華北理工藥物分析課件12喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析

1、第十二章喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析學(xué)習(xí)要求掌握：喹啉類和青蒿素類藥物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和分析測定方法。熟悉：喹啉類和青蒿素類藥物的鑒別試驗、有關(guān)物質(zhì)的特點。了解：喹啉類和青蒿素類藥物的體內(nèi)樣品分析。第一節(jié) 喹啉類藥物的分析第二節(jié) 青蒿素類藥物的分析第一節(jié) 喹啉類藥物的分析 瘧疾是由瘧原蟲引起的一種傳染病，每年全世界死于瘧疾的人數(shù)約 250萬。寄生于人體的瘧原蟲有間日瘧原蟲、惡性瘧原蟲、三日瘧原蟲和卵形瘧原蟲四種，分別引起間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧。在我國以間日瘧和惡性瘧為主，其他兩種少見。瘧原蟲有獨特的生活史，其不同發(fā)育階段在生物學(xué)上存在明顯差異，因而導(dǎo)致對不同抗瘧藥的敏感性不同，因此，必須了

2、解瘧原蟲的生活史及抗瘧藥作用環(huán)節(jié)，以便根據(jù)防治的目的正確選擇藥物。 抗瘧藥(antimalarial drugs)作用于瘧原蟲生活史的不同環(huán)節(jié)，從而抑制或殺滅瘧原蟲。根據(jù)用藥的目的，將抗瘧藥分為三類： 主要用于控制癥狀的抗瘧藥(如磷酸氯喹、硫酸奎寧、磷酸咯萘啶，青蒿素，蒿甲醚，青蒿琥酯，本芴醇等)； 主要用于控制復(fù)發(fā)和傳播的藥物(如磷酸伯氨喹等)； 主要用于病因性預(yù)防的抗瘧藥(如乙胺嘧啶、磺胺類等)。Ross證實蚊子是瘧疾的傳播媒介，為此獲得1902年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1902 直至1880年法國學(xué)者Laveran才

3、發(fā)現(xiàn)瘧疾的病原體是瘧原蟲，為此獲得1907年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎； The Nobel prize in physiology or medicine 1907 喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，環(huán)上雜原子的反應(yīng)性能基本與吡啶相同。 現(xiàn)以本類最常用的典型藥物硫酸奎寧、二鹽酸奎寧、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹，就其鑒別和檢查的有關(guān)問題進(jìn)行討論。一、喹啉類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)硫酸奎寧QuinineSulfate 二鹽酸奎寧QuinineDihydrochloride 磷酸哌喹PiperaquinePhosphate 磷酸氯喹ChloroquinePhosphate 磷酸

4、咯萘啶MalaridinePhosphate 磷酸伯氨喹PrimaquinePhosphate 喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，環(huán)上雜原子的反應(yīng)性能基本與吡啶相同。 喹啉類藥物的物理性質(zhì)、鑒別、檢查及含量測定 藥物名稱物理性質(zhì)鑒別檢查含量硫酸奎寧QuinineSulfate白色細(xì)微的針狀結(jié)晶，輕柔，易壓縮；無臭，味極苦；遇光漸變色；水溶液顯中性反應(yīng)。在三氯甲烷-無水乙醇(2:1)中易溶，在水、乙醇、三氯甲烷或乙醚中微溶。D(0.1mol/L HCl溶液)-237o-244o。1.熒光反應(yīng)2.綠奎寧反應(yīng)3.氯化鋇反應(yīng)4.IR1.酸度2.三氯甲烷-無水乙醇不溶物. 3.其他金雞

5、納堿(TLC). 4.干燥失重. 5.熾灼殘渣非水滴定二鹽酸奎寧QuinineDihydrochloride白色粉末；無臭，味極苦；遇光漸變色；水溶液顯酸性反應(yīng)。在水中極易溶解，在乙醇中溶解，在三氯甲烷中微溶，在乙醚中極微溶解。 D(0.1mol/L HCl溶液)-223o-229o。1.熒光反應(yīng)2.綠奎寧反應(yīng)3. IR 4. 氯化物反應(yīng)1.酸度. 2.硫酸鹽. 3.其他金雞納堿(TLC). 4.干燥失重. 5.熾灼殘渣. 6.鋇鹽非水滴定磷酸哌喹PiperaquinePhosphate類白色至淺黃色的結(jié)晶性粉末；無臭，味微苦；遇光易變色。在水中微溶，在無水乙醇或三氯甲烷幾乎不溶。 1.硫氰酸

6、銨反應(yīng)2.UV3.IR4.磷酸鹽反應(yīng)1.酸度2.有關(guān)物質(zhì)（TLC）3.水分非水滴定(提取后)磷酸氯喹ChloroquinePhosphate白色結(jié)晶性粉末，無臭，味苦。遇光漸變色；水溶液顯酸性反應(yīng)。在水中易溶，在乙醇、三氯甲烷、乙醚中幾乎不溶。1.UV2.IR3.磷酸鹽反應(yīng)1.酸度. 2.溶液的澄清度. 3.有關(guān)物質(zhì)(TLC). 4.干燥失重. 5.重金素. 6.砷鹽非水滴定磷酸咯萘啶MalaridinePhosphate黃色至橙黃色結(jié)晶性粉末；無臭，味苦；具引濕性。 在水中溶解，在乙醇或乙醚中幾乎不溶。1.三硝基苯酚反應(yīng)2.UV3.IR4.磷酸鹽反應(yīng)1.酸度. 2.水中不溶物. 3. 氯化物

7、 4. 甲醛. 5.四氫吡咯. 6. 干燥失重非水滴定(電位法)磷酸伯氨喹PrimaquinePhosphate橙紅色結(jié)晶性粉未，無臭，味苦。在水中溶解，在三氯甲烷或乙醚中不溶。1.硫酸鈰銨反應(yīng)2.UV3.IR4.磷酸鹽反應(yīng)1.酸度. 2.有關(guān)物質(zhì)（TLC）.3.殘留溶劑. 4.干燥失重非水滴定(電位法)(一)典型藥物的結(jié)構(gòu)與物理性質(zhì)(二)主要化學(xué)性質(zhì)堿性 奎寧為二元生物堿，其中奎寧環(huán)上的氮原子的堿性較強(qiáng)(pKa 8.8)，與強(qiáng)酸形成穩(wěn)定的鹽，奎寧和奎尼丁均與二元酸成鹽，如與硫酸成鹽；而喹啉環(huán)上的氮原子堿性較弱(pKa 4.2)，不能與硫酸成鹽。磷酸氯喹和磷酸伯氨喹為三元生物堿；磷酸咯萘啶為五

8、元生物堿；磷酸哌喹為六元生物堿。旋光性 喹啉類抗瘧藥基本都具有手性，硫酸奎寧為左旋體，其比旋度為-237o至-224o；二鹽酸奎尼也為左旋體，其比旋度為-223o至-229o。而磷酸哌喹和磷酸咯萘啶不具有手性。熒光特性 硫酸奎寧和二鹽酸奎尼在稀硫酸溶液中均顯藍(lán)色熒光。紫外吸收光譜特征 由于喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，具有共軛體系，可用紫外吸收光譜的特征鑒別該類藥物。 二、鑒別試驗(一) 綠奎寧反應(yīng)(二) 光譜特征(三) 無機(jī)酸鹽(一) 綠奎寧反應(yīng) 奎寧為6-位含氧喹啉衍生物，可以發(fā)生綠奎寧反應(yīng)(Thalleioquin reaction)。反應(yīng)基本機(jī)制是6-位含氧喹啉，

9、經(jīng)氯水(或溴水)氧化氯化，再以氨水處理縮合，生成綠色的二醌基亞胺的銨鹽。 (一) 綠奎寧反應(yīng) 硫酸奎寧和二鹽酸奎尼的綠奎寧反應(yīng)機(jī)制同上。取其水溶液，加溴試液0.2ml和氨試液1ml，即顯翠綠色，加酸成中性變成藍(lán)色，成酸性時則為紫紅色。翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、三氯甲烷中而不溶于醚。因此ChP2010采用此反應(yīng)鑒別硫酸奎寧和二鹽酸奎尼。 ChP2010硫酸奎寧的綠奎寧反應(yīng)鑒別：取本品約5mg，加水5ml溶解后，加溴試液3滴與氨試液1ml，即顯翠綠色。(二) 光譜特征 1. 紫外吸收光譜特征 由于喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，具有共軛體系，可用紫外吸收光譜的特征鑒別該類藥物。ChP2

10、010采用本法鑒別磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹。(二) 光譜特征 ChP2010磷酸氯喹的UV鑒別：取本品，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中約含10g的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在222nm、257nm、329nm與343nm的波長處有最大吸收。 ChP2010磷酸咯萘啶的UV鑒別：取本品，加磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0)制成每1ml中約含10g的溶液，在260nm與276nm的波長處有最大吸收。 (二) 光譜特征 2. 熒光光譜特征 利用硫酸奎寧和二鹽酸奎寧在稀硫酸溶液中均顯藍(lán)色熒光。 ChP2010硫酸奎寧的熒光鑒別：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取

11、溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。(二) 光譜特征 3. 紅外吸收光譜特征 硫酸奎寧、二鹽酸奎寧、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹在ChP2010中均采用紅外光譜的方法進(jìn)行鑒別。 ChP2010磷酸氯喹的IR鑒別：取本品約0.5g，置分液漏斗中，加水25ml溶解后，加氫氧化鈉試液5ml、乙醚50ml振搖提取，醚層用水洗滌后通過置有無水硫酸鈉的漏斗濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣用五氧化二磷為干燥劑減壓干燥至析出結(jié)晶，其紅外光吸收圖譜應(yīng)與氯喹的對照圖譜一致。(三) 無機(jī)酸鹽 利用硫酸奎寧的硫酸根，顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)進(jìn)行鑒別。 硫酸鹽的鑒別反應(yīng) (1)取供試品溶液，滴加氯化鋇試液

12、，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。(2)取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。(3)取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀(與硫代硫酸鹽區(qū)別)。 二鹽酸奎寧中具有鹽酸根，即顯氯化物的鑒別反應(yīng)進(jìn)行鑒別。 (三) 無機(jī)酸鹽 氯化物的鑒別反應(yīng) (1)取供試品溶液，加稀硝酸使成酸性后,滴加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀復(fù)生成。如供試品為生物堿或其他有機(jī)堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進(jìn)行試驗。(2)取供試品少量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤

13、，緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使用水濕潤的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色。 磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹都具有磷酸根，顯磷酸鹽反應(yīng)進(jìn)行鑒別。 (三) 無機(jī)酸鹽 磷酸鹽的鑒別反應(yīng) (1)取供試品的中性溶液，加硝酸銀試液，即生成淺黃色沉淀；分離，沉淀在氨試液或稀硝酸中均易溶解。(2)取供試品溶液，加氯化銨鎂試液，即生成白色結(jié)晶性沉淀。(3)取供試品溶液，加鉬酸銨試液與硝酸后，加熱即生成黃色沉淀；分離，沉淀能在氨試液中溶解。 三、檢查(一) 硫酸奎寧的檢查 ChP2010 硫酸奎寧進(jìn)行酸度、三氯甲烷-無水乙醇不溶物、其他金雞納堿、干燥失重、熾灼殘渣的檢查。 奎寧主要來源于金雞納樹皮，在提取分離過程中

14、除了得到奎寧外，還得到了奎寧丁、辛可寧和辛可尼定等其他金雞納堿。 硫酸奎寧為白色細(xì)微的針狀結(jié)晶，輕柔，易壓縮；無臭，味極苦；遇光漸變色；水溶液顯中性反應(yīng)。在氯仿-無水乙醇(2:1)的混合液中易溶，在水、乙醇、氯仿或乙醚中微溶。 根據(jù)硫酸奎寧的制備工藝，產(chǎn)品中有關(guān)物質(zhì)主要是生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的中間體以及副反應(yīng)產(chǎn)物。通過檢查酸度、三氯甲烷-乙醇中不溶物質(zhì)和其他金雞納堿等加以控制。三、檢查1. 酸度 主要是在成鹽過程中引入。 檢查法：取本品0.20g，加水20ml溶解后，用酸度計進(jìn)行測定，pH值應(yīng)為5.76.6。2. 三氯甲烷-乙醇中不溶物質(zhì) 本項檢查主要控制藥物在制備過程中引入的醇中不溶性雜質(zhì)或無機(jī)鹽

15、類等。 檢查法： 取本品2.0g，加三氯甲烷-無水乙醇(2:1)混合溶液15ml，在50加熱10分鐘后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過，濾渣用上述混合溶液分5次洗滌，每次10ml，在105干燥至恒重，遺留殘渣不得過2mg。 三、檢查3.其他金雞納堿 本項檢查主要控制硫酸奎寧中的其他生物堿，采用HPLC或TLC中的主成分自身對照法或雜質(zhì)對照品對照法進(jìn)行檢查。 TLC檢查法：取本品，加稀乙醇制成每1ml中約含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加稀乙醇稀釋制成每1ml中約含50g的溶液，作為對照溶液。吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-二乙胺(5:4:1.25

16、)為展開劑，展開后，微熱使展開劑揮散，噴以碘鉑酸鉀試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深。 三、檢查BP7 HPLC檢查法： 金雞納生物堿的HPLC分析系統(tǒng)適用性試驗示意圖1-cinchonine; 2-cinchonidine; 3-dihydrocinchonine; 4-dihydrocinchonidine; 5-quinidine; 6-quinine;7-diydroquinidine; 8-dihydroquinine; 9-epiquinidine; 10-epiquinine三、檢查(二) 磷酸咯萘啶的純度檢查 ChP2010磷酸咯萘啶進(jìn)行酸度、

17、水中不溶物、 氯化物、 甲醛、四氫吡咯、 干燥失重的檢查。 磷酸咯萘啶(瘧乃停)對瘧原蟲紅細(xì)胞內(nèi)期裂殖體有殺滅作用。與氯喹無交叉抗藥性，臨床上用于治療抗氯喹株惡性瘧和搶救腦型瘧等兇險型瘧疾。 磷酸咯萘啶在生產(chǎn)和貯藏過程中引入的有關(guān)物質(zhì)，通過溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)等項目的檢查進(jìn)行控制。 磷酸咯萘啶為黃色至橙黃色結(jié)晶性粉末；無臭，味苦；具引濕性。在水中溶解，在乙醇或乙醚中幾乎不溶。 三、檢查1. 酸度 主要是在成鹽過程中引入。本品水溶液的pH值如小于2.4，刺激性較大。 檢查法 取本品1.0g，加水25ml溶解后，用酸度計進(jìn)行測定，pH值應(yīng)大于2.4。2. 水中不溶物 本品加水溶解后，稍放置

18、即有黃色不溶物產(chǎn)生，影響質(zhì)量。故質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按給藥途徑不同，規(guī)定其不同限量以控制質(zhì)量。 檢查法 取本品2.0g，加水25ml振搖使溶解，放置30分鐘，用置105恒重的4號垂熔玻璃坩堝濾過，沉淀用水15ml分次洗滌，在105干燥4小時，遺留殘渣不得過4mg(供注射用)或7mg(供口服用)。 三、檢查3.氯化物 系生產(chǎn)工藝中帶入。檢查時為了避免溶液顏色的干擾，先加堿使咯萘啶沉淀析出，然后再對濾液進(jìn)行檢查。 檢查法 取本品0.10g，加水4ml使溶解，加20碳酸鈉溶液5ml，搖勻，使沉淀完全，用5號垂熔玻璃漏斗濾過，容器用水15ml分次洗滌、濾過，合并濾液，加水使成25ml，依氯化物法檢查，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉

19、溶液3.0ml制成的對照液比較，不得更濃(0.03)。 三、檢查4. 甲醛 在合成磷酸咯萘啶的反應(yīng)中使用了甲醛進(jìn)行縮合，甲醛具有毒性，應(yīng)對產(chǎn)品中可能剩余的甲醛進(jìn)行檢查。 檢查法 取本品50.0mg，加水2ml使溶解，加5%碳酸鈉溶液4ml，攪勻，濾過，濾液加硫酸溶液(12)3ml，冷卻后加品紅亞硫酸試液5ml，在2030保溫30分鐘，如顯色，與新制的甲醛溶液(每1ml含甲醛0.10mg的水溶液)1.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深(0.2%)。5. 四氫吡咯 在合成磷酸咯萘啶的反應(yīng)中使用了四氫吡咯進(jìn)行縮合，四氫吡咯具有毒性，應(yīng)對產(chǎn)品中可能剩余的四氫吡咯進(jìn)行檢查。 檢查法 取本品10m

20、g，加水2ml溶解后，加5碳酸鈉溶液2ml，攪拌，濾過，濾液加新制的亞硝基鐵氰化鈉乙醛試液1ml，搖勻，5分鐘內(nèi)不得顯藍(lán)紫色。 四、含量測定(一)硫酸奎寧的含量測定 硫酸奎寧具有生物堿的性質(zhì)，很難在水溶液中用酸直接滴定。而在非水酸性介質(zhì)中，堿性顯著增強(qiáng)，即可以在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示劑或電位法確定終點。 由于硫酸為二元酸，在水溶液中能進(jìn)行二級解離，但在冰醋酸介質(zhì)中，只能解離為HSO4，所以生物堿的硫酸鹽在冰醋酸中只能滴定至硫酸氫鹽。 (BH+)2SO42- +HClO4 BH+ClO4- +BH+HSO4 測定時還應(yīng)注意生物堿分子結(jié)構(gòu)中氮原子堿性的強(qiáng)弱，正確判

21、斷反應(yīng)的摩爾比，以準(zhǔn)確計算結(jié)果。四、含量測定 ChP2010硫酸奎寧的含量測定法：取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml與結(jié)晶紫指示液12滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于24.90mg的(C20H24N2O2)2H2SO4。 奎寧為二元堿，喹核氮可與硫酸成鹽，喹啉環(huán)氮不與硫酸成鹽，但在冰醋酸介質(zhì)中用高氯酸滴定時，卻能與高氯酸成鹽。即： 因此，1 mol硫酸奎寧消耗3 mol高氯酸滴定液。即1 mol奎寧可以結(jié)合4 mol質(zhì)子，其中1 mol質(zhì)子是硫酸提供的，其它3 m

22、ol質(zhì)子是由高氯酸提供的。USP與本法相同。四、含量測定 ChP2010 硫酸奎寧片的含量測定法：取本品20片，除去包衣后，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g)，置分液漏斗中。加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加三氯甲烷50ml，振搖10分鐘，靜置，分取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5mL與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于19.75mg的 (C20H24N2O2)2H2SO4 2H2O。 測定中1m

23、ol硫酸奎寧可轉(zhuǎn)化為2mol奎寧，每1mol奎寧消耗2mol高氯酸，故1mol硫酸奎寧消耗4mol高氯酸。反應(yīng)式為：四、含量測定反應(yīng)式為： 顯然其片劑分析與原料藥有所不同。另外還應(yīng)注意考察共存物的干擾，片劑中如有較多輔料，如硬脂酸鹽、苯甲酸鹽等，也消耗高氯酸滴定液，故應(yīng)先用強(qiáng)堿溶液堿化，使之游離，經(jīng)三氯甲烷提取分離后，再用高氯酸滴定液滴定。 USP34硫酸奎寧片含量的HPLC測定法 四、含量測定(二)磷酸氯喹制劑的含量測定 磷酸氯喹對瘧原蟲紅細(xì)胞內(nèi)期裂殖體起作用，可能系干擾了瘧原蟲裂殖體DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄過程或阻礙了其內(nèi)吞作用，從而使蟲體由于缺乏氨基酸而死亡。 用于治療對氯喹敏感的惡性瘧、間日

24、瘧及三日瘧。并可用于瘧疾癥狀的抑制性預(yù)防。也可用于治療腸外阿米巴病、結(jié)締組織病、光敏感性疾病(如日曬紅斑)等。磷酸氯喹用非水酸堿滴定，但制劑中由于含有輔料，所采用的含量測定方法不同。 四、含量測定 ChP2010中磷酸氯喹片的含量的紫外-可見分光光度測定法：取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于磷酸氯喹0.13g)，置200ml量瓶中，加0.lmol/L鹽酸溶液適量，充分振搖使磷酸氯喹溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置100ml量瓶中，用0.lmol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，在343nm的波長處測定吸光度；另取磷酸氯喹對照品適量，精密稱定，加0.lmol/

25、L鹽酸溶液溶解并定是稀釋制成每lml中約含13g的溶液，同法測定，計算，即得。 本品含磷酸氯喹(C18H26ClN32H3PO4)應(yīng)為標(biāo)示量的93.0%107.0%。四、含量測定 ChP2010中磷酸氯喹注射液(本品含磷酸氯喹的滅菌水溶液。含磷酸氯喹(C18H26ClN32H3PO4)應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%105.0%。)的含量的提取酸量測定法：精密量取本品適量(約相當(dāng)于磷酸氯喹0.3g)，用水稀釋至30ml，加20%氫氧化鈉溶液3ml，搖勻，用乙醚提取4次，每次20ml，合并乙醚液，用10ml水洗滌，水洗滌液再用15ml乙醚提取1次，合并前后兩次的乙醚液，蒸發(fā)至近23ml時，精密加鹽酸滴定液

26、(0.lmol/L)25ml，溫?zé)嵴羧ヒ颐巡⑹箽堅芙?，冷卻，加溴甲酚綠指示液數(shù)滴，用氫氧化鈉滴定液(0.lmol/L)滴定。每lml鹽酸滴定液(0.lmol/L)相當(dāng)于25.79mg C18H26ClN32H3PO4 。 USP 采用提取后HPLC測定磷酸氯喹注射液的含量。 第二節(jié) 青蒿素類藥物的分析(3R,5aS,6R,8aS,9R,12S,12aR)-八氫-3,6,9-三甲基-3,12-氧橋-12H-吡喃并4,3-j-1,2-苯并二塞平-10(3H)-酮 青蒿素(artemisinin)又名黃蒿素，是我國學(xué)者從從菊科植物黃花蒿(artemisia annua L.)中提取分離得到的一個含

27、過氧基團(tuán)的新型倍半萜內(nèi)酯。青蒿素是一種高效、速效、低毒的新型抗瘧藥。本品為脂溶性，易透過血腦屏障。在體內(nèi)代謝很快，排泄也快，有效血藥濃度維持時間短。主要用于耐氯喹的惡性瘧，包括腦型瘧的搶救。因有效血藥濃度維持時間短，殺滅瘧疾原蟲不徹底，復(fù)燃率高達(dá)30%，與伯氨喹合用，可使復(fù)燃率降至10%。1986年中醫(yī)研究院研制的青蒿素抗瘧藥獲得我國實施新藥審批辦法以來的第1個新藥證書。但是，由于當(dāng)時中國還沒有專利法，所以，我國沒有申請發(fā)明專利。 青蒿素的多種衍生物均是治療瘧疾的有效單體，國內(nèi)外公認(rèn)的首創(chuàng)新藥。將青蒿素結(jié)構(gòu)中C-10位羰基還原成羥基得到雙氫青蒿素(dihydroartemisinin)，進(jìn)一步

28、烷氧基化得到蒿甲醚(artemether)，而進(jìn)行酯化可得到青蒿琥酯(artesunate)。隨著對青蒿素類藥物藥理作用研究的不斷深入，證實其具有抗瘧、抗孕、抗纖維化、抗血吸蟲、抗弓形蟲、抗心律失常和腫瘤細(xì)胞毒性等作用。 蒿甲醚是青蒿素的脂溶性衍生物，而青蒿琥酯是青蒿素的水溶性衍生物，后者可經(jīng)口、靜脈、肌肉、直腸等多種途徑給藥。兩藥抗瘧作用及作用機(jī)制同青蒿素，能殺滅紅細(xì)胞內(nèi)期的裂殖體。具有速效、高效、低毒等特點?？捎糜谀吐揉瓙盒辕懙闹委熞约拔Ｖ夭±膿尵?。雙氫青蒿素是青蒿素經(jīng)還原制得同時也是青蒿琥酯的體內(nèi)活性代謝物。1990年，為了控制瘧疾對青蒿素的耐藥性，世界衛(wèi)生組織建議在治療中必須將青蒿素

29、同別的抗瘧藥聯(lián)合使用。2007年5月，在瑞士日內(nèi)瓦舉行的第60屆世界衛(wèi)生大會上，世界衛(wèi)生組織聲明，單方青蒿素會引發(fā)耐藥性，建議在全球范圍內(nèi)推廣復(fù)方類抗瘧藥。 一、青蒿素類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)青蒿素Artemisine 雙氫青蒿素Dihydroartemisinin 青蒿琥酯Artesunate 蒿甲醚Artemether 將青蒿素結(jié)構(gòu)中C-10位羰基還原成羥基得到雙氫青蒿素(dihydroartemisinin)，進(jìn)一步烷氧基化得到蒿甲醚(artemether)，而進(jìn)行酯化可得到青蒿琥酯(artesunate)。藥物名稱物理性質(zhì)鑒別檢查含量青蒿素Artemisine無色針狀結(jié)晶，味苦。在丙

30、酮、乙酸乙酯、三氯甲烷中易溶，在甲醇、乙醇、稀乙醇、乙醚及石油醚中溶解，在水中幾乎不溶；在冰醋酸中易溶。熔點為150153D(無水乙醇) +75o+78o。1.碘化鉀試液-淀粉2.羥肟酸鐵反應(yīng)3.HPLC4.IR1.有關(guān)物質(zhì)(TLC)2.干燥失重HPLC法雙氫青蒿素Dihydroartemisinin白色針狀結(jié)晶；無臭，味苦。在三氯甲烷中易溶，在丙酮中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，在水中幾乎不溶。熔點為145150，熔融時同時分解。1.碘化鉀試液-淀粉2.香草醛硫酸反應(yīng)3.旋光4.IR 1.有關(guān)物質(zhì)(TLC)2.干燥失重3.水分4.熾灼殘渣5.重金素HPLC法青蒿琥酯Artesunate白色結(jié)晶性

31、粉末；無臭，幾乎無味。在乙醇、丙酮或三氯甲烷中易溶，在水中極微溶解。熔點為131136(口服用)或132137(注射用)D(二氯甲烷) +4.5o+6.5o。1.香草醛硫酸反應(yīng)2.羥肟酸鐵反應(yīng)3.HPLC4.IR 1.酸度2.溶液的澄清度3.氯化物4.有關(guān)物質(zhì)(HPLC)5.水分 6.熾灼殘渣7.重金素HPLC法蒿甲醚Artemether白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭；味微苦。在丙酮或三氯甲烷中極易溶解，在乙醇或乙酸乙酯中易溶，在水中幾乎不溶。熔點為8690。D(無水乙醇) +168o+173o。1.碘化鉀試液-淀粉2.香草醛硫酸反應(yīng)3.HPLC4.IR1.氯化物2.有關(guān)物質(zhì)(TLC)3.殘留溶劑

32、(GC)4.干燥失重5.熾灼殘渣HPLC法青蒿素類藥物的物理性質(zhì)、鑒別、檢查及含量測定 (一)典型藥物的結(jié)構(gòu)與物理性質(zhì) (二)主要化學(xué)性質(zhì) 1.氧化性 由于青蒿素類是具有過氧橋的倍半萜內(nèi)酯類化合物，這類化合物具有氧化性。 2.旋光性 青蒿素類藥物都均有旋光性，均為右旋體藥物。青蒿素其比旋度為 +75o+78o。蒿甲醚其比旋度為+168o+173o。 3.水解反應(yīng) 青蒿素結(jié)構(gòu)中由于有內(nèi)酯，在堿性條件下，發(fā)生水解，但其他藥物由于母核中沒有內(nèi)酯，沒法發(fā)生水解。 4. UV吸收特性 由于青蒿素類藥物分子結(jié)構(gòu)中母核，不具有共軛體系，其紫外吸收光譜的主要是末端吸收。但C-10由于取代基的不同具有一定吸收特

33、征。 二、鑒別試驗(一)、呈色反應(yīng)(二)、吸收光譜特征(三)、色譜法(一) 呈色反應(yīng) 1. 碘化鉀試液-淀粉反應(yīng)(過氧橋的氧化反應(yīng)) 由于青蒿素類是具有過氧橋的倍半萜內(nèi)酯類化合物，這類化合物具有氧化性。在酸性條件能將I-氧化成I2與淀粉指示液，生成藍(lán)紫色。 ChP2010青蒿素的鑒別：取本品約5mg，加無水乙醇0.5ml溶解后，加碘化鉀試液0.4ml，稀硫酸2.5ml與淀粉指示液4滴，立即呈紫色。 ChP2010雙氫青蒿素片的鑒別：取本品的細(xì)粉適量(約相當(dāng)于雙氫青蒿素20mg)，加無水乙醇2ml使雙氫青蒿素溶解，濾過，濾液中加碘化鉀試液2ml與稀硫酸4ml，搖勻，加淀粉指示液數(shù)滴，溶液即顯藍(lán)紫

34、色。 (一) 呈色反應(yīng) 2.羥肟酸鐵反應(yīng) 含有內(nèi)酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯類化合物在堿性條件與羥胺作用，生成羥肟酸；在稀酸中與高鐵離子呈色。ChP2010收載了青蒿素和青蒿琥酯的羥肟酸鐵鑒別反應(yīng)。 ChP2010青蒿素的鑒別：取本品約5mg，加無水乙醇0.5ml溶解后，加鹽酸羥胺試液0.5ml與氫氧化鈉試液0.25ml，置水浴中微沸，放冷后，加鹽酸2滴和三氯化鐵試液1滴，立即顯深紫紅色。 ChP2010青蒿琥酯的鑒別：取本品約50mg，加含7鹽酸羥胺的乙醇溶液(80100)1ml，再加乙醇制氫氧化鉀試液3ml，置水浴中加熱至沸，放冷，加稀鹽酸至呈酸性，再加三氯化鐵試液l滴，即顯紫紅色。 (

35、一) 呈色反應(yīng) 3.香草醛-硫酸反應(yīng) 香草醛硫酸溶液又稱硫酸香蘭素顯色劑，很多的物質(zhì)如有機(jī)酸、揮發(fā)油、甾醇、萜類等都可以顯色。 硫酸香草醛溶液顯色原理是使羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合等反應(yīng)生成共軛雙鍵系統(tǒng)，又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色。是一種通用顯色劑。 ChP2010青蒿琥酯的鑒別：取本品約50mg，加三氯甲烷1ml溶解后，取34滴置白瓷板上，待三氯甲烷揮發(fā)后，加2香草醛硫酸溶液1滴，顯紅色。(二)、吸收光譜特征 1. 紅外吸收光譜特征 青蒿素類抗瘧原料藥在ChP2010中均采用紅外光譜的方法進(jìn)行鑒別。要求所得的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜一致。但是制劑的紅外光吸收圖

36、譜鑒別須經(jīng)提取分離，殘渣干燥后，進(jìn)行紅外光吸收圖譜與對照的圖譜比較。 ChP2010青蒿琥酯片的鑒別：取本品的細(xì)粉適量(約相當(dāng)于青蒿琥酯0.1g)，加15ml丙酮振搖使溶解，濾過，濾液揮干，殘渣用硅膠為干燥劑減壓干燥。殘渣的紅外光吸收圖譜應(yīng)與青蒿琥酯的對照圖譜一致。 (二)、吸收光譜特征 2. 紫外吸收光譜特征 由于青蒿素類藥物分子結(jié)構(gòu)中母核，不具有共軛體系，其紫外吸收光譜的主要是末端吸收。但C-10由于取代基的不同具有一定吸收特征。ChP2010均未采用本法鑒別所收載青蒿素類藥物。 (三)、色譜法 利用比較供試品溶液主峰與對照品溶液主峰的保留時間(tR)是否一致或比較供試品溶液所顯主斑點的位

37、置和顏色與對照品溶液主斑點的位置和顏色是否相同進(jìn)行鑒別。HPLC法一般都規(guī)定在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致。青蒿素類抗瘧原料藥在ChP2010中均采用HPLC的方法進(jìn)行鑒別。但制劑中也有采用TLC法進(jìn)行鑒別。(三)、色譜法 ChP2010雙氫青蒿素片的鑒別：取本品的細(xì)粉適量(約相當(dāng)于雙氫青蒿素20mg)，加二氯甲烷10ml，振搖，使雙氫青蒿素溶解，濾過，濾液蒸發(fā)至約2ml，作為供試品溶液；另取雙氫青蒿素對照品，加二氯甲烷制成每1ml中含10mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各10L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-冰醋

38、酸(90:10:2)為展開劑，展開，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應(yīng)與對照品溶液的主斑點一致。三、檢查 目前青蒿素的制備仍以天然藥材分離提取為主，并用于其衍生藥物的生產(chǎn)，所以藥品中通常都存在結(jié)構(gòu)類似的有關(guān)物質(zhì)。主要通過TLC和HPLC進(jìn)行檢查控制。 三、檢查 ChP2010青蒿素有關(guān)物質(zhì)的TLC檢查：取本品適量，加丙酮溶解制成每1ml中含15mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液0.5ml，置100ml量瓶中，加丙酮稀釋至刻度，作為對照溶液(1)；精密量取對照溶液(1)5ml，置10ml量瓶中，加丙酮稀釋至刻度，作為對照溶液(2)；另取青蒿素對照品和雙氫青蒿素對照品，加丙酮溶解并釋稀制成每1ml 中含青蒿素10mg和雙氫青蒿素0.1mg的混合溶液，作為對照品溶液。吸取上述四種溶液各10l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(沸程609