乳酸含量的測定方法實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)

乳酸含量的測定方法(實(shí)訓(xùn)指導(dǎo))L一乳酸的含量測定方法有UV--酶法、酶電極法、旋光法、氣相色譜法、高教液相色譜法等。旋光法因受其他物質(zhì)干擾，及測定時(shí)間長，手段繁瑣，故不適合子L一乳酸的定量測定｝UV酶法測定精度商，但部分試劑依賴進(jìn)口，費(fèi)用高且測定時(shí)間長，故亦不宜在食品、飲料的質(zhì)量檢測及L乳酸的工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用，酶電極法測定迅速，準(zhǔn)確、簡便、廉價(jià)，適合于各種場合對L一乳酸含量的測定。以啤酒中乳酸含量的測定為實(shí)訓(xùn)案例，介紹酸堿滴定法和褪色光度法測定檸檬酸含量的方法。1酸堿滴定法測定原理將試樣加入過量的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液，加熱后使乳酸和乳酸干酊與堿反應(yīng)完全，冷卻后以酚獻(xiàn)作指示劑，用強(qiáng)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定過量的堿。根據(jù)消耗的強(qiáng)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，可以求出乳酸的含量。儀器設(shè)備三角瓶150mL、堿式滴定管試齊1J1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1%酚猷指示劑C1/2H2SO41mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液錯(cuò)誤!未找到引用源。操作步驟1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的配制與標(biāo)定配制：取澄清的氫氧化鈉飽和溶液56mL加新沸過的冷蒸儲水定容至1000mL標(biāo)定：精密稱取在105c干燥至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀6.000g,加新沸過的冷蒸儲水50mL振搖，使其盡量溶解；加酚吹指示液2滴，用氫氧化鈉飽和溶液滴定，在接近終點(diǎn)時(shí)，應(yīng)使鄰苯二甲酸氫鉀完全溶解，滴定至溶液顯粉紅色。每1mL氫氧化鈉7?定液(1mol/L)相當(dāng)于204.2mg的鄰苯二甲酸氫鉀。CH2SO4)1mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定配制：取硫酸30mL(硫酸的密度為1.84g/mL,濃度為95%),緩緩注入適量的水中，冷卻至室溫，加水稀釋至1000mL搖勻。標(biāo)定：取在270-300C干燥恒重的基準(zhǔn)無水碳酸鈉約1.0g,精密稱定(精確至0.001),加水50mL使溶解，加甲基紅-澳甲酚綠混合指示液10滴，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)樽霞t色時(shí)，煮沸2分鐘，冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液顏色有綠色變?yōu)榘底仙?。?jì)算：每1mL硫酸滴定液(0.5mol/L)相當(dāng)于53.00mg的無水碳酸鈉。根據(jù)滴定用硫酸溶液消耗量與無水碳酸鈉的取用量，算出硫酸溶液的濃度，即得。m—稱取無水碳酸鈉的質(zhì)量，g；V1一滴定無水碳酸鈉消耗的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLV2一滴定空白試驗(yàn)消耗的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL0.05299—與1mL硫酸滴定液(0.5mol/L)相當(dāng)?shù)臒o水碳酸鈉的質(zhì)量表4:硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配方C錯(cuò)誤！未找到引用源。H2SO4/1mol/L硫酸/mL基準(zhǔn)無水碳酸鈉/g1301.00.5150.80.130.21%酚猷指示劑的配制取酚吹1g,加乙醇100mL使溶解。(4)澳甲酚綠混合指示液（5）啤酒灑液中乳酸含量的測定稱取試樣1.5g（稱準(zhǔn)至0.0002g）于150mL的三角瓶中，加50ml新煮沸的冷蒸儲水，精確加40mL1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，煮沸5分鐘，加酚吹指示液2滴，趁熱用硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液（1mol/L）滴定，酚吹指示液變紅時(shí)停止滴定，記錄消耗硫酸滴定液的體積數(shù)（mL）,每1mL氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于90.08mg乳酸（C3H6。3）。用空白試驗(yàn)校正。1.5結(jié)果記錄與計(jì)算乳酸含量測定結(jié)果數(shù)據(jù)記錄如下表表5:乳酸含量測定結(jié)果記錄表測定內(nèi)容~~~一^___四定次數(shù)123硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度/mol/L滴定管初始讀數(shù)/mL滴定管終讀數(shù)/mL試樣消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積/mL空白滴定消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積/mL乳酸含量，w,%乳酸平均含量/%相對平均偏差/%計(jì)算公式:w一乳酸含量，%V1--試樣消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLV2--空白滴定消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLC--硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/Lm一稱取樣品質(zhì)量0.09008—與1mL硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)?shù)囊院量吮硎镜娜樗豳|(zhì)量2對羥基聯(lián)苯比色法測定啤酒中乳酸含量1測定原理在除去蛋白質(zhì)，葡萄糖等干擾物質(zhì)的啤酒中，乳酸在銅離子的催化下，與濃硫酸作用生成乙醛，乙醛能與對羥基聯(lián)苯作用生成在565nm處有特征吸收的紫紅色物質(zhì)，在一定范圍內(nèi)，乳酸濃度與波長為565nm的吸光度呈線性關(guān)系，因此可以通過測定565nm處的吸光度來測定乳酸的含量。2儀器設(shè)備(1)分光光度計(jì)，1cm比色皿；(2)離心機(jī)；(3)恒溫水浴鍋；(4)試管混旋器，SK-2;(5)具塞t^管，5mL;(6)具塞比色管，20mL。3試劑與溶液所用試劑無水乳酸鋰、對羥基聯(lián)苯、鴇酸鈉、硫酸銅、氫氧化鈣、濃硫酸、40%乙醛溶液、無水葡萄糖、蔗糖均為分析純試劑。主要溶液(1)鴇酸溶液：0.303mol/L硫酸及10%(W/V)鴇酸鈉(Na2WO42H2O)溶液等體積混合，當(dāng)天配用。(2)20%(W/V)硫酸銅溶液：稱取硫酸銅(CuSO45H2O)20g,加蒸儲水約70mL,加熱使溶解，再用蒸儲水稀釋至100mL。(3)4%(W/V)硫酸銅溶液：20%硫酸銅溶液10mL加蒸儲水稀釋至50mL。(4)對羥基聯(lián)苯溶液：稱取對羥基聯(lián)苯1.5g溶于0.125mol/L氫氧化鈉100mL中(稍稍加溫助溶)。貯棕色瓶中，保存于冰箱內(nèi)，可使用一個(gè)月。(5)乳酸標(biāo)準(zhǔn)儲存液(1mg/mL):精確稱取無水乳酸鋰106.5mg,溶于50mL蒸儲水中，力口0.5M硫酸20mL,再加蒸水稀釋至100mL?；靹蚝蟊４嬗诒?。（6）乳酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（200pg/mL）使用時(shí)取儲存液10mL用蒸儲水稀釋至50mL。在冰箱中可保存數(shù)天。（7）醛溶液（50pg/mL）稱取預(yù)冷40%的乙醛溶液25mg,加蒸儲水稀釋至200mL04操作步驟（1）樣品處理取約3mL左右啤灑灑液，3000r/min離心5min,吸取上精液稀釋一定倍數(shù)后，吸取稀釋液00mL于潔凈離心管中，準(zhǔn)確加入00mL鴇酸溶液，混勻，室溫靜置至溶液有明顯絮狀物出現(xiàn)（約30~45min）,10000r/min離心10min,取上清液加入0.3g活性炭，反復(fù)搖后置室溫30min,過濾，濾液收集于5mL具塞試管中，60c水浴保溫0.5h,冷卻待用。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制①用200仙g/mL乳酸應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液，同樣品溶液（酒液）預(yù)處理后（可以不稀釋）,按下表6數(shù)量在預(yù)先編好號的試管中加入標(biāo)準(zhǔn)乳酸濾液和蒸儲水。表6:乳酸標(biāo)準(zhǔn)液配制試管號1234567濾液/mL0.000.100.200.300.400.500.60蒸儲水/mL001.901.801.701.601.501.40②各管中分別加入氫氧化鈣粉末100mg,混勻，8000r/min離心5min,取上精液1.5mL,加入預(yù)先加有20mg氫氧化鈣粉末的小試管中，混勻，力口0.1mL20%硫酸銅溶液，稱重，迅速混勻，沸水浴3min,水浴冷卻，補(bǔ)足重量，3000r/min離心5min,各吸上精液0.5mL加入比色管中。③在各管加入25pL的4%硫酸銅溶液，混勻后置冰水浴內(nèi)冷卻。④將預(yù)冷的濃硫酸緩緩加入各管中，每管各加6.0mL,邊加邊搖，混勻后置沸水浴中準(zhǔn)確加熱5min,取出后迅速置冰水浴中冷卻3min左右。⑤在各管中加0.5%對羥基聯(lián)苯溶液0.05mL,充分振搖后，放置0.5h,其間每10min混搖一次。⑥各管置于沸水浴中準(zhǔn)確加熱90s,立即放入冰水浴中冷卻。在波長565nm處用lcm比色皿，1管作為參比，分別測定吸光度（A）。所得數(shù)據(jù)以乳酸含量為橫坐標(biāo)，以565nm處的光吸收為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。表7:標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表溶液中乳酸的含量（gg/mL）吸光度A(3)啤酒灑液中乳酸含量的測定取灑液濾液按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法，以蒸儲水為空白測定其在560nm處的光吸收，所得數(shù)據(jù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的乳酸含量，即為酒液中的乳酸含量。酒液乳酸含量=標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的乳酸含量楙釋倍數(shù)5注意事項(xiàng)(1)用硫酸銅和氫氧化鈣去除葡萄糖、醛類等干擾物質(zhì)，在本質(zhì)上是利用了氫氧化銅中銅離子在堿性條件下能將葡萄糖等含還原性醛基的物質(zhì)氧化的性質(zhì)(而使葡萄糖等干擾物除去)o但這步反應(yīng)需在加熱條件下才能進(jìn)行。在做葡萄糖和乙醛的干擾試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，在不加熱時(shí)，顯色后顏色非常深(影響乳酸的測定)。因此去除葡萄糖、醛類等干擾物質(zhì)的操作必須要加熱才行。(2)本實(shí)驗(yàn)成功與否與所用濃