細(xì)胞分析技術(shù)概述

細(xì)胞分析技術(shù)概述(CellAnalysisTechnology)姓名：XXX學(xué)號：XXX細(xì)胞分析意義細(xì)胞分析流程匯報內(nèi)容

細(xì)胞是生命活動的基本單位,是獨立生存的生命實體,是展現(xiàn)活的生命狀態(tài)全部特點的最小單位,是組成生物體的結(jié)構(gòu)和功能的基本單元，也是無數(shù)鑒定和了解生命的基本生化生理過程研究的起點。

分析檢測細(xì)胞的各種變化,從細(xì)胞中提取生命的信息,搞清單細(xì)胞中各種化學(xué)物質(zhì)的定性、定位、定形、定量以及結(jié)構(gòu)的變化等都具有十分重要的學(xué)術(shù)意義和應(yīng)用價值。細(xì)胞分析意義細(xì)胞分析意義

細(xì)胞分析流程匯報內(nèi)容細(xì)胞分析流程(CellAnalysisWorkflow)1細(xì)胞培養(yǎng)(CellCulture)：

(1)細(xì)胞系培養(yǎng)(CellLineCulture)

(2)原代細(xì)胞培養(yǎng)(PrimaryCellCulture)

(3)干細(xì)胞培養(yǎng)(StemCellCulture)

(4)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞培養(yǎng)(iPSCCulture)2細(xì)胞分離(CellIsolation)3細(xì)胞計數(shù)(CellCounting)4細(xì)胞轉(zhuǎn)染(CellTransfection)5細(xì)胞成像(CellularImaging)6流式細(xì)胞分析技術(shù)(FlowCytometry)細(xì)胞分析解決方案(CellAnalysisWorkflow)1細(xì)胞培養(yǎng)——細(xì)胞的原代培養(yǎng)

將動物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。

1細(xì)胞培養(yǎng)2細(xì)胞分離

細(xì)胞分離：將組織材料分散制成細(xì)胞懸液后,從中獲取目的細(xì)胞的過程。

細(xì)胞分離技術(shù)包括：離心技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞電泳。

離心：是研究如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體，以及各種大分子基本手段；

流式細(xì)胞術(shù)：是對單個細(xì)胞進行快速定量分析與分選的一門技術(shù)；

細(xì)胞電泳：是指在一定PH值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電荷，能在外加電場的作用下發(fā)生泳動。2細(xì)胞分離——離心技術(shù)

3細(xì)胞計數(shù)——細(xì)胞計數(shù)板

實驗原理：當(dāng)待測細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。具體操作：1.將計數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板。2.將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間，靜置3min，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。3.計算板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計左側(cè)和上方的。然后按公式計算：細(xì)胞數(shù)/mL=四大格細(xì)胞總數(shù)/4×104說明：公式中除以4，因為計數(shù)了4個大格的細(xì)胞數(shù)。公式中乘以104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為：1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）=0.1mm3

而1ml=1000mm3細(xì)胞計數(shù)板3細(xì)胞計數(shù)——細(xì)胞自動計數(shù)儀

4細(xì)胞轉(zhuǎn)染

定義：細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進入細(xì)胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前實驗室最方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細(xì)胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。常用細(xì)胞類型:cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等。2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔。3.病毒感染對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系建議用病毒感染，此法可以快速100%感染，檢測成功率高。4細(xì)胞轉(zhuǎn)染——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法活體動物體內(nèi)成像技術(shù)是指應(yīng)用影像學(xué)方法，對活體狀態(tài)下的生物過程進行組織、細(xì)胞和分子水平的定性和定量研究的技術(shù)。活體動物體內(nèi)成像技術(shù)主要分為可見光成像(opticalimaging)、核素成像（radio-nuclearimaging）、核磁共振（magneticresonanceimaging，MRI）成像和超聲（ultrasound）成像、計算機斷層攝影（computedtomography，CT）成像五大類，活體動物體內(nèi)功能成像技術(shù)可用于觀察和追蹤靶細(xì)胞、基因的表達，同時檢測多種分子事件，優(yōu)化藥物和基因治療方案，從分子和細(xì)胞水平對藥物療效進行觀察，從整體動物水平上評估疾病發(fā)展過程，對同一個動物進行時間、環(huán)境、發(fā)展和治療影響跟蹤。5細(xì)胞成像5細(xì)胞成像活細(xì)胞成像技術(shù)包括：寬場熒光成像；共聚焦成像；多光子成像；全內(nèi)反射顯微成像系統(tǒng)；熒光能量共振轉(zhuǎn)移成像；熒光壽命周期成像；透射光顯微鏡；

其他成像技術(shù)等。Nature：活體成像捕捉癌細(xì)胞的一舉一動Nature雜志報道：MikalaEgeblad小組完成了活鼠體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的活動影片，當(dāng)展示影片時，人們可以看到腫瘤病變?nèi)绾窝莼?，這是一種認(rèn)知上的改變。活體成像技術(shù)可以將這樣的互作直接展現(xiàn)在人們眼前，幫助人們在活體動物中追蹤癌癥的發(fā)展，深入解析一些特別危險的細(xì)胞。6流式細(xì)胞分析技術(shù)

定義：

流式細(xì)胞技術(shù)（FlowCytometry,FCM）是一種可以對細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進行快速測量的新型分析技術(shù)和分選技術(shù)。特點：

①測量速度快，最快可在1秒種內(nèi)計測數(shù)萬個細(xì)胞；②可進行多參數(shù)測量，可以對同一個細(xì)胞做有關(guān)物理、

化學(xué)特性的多參數(shù)測量，并具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義；③是一門綜合性的高科技方法，它綜合了激光技術(shù)、計

算機技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、圖像技術(shù)等從多領(lǐng)