抗原抗體及其結合反應

教學目的掌握：抗原抗體結合力、抗原抗體結合反應特點熟悉：影響抗原抗體結合反應的因素當前1頁，總共36頁。第一節(jié)抗原一、抗原的特性免疫原性、免疫反應性特異性二、用于免疫測定的抗原分類天然、合成多肽、基因重組當前2頁，總共36頁。第二節(jié)抗體一、抗體的特性特異性、多樣性、免疫原性二、用于免疫測定的抗體分類多克隆、單克隆、基因工程三、抗體產生的規(guī)律初次應答、再次應答當前3頁，總共36頁。第三節(jié)抗原抗體結合反應的原理抗原抗體反應:指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。抗原表位與抗體高變區(qū)間的結構互補抗原表位與抗體高變區(qū)的緊密接觸抗原抗體之間的結合力親水膠體轉化為疏水膠體物質基礎當前4頁，總共36頁。一、抗原抗體結合力靜電引力范德華引力氫鍵疏水作用力抗原抗體結合力示意圖當前5頁，總共36頁。１.靜電引力（electrostaticforces）抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團之間相互吸引的力。又稱為庫倫引力當前6頁，總共36頁。2.范德華引力（VonderWaalsforces）

抗原和抗體相互接近時，由于分子的極化作用而出現(xiàn)的引力。

范德華引力<靜電引力當前7頁，總共36頁。3.氫鍵結合力供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力供氫體：羧基、氨基和羥基受氫體：羧基氧、羧基碳和肽鍵氫鍵具有高度的方向性當前8頁，總共36頁。4.疏水作用力（疏水鍵）

兩個疏水基團在水溶液中相接觸時，由于對水分子排斥而趨向聚集力。當前9頁，總共36頁。二、抗原抗體的親和力和親合力抗原抗體親和力示意圖當前10頁，總共36頁。抗原抗體親合力示意圖當前11頁，總共36頁。三、液相中抗原抗體的結合反應抗原抗體復合物

(疏水膠體)可見反應電解質

抗原

(親水膠體)抗體﹢當前12頁，總共36頁。四、固相表面抗原抗體的結合反應1.抗原抗體結合反應時間2.反應體積3.解離速度4.固相化抗原或抗體的構象當前13頁，總共36頁。第四節(jié)抗原抗體結合反應的特點特異性可逆性比例性階段性當前14頁，總共36頁。

親水膠體轉化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體可見反應當前15頁，總共36頁。一、特異性抗原抗體反應特異性示意圖當前16頁，總共36頁。特異性示意圖當前17頁，總共36頁。交叉反應（crossreactions）抗原抗體交叉反應示意圖當前18頁，總共36頁。二、可逆性可逆性：抗原與相應抗體結合成復合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素：抗體對相應抗原的親合力環(huán)境因素對復合物的影響當前19頁，總共36頁。

【Ag】+【Ab】【Ag-Ab】

解離后抗原抗體仍保持原有特性。一定條件：低pH、高濃度鹽等。Ab1當前20頁，總共36頁。比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應需遵循一定的量比關系最適比：沉淀物最多時的抗原抗體的濃度比或量比等價帶:

抗原與抗體分子比例合適范圍前帶：

抗體過量后帶：

抗原過量三、比例性當前21頁，總共36頁。

抗原抗體反應比例性示意圖當前22頁，總共36頁。四、階段性第一階段：特異性結合階段第二階段：反應可見階段當前23頁，總共36頁。第五節(jié)影響抗原抗體結合反應的因素抗原抗體本身因素反應基質因素實驗環(huán)境因素當前24頁，總共36頁。一、抗原抗體本身因素抗原:理化性狀、表位種類和數目抗體:來源、特異性、親和性、效價當前25頁，總共36頁。來源R型Ab：等價帶寬，易出現(xiàn)可見反應。H型Ab：等價帶窄，易出現(xiàn)前帶或后帶McAb:不宜用于凝集和沉淀反應。濃度：是相對Ag而言，比例要合適，故實驗前

需滴定，以求最適Ag與Ab比例。

特異性與親和力：關鍵因素，選擇特異性與親和力高的Ab。當前26頁，總共36頁。二、反應基質因素非特異性因素，如蛋白、鹽、藥物等當前27頁，總共36頁。三、實驗環(huán)境因素電解質:0.85%生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6~8溫度:37℃最適當前28頁，總共36頁。(一）電解質作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使Ag-Ab聚集。常用：0.85%NaCl溶液，緩沖液、Ca2+、Mg2+等。當前29頁，總共36頁。（二）酸堿度

抗原抗體反應中一般以pH6-8為宜，有補體參與的反應最適pH為7.2-7.4酸凝集：當pH為3左右時，接近細菌Ag的等電點，可出現(xiàn)非特異性凝集。當前30頁，總共36頁。（三）溫度

最適溫度為37℃或室溫18-25℃為宜。若溫度高于56℃，可導致已結合了的抗原抗體復合物解離，甚至分子變性。當前31頁，總共36頁?？乖贵w反應類型當前32頁，總共36頁。當前33頁，總共36頁。標記免疫技術用熒光物質、放射性核素、酶或化學發(fā)光物質等標記抗原或抗體，進行抗原抗體反應后，通過檢測標記物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析當前34頁，總共36頁。思考題1．抗原抗體結合反應的原理？2．抗原抗體的結合力有哪些？3．抗原抗體結合反應的特點？當前35頁，總共36頁