選修3.2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

生活聯(lián)系：生活聯(lián)系：

燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？最基礎(chǔ)的是

——動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)：動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞融合單克隆抗體等2.2動物細(xì)胞工程2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握動物細(xì)胞培養(yǎng)的概念、過程與條件。2.了解動物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用。3.掌握動物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過程。4.了解動物體細(xì)胞核移植技術(shù)應(yīng)用前景自主閱讀P44第5段，思考下列問題：1、什么叫動物細(xì)胞培養(yǎng)（animalcellculture)？2、動物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是什么？

從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。2.原理：1.動物細(xì)胞培養(yǎng)定義細(xì)胞增殖

注意關(guān)鍵詞:

細(xì)胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)閱讀課文44--46面相關(guān)內(nèi)容3.過程：動物機(jī)體組織單個細(xì)胞原代培養(yǎng)稀釋傳代培養(yǎng)胰蛋白酶膠原蛋白酶細(xì)胞懸液強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞貼壁過程■細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁?！雠囵B(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無毒、易于貼附?！霎?dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時,細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。強(qiáng)調(diào)二：接觸抑制原代培養(yǎng)：通常將直接從動物體內(nèi)取出的動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制后，貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞增殖。這樣即為傳代培養(yǎng)。分類：10代內(nèi)的細(xì)胞；10-50代；50代以后。強(qiáng)調(diào)三：原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)▲細(xì)胞株：傳代細(xì)胞一般能傳到40-50代，遺傳物質(zhì)一般不會發(fā)生改變，叫細(xì)胞株。細(xì)胞株、細(xì)胞系（了解即可，老課本體系）▲細(xì)胞系：傳代50代以后不能再傳下去，部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，能連續(xù)傳代，獲得不死性，叫細(xì)胞系。1、選用組織時，一般用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做培養(yǎng)材料，而不用老齡動物的，這是為什么？因?yàn)橛g組織或器官上的細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，容易培養(yǎng)。老齡動物的細(xì)胞則相反。學(xué)習(xí)活動二：尋根問底，加深鞏固2、用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶行嗎？不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同.動物細(xì)胞培養(yǎng)的最適PH值為7.2-7.4，胰蛋白酶作用的適宜PH為7.2-8.4，胃蛋白酶適宜PH為2.胃蛋白酶在PH為7.2-7.4的動物細(xì)胞培養(yǎng)中無活性。

動物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，由于成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖，細(xì)胞培養(yǎng)時要解除接觸抑制。3、用胰蛋白酶會不會把細(xì)胞消化掉？會消化細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，所以要控制好消化時間。原代培養(yǎng)一般傳至10代左右。傳代培養(yǎng)細(xì)胞一般傳至

代以后就不易傳下去了,少部分細(xì)胞會突變能傳至無數(shù)代,遺傳物質(zhì)發(fā)生改變。104、原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的區(qū)別？50代后為什么能無限增殖？6.動物細(xì)胞培養(yǎng)能否最終培養(yǎng)成新個體？10代以內(nèi)

遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體5、目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為多少代以內(nèi)？原因是？總結(jié)：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸液剪碎用胰蛋白酶處理10代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋傳代10代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長緩慢以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質(zhì)可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？原代培養(yǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁生長、接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。原代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識，認(rèn)為體外培養(yǎng)動物細(xì)胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些條件呢？問題探討：無菌、無毒全部的營養(yǎng)物質(zhì)適宜的溫度和PH值必要的氣體條件2、動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件1）無菌無毒的環(huán)境：

適宜的溫度：人和哺乳動物細(xì)胞最適溫度為36.5±0.5℃。適宜的酸堿度：PH：7.2-7.4液體合成培養(yǎng)基：（糖、氨基酸）、促生長因子、（水、無機(jī)鹽、微量元素）等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。4）氣體環(huán)境：2）營養(yǎng)：3）溫度和pH：“95％空氣+5％CO2”的混合氣體培養(yǎng)箱。氧氣是細(xì)胞代謝必須的；CO2維持培養(yǎng)液的PH。對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無菌處理；培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過程中污染；定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。思考、動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、無機(jī)鹽）、維生素和動物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等3、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1）蛋白質(zhì)生物制品的大規(guī)模生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2）應(yīng)用于基因工程主要用于作為受體細(xì)胞3）檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性

原理是動物細(xì)胞經(jīng)該物質(zhì)處理后，畸變細(xì)胞所占比例越大，說明該物質(zhì)毒性越大。4）細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

如用于篩選抗癌藥物植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較：比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖促生長因子、血清培養(yǎng)結(jié)果植物體大量細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白取材植物幼嫩部分或花藥胚胎或幼齡動物的器官或組織其他條件無菌無毒，適宜條件無菌無毒，適宜條件總結(jié)：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸液剪碎用胰蛋白酶處理10代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋傳代10代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長緩慢以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質(zhì)可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？原代培養(yǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁生長、接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。原代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系1.關(guān)于哺乳動物細(xì)胞體外培養(yǎng)的難易程度，下列表述正確的是()A．乳腺癌細(xì)胞易于乳腺細(xì)胞；胚胎細(xì)胞易于脂肪細(xì)胞B．乳腺細(xì)胞易于乳腺癌細(xì)胞；胚胎細(xì)胞易于脂肪細(xì)胞C．乳腺細(xì)胞易于乳腺癌細(xì)胞；脂肪細(xì)胞易于胚胎細(xì)胞D．乳腺癌細(xì)胞易于乳腺細(xì)胞；脂肪細(xì)胞易于胚胎細(xì)胞練一練~~~Let'stry!2.在25℃實(shí)驗(yàn)條件下可順利完成的是A.光合色素的提取和分離B.用斐林（本尼迪特）試劑鑒定還原糖C.大鼠神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)D.制備用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基練一練~~~Let'stry!3．關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是

A.動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散開來

B.通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)

C.動物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培育的細(xì)胞全部衰老死亡

D.用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或組織

練一練~~~Let'stry!思考探究1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)的奶牛，年產(chǎn)奶量為3