大氣中苯并檢出方法檢出限#

1、大氣中苯并 (a 芘的測定方法苯并 a芘是多環(huán)芳香烴類化合物，又名 3，4苯并芘，簡稱 Bap，分子式 C20H12；分子量 253.23 ；沸點 475；熔點 179；相對密度 1.351 。3，4苯并 芘純品為無色或微黃色針狀結(jié)晶，在水中溶解度較小，易溶于苯、氯仿、乙 醚、丙酮、環(huán)己烷、二甲苯等有機溶劑。在苯中溶解呈藍色或紫色熒光，在濃 硫酸中呈桔紅色并伴有綠色熒光。 3，4苯并芘是環(huán)境中普遍存在的對動物致 癌性很強的一種物質(zhì)，主要是含碳燃料及有機物熱解過程中的產(chǎn)物。煤炭、石 油等在無氧加熱裂解過程中產(chǎn)生的烷烴、烯烴，經(jīng)過脫氫、聚合，?？僧a(chǎn)生一 定數(shù)量的 3，4苯并芘。工廠煙氣中的懸浮顆粒

2、物上吸附有 3，4苯并芘，散 布在大氣，一部分降落到水面和陸地上，從而污染水源和土壤。煉焦、化工、 染料等工廠排出的工業(yè)廢水中以及熏制食品、香煙煙霧中均含有3，4苯并芘。3，4苯并芘對動物具有局部和全身的致癌作用，對猴子反復(fù)皮下注射可在局 部形成腫瘤，從氣管反復(fù)滴注可形成肺癌，在小鼠身上涂抹可使小鼠誘發(fā)皮膚 癌。流行病學(xué)調(diào)查認為人的肺癌與環(huán)境中 3，4苯并芘的含量之間有著極為密 切關(guān)系。雖然目前各國尚無公認 3，4苯并芘的最高容許濃度，但通過動物實 驗和現(xiàn)場調(diào)查提出了一些建議，例如：車間空氣中 3，4苯并芘最高容許濃度為 0.14 g/m3； 居民區(qū)大氣最高容許濃度為 103g/m3。 飄塵上

3、有機物的組分異常復(fù)雜，僅其中多環(huán)芳烴 (簡稱 PAH就有幾百種之多。 測定 3，4苯并芘的方法很多，主要是將 3， 4苯并芘與其他多環(huán)芳烴分開， 常用的有柱層、紙層、薄層、氣相色譜、高壓液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)機等一系列分 離體系。其中以氣相色譜法分離 PAH尤為重要。 利用氣相色譜法分離迅速、效能高，再與薄層層析結(jié)合起來，可以迅速判斷提 取物中某些 PAH的存在。特別是用毛細管色譜與質(zhì)譜及核磁共振譜聯(lián)用，從城 市懸浮顆粒物、煙草焦油及汽車廢氣中，可分離出 100多種 PAH，極大地發(fā)揮 了氣相色譜的分離效能。用高壓液相色譜法分離 PAH比氣相色譜法具有以下優(yōu)點：工作溫度低 ( 80 對被分離的各組分

4、可以完整地收集起來，再進一步的用紫外或熒光光譜分析。 色譜柱是十八烷基硅烷 (ODS化學(xué)鍵為固定相。被檢樣品在注入分離柱前，最好 先經(jīng)過薄層作初步分離，除去其中混雜的烷烴、烯烴、雜環(huán)等化合物，以減輕 分離柱的負擔(dān)，此種方法可以和薄層層析聯(lián)用，是一種快速鑒定PAH較好的方法。柱層、紙層和薄層層析法，所需設(shè)備簡單、操作容易，易于掌握和推廣。但 是，柱層析法和紙層析法所需時間長，分離效果較差，無法排除PAH異構(gòu)體之間的干擾，使之不能精確定量。為了改進分離效果，可以先經(jīng)過柱層析，再在 乙?；埳线M行分離。乙?；w維素薄層分離同分異構(gòu)體效果較其他薄層為 好。采用兩種吸附劑 ( 如氧化鋁和 40%乙酸的乙

5、?；w維素 混合制板，進行雙 向展開，第一向用正烷苯 (9 1，第二向用甲醇乙醚水 (441。這時 可以將干擾 3，4苯并芘的幾種干擾物分離，進行幾種主要 PAH的定量測定。 一、高效液相色譜法 1( 一 原理 空氣中顆粒物中的多環(huán)芳烴被采集在玻璃纖維濾紙上，經(jīng)索氏提取或真空升華/ 13后，用高效液相色譜分離測定，以保留時間定性，峰高或峰面積定量 ( 二 儀器見圖610。(1大流量采樣器見第十二章第一節(jié)總懸浮顆粒物大流量采樣稱量法。 (2 索氏提取器容量 60ml (3 升華管見圖 69。(4真空升華裝置(5 濃縮器及濃縮瓶 見圖 6-11(6微量注射器 10l 、20l ，刻度應(yīng)校正。(7

6、離心機 4000rpm。(8離心管 5ml ，刻度應(yīng)校正。(9 高效液相色譜儀 附熒光檢測器或紫外檢測器。( 三 試劑(1玻璃纖維濾紙規(guī)格見第十二章第一節(jié)總懸浮顆粒物。濾紙需作預(yù)處理，方法 是將濾紙不重疊地放在高溫爐中，經(jīng) 500灼燒 30min，保存?zhèn)溆谩?2 色譜柱 內(nèi)徑 4mm，長 20cm不銹鋼柱，內(nèi)裝 YWGCH型微粒硅膠粒子 (10 m，塔板數(shù)為 30000/m，柱壓不超過 5MPa。(3 苯 重蒸餾。/ 13(4 甲醇 重蒸餾。(5 環(huán)己烷 重蒸餾。(6堿性氧化鋁 200 300 目。(7標準溶液 取一個 10ml 棕色容量瓶，準確稱量，然后小心加入約 10mg苯并 a芘 ，再準

7、確稱量，兩次稱量之差即為苯并 a芘質(zhì)量。加苯溶解并稀釋 至刻度，計算每毫升溶液中苯并 a芘的含量。然后再用甲醇稀釋成 1.00ml 含 100g 苯并 a芘的貯備液。臨用時，用甲醇稀釋成 1.00ml 含 2g 苯并 a芘的標準溶液。貯于棕色容量瓶中，置冰箱中保存。( 四 采樣 采樣方法同第十二章第一節(jié)中“總懸浮顆粒物大流量采樣重量法” ( 五 分析步驟液相色譜儀測試條件 分析時，應(yīng)根據(jù)液相色譜儀的型號和性能制定能測定苯并a芘的最佳測試條件。柱溫：室溫。流動相： (3 1甲醇水。流動相溫度： 40。流量： 1ml/min 。柱壓： 4MPa。 檢測器：紫外檢測器波長 254nm。 熒光檢測器激

8、發(fā)波長 365nm。 熒光檢測器發(fā)射波長 405nm。繪制標準曲線和測定校正因子 在作樣品測定的同時，繪制標準曲線或測定校正因子。(1繪制標準曲線將液相色譜儀調(diào)至最佳測試條件，如用紫外檢測器，可用微量 注射器分別吸量 1.00ml 含 100g 苯并 a芘標準溶液 5、10、15、20l 注 入色譜儀；如用熒光檢測器，可用微量注射器分別吸量 1.00m1含 2g苯并 a芘標準溶液 2、4、6、8、10l 注入色譜儀，得苯并 a芘的色譜峰和 保留時間。另取試劑空白溶液作零濃度點的測定，每個濃度重復(fù)三次測定，得 峰面積或峰高的平均值。以苯并 a芘的含量 (ng 為橫坐標，峰面積 (mm2或 峰高(

9、mm為縱坐標，繪制標準曲線，并計算回歸線的斜率。以斜率倒數(shù)作為樣 品測定的計算因子 Bs(ng/mm2或 ng/mm。(2測定校正因子在測定的線性范圍內(nèi)，可用單點校正法求校正因子。在樣品測 定同時，取試劑空白溶液和與樣品提取溶液苯并 a芘濃度相接近的標準溶 液，按液相色譜的最佳測試條件進行測定，得苯并 a芘的色譜峰和保留時 間。重復(fù)做三次，得峰面積或峰高的平均值。用下列公式計算校正因子：式中 f 校正因子， ng/mm2或 ng/mm； cs標準溶液中苯并 a芘含量， ng； As標準溶液平均峰面積或峰高， mm2或 mm； A0試劑空白溶液平均峰面積或峰高 mm2或 mm。樣品測定(1 樣品

10、提取 用索氏提取法或真空升華法。 索氏連續(xù)提取法：采樣后，取/ 1380 100cm2的玻璃纖維濾紙，折疊后放進索氏提取器，加 40ml 環(huán)己烷，于沸水 浴中連續(xù)提取 8h(每小時回流次數(shù)不少于 10 次。將提取液移至濃縮器中，在 7080水浴上減壓濃縮至 0.5 1.0ml( 不可蒸干 。將濃縮液轉(zhuǎn)移至 5ml 離心 管內(nèi)，用少量環(huán)已烷洗滌濃縮瓶，合并于離心管內(nèi)，使總體積控制在 1.0ml 。 加入 0.5g 堿性氧化鋁，搖勻，離心 5min，取上清液待測。 真空升華提取法：采樣后，取 80100cm2 的玻璃纖維濾紙，卷成筒狀，放入 升華管內(nèi)。勿使濾紙折疊或堵塞管口，旋緊磨口。接口處用少量

11、石膏漿密封， 石膏固化后，將升華管放在管狀電爐內(nèi)，連接氣路和真空泵，將管內(nèi)抽成真 空， 35min 后，轉(zhuǎn)動三通活塞 4，向管內(nèi)充氮氣，再抽真空、再充氮氣，如此 重復(fù)三次，以除去管內(nèi)殘留的空氣。同時，將管狀爐升溫至 300，升華 40min。此時，可看到黃色的油狀物凝集在升華管的毛細管內(nèi)壁上，為防止升華 物被抽走，可在毛細管一端外壁放一小塊紗布，裹以冰塊冷卻。待管狀電爐溫 度下降至室溫后，轉(zhuǎn)動三通活塞，使內(nèi)外氣壓平衡，關(guān)閉真空泵 ( 避免真空泵的 油進入管道和真空規(guī)中 。取下升華管，旋開磨口，將毛細管的大口朝上，垂直 地固定在鐵架上。用 100 l 注射器吸取甲醇，注入毛細管內(nèi)壁，必要時可用金

12、 屬絲摩擦管壁，幫助溶解，如此重復(fù)多次沖洗內(nèi)壁，沖洗液收集于濃縮管中， 將洗脫液濃縮至 0.1 0.5ml ，即為待測樣品。(2樣品分析在液相色譜儀的最佳測試條件下，取 120l 樣品提取液 ( 根據(jù)濃 度大小決定進樣量 注入色譜儀，得色譜峰，以保留時間確認苯并 a芘峰， 測定峰面積 (mm2或峰高 (mm，重復(fù)做三次，得峰面積或峰高的平均值。 在樣品測定的同時，取同樣規(guī)格及大小的未采樣濾紙，按相同的操作步驟作試 劑空白測定。( 六 計算1. 用繪制標準曲線法式中 c空氣中苯并 a芘濃度， g/100m3； A樣品溶液峰面積或峰高， mm2或 mm； A0試劑空白溶液峰面積或峰高， mm2或

13、mm； Bs用標準溶液繪制標準曲線得到的計算因子， ng/mm2或 ng/mm； V1樣品提取溶液的總體積， ml；式中 f 用單點校正法得到的校正因子，ng/mm2或 ng/mm；V2注入色譜儀中樣品溶液的體積，ml；S1濾紙總過濾面積， cm2；S2分析時所取濾紙的過濾面積，2 cm；Es由實驗室確定的苯并 a芘平均提取效率；V0換算成標準狀況下的采樣體積，3m。2. 用單點校正法其他符號與上式相同 ( 七 說明(1檢出限和測定范圍本法檢出限 0.1ng( 熒光檢測器、10ng(紫外檢測器 。用 熒光檢測器測定范圍為 0.2 20ng苯并 a芘。如采樣體積為 1440m3，取 1/5 濾紙

14、樣品，制成溶液總體積為 1ml，進樣量為 10l ，則可測濃度范圍為/ 1330.007 0.7 g/100m3。(2精密度對濃度為 0.17 17mg/L的溶液重復(fù)測定的相對標準差為 9.5% 3.1%。(3干擾與排除樣品經(jīng)過預(yù)處理以及色譜柱分離，消除了大部分有機物的干擾。(4 真空升華法和連續(xù)提取法各具優(yōu)缺點。前法操作簡單、快速、節(jié)省溶劑，可 同時提取一組樣品，但需要有一定的設(shè)備和條件，后法不需要特殊儀器設(shè)備， 方法簡單，提取效率高，易推廣；缺點是使用溶劑多，需要增加濃縮這一步 驟，提取時間太長。實驗證明，這兩種方法提取顆粒物中苯并 a芘的回收率 都很高，加入 5g 苯并 a芘，真空升華法

15、回收率為 95%100%，索氏提取 法為 96% 108%。(53 ，4苯并芘是致癌性物質(zhì)，操作人員要特別注意防護，防止污染。接觸 3，4苯并芘溶液時，要帶醫(yī)用橡膠手套，并在專用實驗臺上操作，標準溶液 要注意保管。測定后的 3， 4苯并芘廢液應(yīng)集中起來，統(tǒng)一處理。所用過的玻 璃儀器，必須用鉻酸鉀硫酸洗液浸泡 4h 以上，最好浸泡過夜后用水洗凈。 (6色譜條件的選擇流動相：用甲醇和水調(diào)節(jié)其不同比例，在每種比例下，變化流量，固定柱 溫，用萘、聯(lián)苯、菲、蒽混合樣品測量在各種條件下的保留值、柱效和蒽菲的 分離度，結(jié)果見表 610。表 610 流動相極性、流量變化對多環(huán)芳烴保留值、柱效和分離度 (菲、蒽

16、 的影響續(xù)表/ 13流動相甲醇和水的比例影響分離組分的保留值、柱效和分離度。如增加甲醇，保留時間減少，柱效和分離度發(fā)生變化，這主要是由流動相極性變化所引起 的。另外，流量對保留時間、柱效和分離度也有影響，如流量變大，則保留時 間減小，柱效降低，分離度下降。因此，對于甲醇和水的比例以及流量均須嚴 格控制恒定。柱溫：提高柱溫能縮短保留時間、增加塔板數(shù) （見表 611，這是因為溫度 增高，溶劑粘度減少，增加了溶劑在固定相中的滲透性，所以加快了分離；但 溫度過高，對低沸點溶劑 （如甲醇 易形成氣泡析出，影響結(jié)果。表 6 11 柱溫對保留值、柱效和分離度影響（7標準和空氣樣品的色譜圖/ 13標準和空氣樣

17、品的色譜圖示于圖 612、圖 613、圖 614，空氣樣品測量結(jié)果列于表 6 12表 612 大氣飄塵中多環(huán)芳烴含量 (ng/m 3/ 13從色譜圖上看到，二個環(huán)的僅知道萘和聯(lián)苯，三個環(huán)的有蒽、菲二個峰，這在 氣相譜不易分開，而用液體色譜是可以分開的。四個環(huán)的芘和熒蒽基本能分 開， 和苯并 a蒽是難分離的異構(gòu)體，此法雖能分開，但不理想。五個環(huán)的 有苯并 e芘、苯并 a芘和苝是能分開的。儀器型號用北京分析儀器廠生產(chǎn)的 SY01型高壓液體色譜儀 UV254 檢測器得到 多環(huán)芳烴標準曲線如圖 6 15。二、紙層析熒光分光光度法 1( 一 原理 采集在玻璃纖維濾紙上顆粒物中的多環(huán)芳烴，經(jīng)索氏提取或真空

18、升華后，用苯 洗脫濃縮，經(jīng)乙酰化濾紙層析分離，分離出的苯并 a芘在紫外光照射下呈藍 紫色熒光斑點，用苯洗脫或斑點直接掃描，用熒光分光光度法定量。( 二 儀器(1層析缸 5L 。(2紫外燈 附 365 或 254nm濾光片。(3具塞比色管 10ml ，刻度需校正。(4 熒光分光光度計 用 10mm石英比色皿，在激發(fā)波長 385nm和發(fā)射波長 400 410nm下測定熒光強度或附薄層掃描裝置，用于熒光斑點直接掃描測定熒光強 度。其他儀器 同一法(415 頁。( 三 試劑(1玻璃纖維濾紙 同一法(415 頁。(2 苯 重蒸餾。(3 環(huán)己烷 重蒸餾。(4 二氯甲烷 重蒸餾。(5 無水乙醇 重蒸餾。(6

19、乙?；芤?按150ml苯、50ml乙酸酐和 0.1ml 硫酸的比例混合配制。(7 層析濾紙 新華牌中速層析濾紙。/ 13 (8展開劑 無水乙醇十二氯乙烷，按 (2 1比例(體積比配制。 (9乙酰化濾紙 將層析濾紙裁成長 27cm、寬 15cm。取 20 張卷成圓筒形，逐張 浸入到盛有 2000ml 乙?；芤旱臒?，濾紙圓筒狀中空部分放入一個高 10cm，內(nèi)徑 6cm玻璃管( 防止濾紙在攪拌時被攪破 。將電動攪拌棒置于玻璃柱 中心，在 (50 55下緩慢攪拌 6h，在攪拌浸泡過程中，溶液液面始終保持超 出濾紙 1cm，并在通風(fēng)櫥中進行。然后，靜置浸泡過夜。取出濾紙在通風(fēng)櫥內(nèi) 晾干，再將濾紙

20、逐張放入無水乙醇中浸泡 4h 以上，取出晾至微干，夾入粗濾紙 之間，用玻璃板壓平至干備用。經(jīng)乙?；幚磉^的濾紙，對著光線觀察，質(zhì)地 應(yīng)均勻，透明度一致。如質(zhì)地不均勻，透明度明、暗不一，則不能用于分析。 乙?；癁V紙檢驗方法：在乙酰化濾紙上分別點 3， 4苯并芘、芘、 1， 2苯并 芘溶液和三種物質(zhì)的混合液，用乙醇和二氯甲烷 (2 1為展開劑，展開上升 20cm后，在熒光燈下觀察，三種物質(zhì)均分開， 3，4苯并芘的斑點 Rf 值小于 0.10 ，此濾紙即可供分析使用。(10 標準溶液 貯備液的配制方法同一法，臨用時，用苯稀釋成 1.00ml 含 2g 苯并 芘的標準溶液，貯于棕色容量瓶中，并置冰箱中

21、保存。( 四 采樣 采樣方法同第十二章第一節(jié)中總懸浮顆粒物大流量采樣重量法。( 五 分析步驟樣品提取 同一法(415 頁。紙層析分離 將空氣總懸浮顆粒物樣品的提取液定容后，作為紙層析點樣待測液。 (1 點樣 在乙?；癁V紙一端距底邊 5cm處，用鉛筆輕輕劃一橫線，在橫線上點 6個樣：二個點樣品、二個點標準 (取 10l 標準溶液含 0.02 g 苯并 芘、二個點試劑空白 ( 均為平行雙樣 。各點間隔 2cm。用微量注射器吸量樣品 提取液，根據(jù)苯并 芘濃度點樣 1050l 。在點樣過程中用吹風(fēng)機緩緩 送風(fēng)，促使溶劑揮發(fā)，點樣斑點直徑不應(yīng)超過 5mm，點樣速度應(yīng)緩慢。如需將 全部樣品點樣時，可用玻璃

22、毛細管點樣。溶液點完后，可用少量苯洗滌濃縮 瓶，并將洗滌液全部點在斑點上。按相同操作步驟點標準溶液和試劑空白溶 液。(2 層析 在層析缸中加入適量展開劑，將點完樣的層析濾紙懸掛在層析缸中， 下端浸入展開劑約 5mm，將層析缸用透明膠紙密封并避光，待溶劑前沿上升至 離原點 20cm處，取出濾紙，在通風(fēng)櫥中使展開劑自然晾干。然后在暗室內(nèi)，于 365nm紫外光下觀察層析紙上苯并 芘的亮紫色熒光斑點，并用鉛筆圈出 苯并 芘標準斑點及與其位置相對應(yīng)的樣品斑點和空白斑點。(3 洗脫 用光亮無銹的剪刀分別剪下層析濾紙上苯并 芘標準、樣品和空 白斑點，各放入 5ml 比色管中，各管準確加入 5.00ml 苯，

23、加蓋，于 6070 水浴中，不斷振搖，浸泡 15min，使苯并 芘轉(zhuǎn)移至苯液中。測定(1 洗脫液的熒光分光光度測定 將標準、樣品和空白斑點的苯洗脫上清液分別 倒入 10mm石英比色皿中，在激發(fā)狹縫 10nm，激發(fā)波長 385nm和發(fā)射狹縫 5nm， 發(fā)射波長 400，405和 410nm的條件下，分別測定熒光強度 (mm。(2苯并 芘熒光斑點直接掃描定量用熒光分光光度計的薄層掃描儀時，將/ 13層析紙展開的一面朝下，用透明膠紙將其固定于玻璃板上，放入薄層層析掃描 板框座架上，設(shè)定激發(fā)波長為 385nm、入射狹縫 10nm、入射狹縫 5nm，發(fā)射波 長為 405nm，以標準斑點調(diào)節(jié)儀器的負高壓和

24、記錄器靈敏度，使記錄筆的響應(yīng) 值在 1/2 滿量程處。然后在發(fā)射波長 400、405和 410nm處，對標準，空白和樣 品斑點逐一進行直線或曲線移動掃描，測得每個斑點峰高或峰面積的積分值之 和，即為該斑點的熒光強度 (mm或 mm2。( 六 計算熒光光度法測定洗脫液或斑點直接掃描標準、空白和樣品的相對熒光強度：式中 A相對熒光強度；A405于 405nm發(fā)射波長處測定的熒光強度；A400于 400nm發(fā)射波長處測定的熒光強度；A410于 410nm發(fā)射波長處測定的熒光強度。2. 空氣中苯并芘濃度式中 c空氣中苯并 芘濃度，A樣品斑點相對熒光強度， mm2 或 mm；3 g/100m ；A0試劑

25、空白樣品相對熒光強度， mm2或 mm；As標準樣品相對熒光強度， mm2 或 mm；W標準斑點苯并 芘含量， g；B樣品洗脫定容體積， l ； D點樣時所取洗脫液體積， l ；S1樣品濾紙的總面積， cm2； S2分析時所取樣品濾紙的面積， cm2；Es由實驗確定的苯并 芘的平均提取效率；V0換算成標準狀況下的采樣體積， m3。( 七 說明(1 紙層析法分離熒光光度法測定苯并 芘，具有靈敏度高，操作簡便， 樣品便于保存等優(yōu)點，是目前測定苯并 芘普遍采用的方法之一，檢出限 為 2ng/5ml 。(2精密度和準確度對 0.58 g 苯并 芘重復(fù)測定的相對標準差小于 6%； 對 5g 苯并 芘的加

26、標回收率為 95%108%。(3精確量取 10l 混合樣品提取物各 5 份進行紙層析法和薄層層析法比較，測 定結(jié)果見表 613，從表中結(jié)果可以看出兩種方法測定結(jié)果基本上是一致的。目視觀測紙層分離熒光點分界不清晰，不如薄層法。但制備乙?；癁V紙比較容表 613 兩種分離方法測定飄塵中 3， 4苯并芘的比較三、薄層層析熒光或紫外分光光度法( 一 原理/ 13 采集在玻璃纖維濾紙上顆粒物中的 3，4苯并芘 (Bap，用充氮升華法或連續(xù) 提取法提取，再經(jīng)醋酸纖維素薄層層析法分離，分離出的 Bap 斑點，用苯洗 脫，以熒光分光光度法或紫外分光光度法定量。( 二 儀器(1薄層涂布器。 (2薄層層析儀。(3

27、離心機 4000rpm。(4 玻璃熔封鐵芯轉(zhuǎn)子 長 6mm。(5電熱式磁力攪拌器。(6 其他儀器同二法 (425 頁。( 三 試劑(1玻璃纖維濾紙預(yù)處理同一法 (415 頁，Bap 的空白值不應(yīng)大于 1ng。(2 無水乙醇 重蒸餾。(3 甲醇 重蒸餾。(4 乙醚 重蒸餾。(5 苯 使用前提純，提純方法：在分液漏斗中每次加少量濃硫酸，振搖，至濃 硫酸層無色為止，再加水振搖數(shù)次，洗去硫酸。然后加入無水硫酸鈉脫水，再 蒸餾。(6展開劑 甲醇+乙醚+水 4+4+1(體積比 。(7薄層板 以每塊板 (200200mm平 均需用 4g乙酸纖維素，和 15ml 無水乙醇 的比例調(diào)成糊狀，在涂布器上制板。涂布

28、后，先在室溫下風(fēng)干，再于80干燥箱中活化 30min。然后，放在干燥器內(nèi)，冷卻備用。(8乙酸纖維素 160 250 目，結(jié)合酸的含量為 26%30%。乙酸纖維素制備方 法：量取 682.5ml 乙酸酐、 300ml 苯、7.5ml 水依次放入 2L 燒杯中，混勻。置 于冰水浴中，緩慢加入 10ml 高氯酸，攪勻 (注意防止反應(yīng)劇烈濺出 。然后，在 不斷攪拌下慢慢加入 100g微晶纖維素 (色層用，在通風(fēng)櫥內(nèi)于 3035水浴 中放置 2h，并不斷攪拌，以保證乙?；磻?yīng)充分，并注意觀察溫度，以防溫度 驟增。然后，再倒入大型離心管中，以 4000rpm 速度，離心 35min，除去上 層乙?；瘎┤芤?/p>

29、，沉淀物用無水乙醇洗滌三次，再離心，至 pH6 為止。最后 將乙?；w維素置于通風(fēng)櫥中吹風(fēng)晾干。放置過夜，再放入干燥箱中，于80干燥 1h，取出冷卻后，研磨，過 160 目篩，備用。(93 ，4苯并芘標準溶液同一法 (415 頁，臨用時配制成 1.00ml 含 10gBap 標準溶液。( 四 采樣采樣方法同一法 (415 頁 。( 五 分析步驟1. 樣品提取 同一法(415 頁。薄層分離(1 點樣取活化處理過的薄層板，將三邊各刮去 5mm。在距離底邊 2cm處，以 15cm間隔，用毛細管將樣品液全部 ( 或一部分，視濃度而定 ，在薄層板上作 條狀點樣。斑點不大于 15mm 3mm。用 0.05

30、ml 苯洗管壁，洗液再點樣。如此反 復(fù)，直至洗液無熒光為止。同時，以同樣方法，用微量注射器取10l 苯并芘/ 13 標準溶液 (0.1 g點樣，作為標準對照點。另外一個點不點樣品，作為展開劑 空白點。如用紫外分光光度法測定時，標準對照應(yīng)點 0.5g 苯并芘，并且不留 展開劑空白點。(2層析點樣后薄層板放入薄層層析儀中，加入 15ml 展開劑。待展開劑前沿上 升至 15cm處，取出薄層板，放在通風(fēng)櫥中，讓展開劑自然揮發(fā)，晾干。然后在 暗室內(nèi)，于紫外線燈下觀察薄層板上熒光斑點。用針劃出苯并芘標準斑點和其 相對應(yīng)位置的樣品斑點和空白點。(3洗脫用光亮無銹的小刀仔細刮下標準斑點、樣品斑點和空白點。通過漏斗分 別移入 10ml 比色管中，再加入 5ml 苯，并放入一個玻璃熔封鐵芯轉(zhuǎn)子。將比色 管放在盛水的燒杯中，于電熱磁力攪拌器上加熱 65， 10min，進行洗脫。然 后，在離心機上，以 4000rpm，離心 2min。上清液分別轉(zhuǎn)移于 10ml 比色管中。 再向原比色管中加 5ml 苯，重復(fù)洗脫一次，合并洗脫液，混勻，作為被測樣 品。測定將標準管及樣品管和空白管中洗脫液均用苯定容至 10ml，分別進行熒光或紫外 分光光度法測定，測定步驟同二法 (425 頁。( 六 計算同二法(425 頁。(