第十七章藥物制劑的微生物檢驗演示文稿

第十七章藥物制劑的微生物檢驗演示文稿當前第1頁\共有21頁\編于星期五\23點優(yōu)選第十七章藥物制劑的微生物檢驗當前第2頁\共有21頁\編于星期五\23點一、藥物的體外抑菌試驗（一）體外抑菌試驗

藥物的體外抑菌試驗是常用抗菌試驗方法，其中最常用的方法用系列稀釋法和瓊脂擴散法。

1、連續(xù)稀釋法稀釋法有液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法和固體稀釋法（斜面法）兩種。這兩種方法都可以用來測定藥物的最小抑菌濃度（MIC）：是指該藥物能抑制細菌生長的最低濃度，通常用μg∕ml或U/ml表示。

當前第3頁\共有21頁\編于星期五\23點（1）液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法當前第4頁\共有21頁\編于星期五\23點(2)固定培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法

1)平板法將系列濃度的藥物混入瓊脂平板，用微量加樣器或多點接種儀接種試驗菌，可在一組平板上測定多種試驗菌的MIC。2)斜面法將不同濃度的藥物混入培養(yǎng)基中制成斜面，然后在斜面接種一定量試驗菌，培養(yǎng)后觀察其MIC值。當前第5頁\共有21頁\編于星期五\23點2.瓊脂擴散法利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴散，并在一定濃度范圍內抑制細菌生長的原理進行的。一般用于細菌和酵母菌的藥敏試驗。1）

濾紙片法（紙碟法）濾紙片法是最常用的方法，適用于新藥的初篩試驗（初步藥物是否有抗菌作用）及臨床的藥敏試驗。濾紙片分濕、干兩種，可以在試驗時用無菌紙片沾取藥物溶液放在含菌的平板表面，也以預先做成一定濃度的干燥紙片。一般來說預先做成的干燥紙片實用一些而且準確一些。當前第6頁\共有21頁\編于星期五\23點世界衛(wèi)生組織規(guī)定了抗菌藥物的敏感性評定標準，在標準實驗條件下根據(jù)抑菌圈大小來判斷，比如：抗生素或化療藥物抑菌圈直徑（mm）耐藥中敏敏感氯霉素≤1213-17≥18紅霉素≤1314-17≥18四環(huán)素≤1415-18≥19卡那霉素≤1314-17≥18當前第7頁\共有21頁\編于星期五\23點(2)挖溝法(3)打孔法當前第8頁\共有21頁\編于星期五\23點（二）體外殺菌試驗殺菌試驗是用來評價藥物對微生物的致死活性的。

1、最低殺菌濃度（MBC）（最小致死濃度MLC）的測定按液體培養(yǎng)基稀釋法的操作方法測定藥物的MIC。然后把未長出菌的各個試管培養(yǎng)液分別移種到無菌平板上，培養(yǎng)后凡是平板上無菌生長的藥物最低濃度就是最小致死濃度（MLC）。如果是細菌的話可以稱為最小殺菌濃度（MBC）。當前第9頁\共有21頁\編于星期五\23點2、

活菌計數(shù)法將定量的試驗菌加入到一定濃度的定量藥物中，作用一定時間后，取樣進行活菌數(shù)計數(shù)，從存活的微生物數(shù)量計算出藥物對試驗菌的致死率，從而判斷藥物的殺菌能力?；罹嫈?shù)一般是將定量的藥物與試驗菌作用后混合液稀釋后，混入瓊脂培養(yǎng)基做成平板，培養(yǎng)后數(shù)平板上形成的菌落數(shù)，由于一個菌落是由一個細菌繁殖而來的，所以可以用菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，計算出混合液中存活的細菌數(shù)。當前第10頁\共有21頁\編于星期五\23點3、酚系數(shù)測定（石炭酸系數(shù)測定）酚系數(shù)是以酚為標準，將待測的化學消毒劑與殺菌效力相比較，所得的就是殺菌效力的比值。由于各種化學消毒劑殺菌原理各不相同，因而這種方法僅僅適用于酚類消毒劑殺菌效力的測定。具體的測定方法是分別將酚及待測化學消毒劑按不同比例稀釋，各取5ml放到試管中，再加入經(jīng)24小時培養(yǎng)后的菌懸液各0.5ml，混勻后放入20℃水浴中，5、10、15分鐘分別取一接種環(huán)混合液移種到另一支5ml的肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24小時記錄生長情況。當前第11頁\共有21頁\編于星期五\23點當前第12頁\共有21頁\編于星期五\23點（三）聯(lián)合抗菌試驗聯(lián)合抗菌試驗主要用于測定兩種抗菌藥物聯(lián)合應用時的相互影響。兩種抗菌藥聯(lián)合應用時抗菌作用加強的稱為協(xié)同作用；抗菌作用減弱的稱為拮抗作用；相互無影響的稱為無關。常用的聯(lián)合抗菌試驗的方法有以下幾種。當前第13頁\共有21頁\編于星期五\23點出現(xiàn)4種結果：①無關作用小，兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨活性；②拮抗作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于單獨抗菌活性；③累加作用，兩種藥物聯(lián)合作用時的活性等于兩種單獨抗菌活性之和；④協(xié)同作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨作用的總和。當前第14頁\共有21頁\編于星期五\23點1、棋盤稀釋法常用的定量方法，首先分別測定擬聯(lián)合的抗菌藥物對檢測菌的MIC。藥物最高濃度為MIC的2倍，對倍稀釋。兩種藥物的稀釋分別在方陣的縱列和橫列進行，這樣在每管（孔）中可得到不同濃度組合的兩種藥物混合液。接種菌量為5×105CUF／ml，35℃孵育18h后觀察結果。計算部分抑菌濃度（FIC）指數(shù)。當前第15頁\共有21頁\編于星期五\23點當前第16頁\共有21頁\編于星期五\23點FIC指數(shù)

0.5為協(xié)同作用；

0.5－1為相加作用；

1～2為無關作用；＞2為拮抗作用。當前第17頁\共有21頁\編于星期五\23點[棋盤法的設計]

棋盤法的主要優(yōu)點在于甲、乙兩藥的每個藥物濃度都有單獨的和與另一個藥物不同濃度的聯(lián)合，因此能精確測定兩種抗菌藥物在適當濃度的比例下所產(chǎn)生的相互作用。在進行棋盤法之前應先測定兩種抗菌藥物單獨對受試菌的MIC，然后以兩藥MIC的8倍、4倍、2倍、1倍以及MIC的1/2、1/4、1/8濃度（或4倍、2倍、1倍、1/2、1/4濃度）分別進行聯(lián)合?？梢娕e例，如表—1的青霉素G與鏈霉素聯(lián)合藥敏實驗。當前第18頁\共有21頁\編于星期五\23點藥物及濃度青霉素G(IU／m1)鏈霉素單藥對照

4210.50.25鏈霉素（μg／ml）

64------32------16------8---+++4---+++

青霉素G單藥對照---++細菌對照-：無細菌生長+：有細菌生長FIC指數(shù)=1／1+16／16=2——無關當前第19頁\共有21頁\編于星期五\23點

2.紙條試驗在含菌平板上垂直放兩條浸有不同藥液的濾紙條，培養(yǎng)后觀察兩藥形成的抑菌區(qū)的圖形來判斷兩藥聯(lián)合應用時，是無關、協(xié)同還是拮抗作用。

當前第20頁\共有21頁\編于星期五\23點二、藥物的體內抗菌試驗

藥物的體內抗菌試驗又稱為動物實驗治療試驗或保護力試驗。當抗菌藥物進入機體后，其效力的發(fā)揮要受體內各種因