高效快速的點(diǎn)突變方法

高效快速的點(diǎn)突變方法陳嚴(yán)姜明湯敏謙寶生物工程（大連）有限公司,116600高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!目的：1.在目的基因中的特定位點(diǎn)導(dǎo)入突變，包括：

●堿基缺失

●堿基置換

●堿基插入2.通過突變基因的表達(dá)，可以為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能的分析和改造提供有效途徑。高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!TaKaRa用于定點(diǎn)突變的試劑盒■Mutan-ExpressKmKit

■Mutan-SuperExpressKmKit■Mutan-KKit■TaKaRaMutanBESTKit高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!原理：ODA法高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!ProtocolReactionMixtureAnnealing/ExtensionDNASampleTransformation（1）E.coliBMH71-18mutSPlasmidMiniprepDNATransformation（2）MV1184ColonySequencing高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!原理：ODA-LAPCR法高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!ReactionMixturePCR反應(yīng)DNA精制Transformationsup0菌株（MV1184）SequencingColonyProtocol高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!原理：Kunkel法高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!ProtocolClonedDNA（M13）TransfectionCJ236ssDNASample變異用寡聚核苷酸5′磷酸化AnnealingExtensionDNASampleTransfectionBMH71-18mutSPhageTransfectionMV1184（ung+Cell）噬菌斑高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!

原理：PCR法

高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!Protocol

ReactionMixturePCR反應(yīng)電泳回收PCRFragmentBKL反應(yīng)DNASampleTransformation（JM109）SequencingColony高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!StepI.PCR反應(yīng)10×PyrobestBufferdNTPMixtrue（各2.5mM）Primer1Primer2TemplatePyrobestDNAPolymerase(5U/ml)滅菌蒸餾水upto

5μl4μl0.2～1.0μM(finalconc.)0.2～1.0μM(finalconc.)<1μg0.25μl50μl94℃30sec55℃30sec72℃5min30Cycles高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!StepⅢ.LigationReactionDNAFragment5μlLigationSolutionI

5μl

16℃,1hrTransformationJM109ColonySequencing高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!TaKaRaSite-DirectedMutagenesisSystem比較高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!Mutan-ExpressKm高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!E.coliBMH71-18mutS、MV1184CompetentCellorElectroCell導(dǎo)入變異Primer材料與方法Materials高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!Mutan-SuperExpressKm高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!E.coli

MV1184CompetentCellorElectroCellpKF18k/pKF19kDNA導(dǎo)入變異用寡聚核苷酸（5′-P）材料與方法Materials高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!Mutan-K高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!材料與方法E.coliBMH71-18mutS、CJ236、MV1184CompetentCellorElectroCell導(dǎo)入變異用寡聚核苷酸M13mp18RForM13mp19RForpUC118/119Materials高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!TaKaRaMutanBEST高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!材料與方法導(dǎo)入變異用PrimerE.coliJM109CompetentcellMaterials高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!TaKaRaMutanBESTKit使用實(shí)例5′GAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTG3′3′CTTAAGCTCGAGCCATGGGCCCCTAGGAGATCTCAGCTGGAC5′pUC118引入點(diǎn)變異區(qū)域堿基序列GGATCCTCTAGAGTCGACCTGCTTAAGCTCGAGCCATGGGCCPrimer1Primer2高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!PCRFragment10×BluntingKinationBufferBluntingKinationEnzymeMix.ddH2Oupto2μl1μl20μl0.2-20pmolStepⅡ.BluntingKinationReaction37℃，10min.高效快速的點(diǎn)突變方法共26頁，您現(xiàn)在瀏