用薄層掃描法測定益壽永真口服液中人參皂甙Rg1含量時，用YPR—II型大孔吸附樹脂對樣品進行處理，70％乙醇洗脫液即為含人參皂甙Rg1流分，因為去除了人參皂甙Rg1色譜位置干擾成份，可進行薄層掃描來確定人參皂苛Rg1含量，為復方中人參皂甙Rg1含量測定提供了一個簡便可行方法。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第99頁100⑺大孔吸附樹脂處理市售大孔吸附樹脂普通含有未聚合單體、致孔劑（多為長碳鏈脂肪醇類）、分散劑和防腐劑等雜質(zhì)，使用前必須經(jīng)過處理。處理方法是：采取乙醇濕法裝柱，隨用乙醇在柱上作流動清洗，并不時檢驗流出乙醇，直至流出乙醇液與水混合不展現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象即可，然后用大量蒸餾水洗去乙醇。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第100頁101⑻

大孔吸附樹脂柱色譜樣品普通用水溶液上柱。洗脫時依據(jù)吸附作用強弱不一樣選取不一樣濃度甲醇、乙醇等含水溶劑，直至純甲醇、乙醇，乃至丙酮、乙酸乙酯等。對非極性大孔吸附樹脂，洗脫溶劑極性越小，洗脫能力越強。對于中等極性大孔吸附樹脂和極性較大化合物來說，則以用極性較大溶劑為宜。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第101頁102㈣依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離天然有機化合物分子大小各異，中藥化學成份非常復雜，通常含有沒有機鹽、生物堿、氨基酸和有機酸、酚類、酮類、皂昔、甾族和萜類化合物以及蛋白質(zhì)、多糖、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、淀粉、纖維素、無機鹽等。相對分子質(zhì)量分布很寬，從幾十到幾百萬道爾頓。故可據(jù)此進行分離。表1列出了部分中藥所含主要成份相對分子質(zhì)量范圍。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第102頁103部分中藥主要成份相對分子質(zhì)量

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第103頁104㈣依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離普通來講，高相對分子質(zhì)量物質(zhì)主要是膠體和纖維素等非藥效成份或藥效較低成份，藥品有效部位相對分子質(zhì)量普通較小，僅有幾百到幾千道爾頓。天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第104頁105㈣依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離1、凝膠過濾法2、透析法3、超濾法4、超速離心法

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第105頁1061、凝膠過濾法（gelfiltration）也叫凝膠滲透色譜法（gelpermeationchromatography）、分子篩過濾（molecularsievefiltration）、排阻色譜(exclusionchromatography）。利用分子篩分離物質(zhì)一個方法。

天然藥物化學成分提取分離方法專家講座第106頁107⑴

凝膠過濾法分離原理葡聚糖凝膠在水中膨脹成球形顆粒，含有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構。因為凝膠網(wǎng)孔半徑限制，大分子將不能滲透凝膠顆粒內(nèi)部（即被排阻在凝膠粒子外部），故在顆粒間隙移動，并隨溶劑一起從柱底先行流出；小分子因可自由滲透并擴散到凝膠顆粒內(nèi)部，故經(jīng)過色譜柱阻阻力增大、流速邊緩，將較晚流出。樣品混合物中各個成份因分子大小