疫苗制造基本程序

1、疫苗制造基本程序1項目一 病毒疫苗的制造項目二 細菌性活疫苗制造項目三 細菌性滅活疫苗制造 內(nèi)容2項目一病毒疫苗制造 病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造 病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造 病毒性動物組織疫苗制造 3一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造 受精卵應來自SPF雞群，至少源于未用抗生素藥物的非免疫雞群，以免受母源抗體的干擾和殘留抗生素的影響。 從受精卵入孵開始至培養(yǎng)全過程都應保持無菌，要求一定的溫度和濕度，且需不斷翻動，然后選擇。選擇一定日齡、發(fā)育正常的胚用于接毒培養(yǎng)。 痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和皰疹病毒等一類生物制品，目前仍然利用禽胚特別是雞胚制備，如雞新城疫苗、流感疫苗（禽流感疫苗）、犬瘟熱雞胚弱毒疫苗等。 禽

2、胚疫苗生產(chǎn)的原材料來源方便、質(zhì)量比較容易控制，制造程序簡單，不需要過高的設備條件，生產(chǎn)的疫苗質(zhì)量可靠。（一）雞胚選擇雞胚選擇種毒與毒種繼代接毒與收獲配苗4（二）種毒與毒種繼代 目前適應于雞胚的種毒多系弱毒，包括自然弱毒與人工培育的弱毒兩類。各種制苗用的種毒多數(shù)由國家菌毒種保藏部門或指定單位保存，保存的種毒多為凍干毒。 凍干毒種需按規(guī)定要求在雞胚繼代復壯，通常繼代3代以上，經(jīng)檢定符合標準后方可作力生產(chǎn)疫苗的毒種，毒種檢定內(nèi)容包括無菌檢驗、毒價測定和其他項目的檢定等。 一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造 種毒與毒種繼代雞胚選擇接毒與收獲配苗5（三）接毒與收獲 雞胚接毒涉及接毒途徑和接毒量兩方面。根據(jù)不同的

3、病毒與不同疫苗生產(chǎn)程序，選擇最佳接種途徑和接種量。 接種途徑：絨毛尿囊膜接種 1112日齡胚 尿囊腔接種 911日齡胚 羊膜腔接種 1012日齡胚 卵黃囊接種 58日齡胚 如雞新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接種10-3稀釋毒種0.1ml，后者接種10-4稀釋毒種0.1ml。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗采用絨毛尿囊膜接種50-100倍稀釋毒0.2ml。1.接毒一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造 接毒與收獲雞胚選擇種毒與毒種繼代配苗6 雞胚接毒后培養(yǎng)增殖的時間和溫度、濕度以及收獲的標準與內(nèi)容物依不同的病毒和不同的疫苗而異。 如雞新城疫I系疫苗，接毒后于38.539C、相對濕度60%70%條件培養(yǎng)增殖，收集

4、接毒后2448h內(nèi)死亡胚，置010C冷卻424h，收獲胚液，進行無菌檢驗，供制備濕苗用。 也可收獲胚液、胎兒及絨毛尿囊膜混合制成乳劑制備凍干苗。 鴨瘟雞胚化弱毒疫苗，則收集接毒后48120h內(nèi)死亡的雞胚，冷卻后采取絨毛尿囊膜、尿囊液、胎兒制造凍干苗用。 2.培養(yǎng)收獲7 按規(guī)定收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無菌檢驗合格后即可進行配苗。 1.濕苗 通常于雞胚液內(nèi)，按每毫升加入青霉素和鏈霉素5001000U，放置010C 冷暗處處理后分裝。 2.凍干苗 經(jīng)無菌檢驗后合格的胚液或胚液、胎兒、絨毛尿囊膜乳劑，按比例加入保護劑，充分混合后濾過，于濾液內(nèi)按每毫升加入青、鏈霉素5001000U，混合后分裝

5、凍干。 3.滅活苗 收獲雞胚液經(jīng)無菌檢驗及毒價測定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液，按不同病毒的滅活溫度、時間進行滅活，加入相應的佐劑，制備成滅活疫苗，放置4-10C保存。（四）配 苗一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造 配苗雞胚選擇種毒與毒種繼代接毒與收獲8流程圖2病毒性禽胚疫苗制造工藝流程受精卵禽 胚毒 株種 毒滅活病毒液鑒定培育檢驗檢驗配制原 料佐 劑配苗、乳化滅活疫苗含病毒尿囊液或禽胚組織含病毒懸液配 苗活疫苗保護劑分裝、凍干分 裝滅活原 料種 子擴增收獲配制純化病毒懸液接種9示例甲型H1N1流感疫苗 數(shù)據(jù)來源：北京科興生物制品有限公司研制情況報告全病毒 裂解病毒 亞單位 減毒活病毒 （表面抗原）

6、不同疫苗中流感病毒的形態(tài)1011121314151617一支甲型流感疫苗自述前世：致病流感病毒 今生：抗擊甲流斗士 我是一支甲型流感疫苗。從我開始“孕育”到“出生”再到拿到合法“戶口”大概需要天的時間，中間要經(jīng)過各項嚴格的考驗，才能為人類的安全保駕護航如果把一支甲型流感疫苗想像成一個新生兒，上述這段話就是它的誕生記。日上午，記者在位于北京市海淀區(qū)的北京科興生物制品有限公司的廠房內(nèi)，全程觀摩了甲型流感疫苗的生產(chǎn)過程。 18 我的前世：飄蕩千年 我的前世，是一個已經(jīng)在地球上飄蕩了千萬年的小小病毒。我是一個直徑只有納米的小小病毒，但是我的祖先經(jīng)過不斷地變異和重組，繁衍成了一個龐大的家族，分成很多的亞

7、型。 年月開始，我逐漸出現(xiàn)在人類的視野中?？茖W家們開始將我命名為豬流感，后來又更名為新甲型流感?？茖W家們把我分離出來后，與一個沒有致病性的流感病毒株放在一起進行繁殖。在這個過程中，我與不斷地重組，科學家從這些重組株中篩選出了一株具有主體骨架，但同時又有和抗原特性的新毒株。安全性評估結(jié)果表明，重組后的我毒性已大大降低，適合用于疫苗的生產(chǎn)。于是我從此與家族決裂，并走上了一條對抗流感病毒之路。 19我的今生：與家族決裂 要制備大量的流感疫苗，首先必須繁殖大量的流感病毒。經(jīng)過近百年的探索，科學家發(fā)現(xiàn)我非常適合在雞胚的尿囊腔中繁殖。 接種機將非常少量的我準確地注入雞胚的尿囊腔中，然后一車車的雞胚被放入無

8、菌、恒溫的孵化間，我就悄悄地在里頭快速繁殖著三天過后，我已經(jīng)繁殖出很多很多的病毒了。此后，大量的我被合并在一起并轉(zhuǎn)移到滅活間，一種特殊的滅活劑被加入到容器中，在不斷攪拌的過程中我慢慢失去了知覺，沉沉睡去大約一周過后，我從噩夢中驚醒，卻赫然發(fā)現(xiàn)自己已經(jīng)完全失去了活性，無法使人致病也無法繁殖和生長了！20 在純化區(qū)域的多個小屋子里，我多次穿過一些特殊的篩子、管道，并被放在高速離心機中旋轉(zhuǎn)了很久，我逐漸被濃縮，而那些滅活劑和雞蛋中的雜質(zhì)等就被陸續(xù)去除掉了。期間工作人員還往我身邊加入了一種叫做裂解劑的特殊物質(zhì)，使我由一個完整的病毒分開成碎片，我身上的核酸和一些可能會引起人體不良反應的大分子蛋白以及裂解

9、劑經(jīng)進一步的純化被去除，主要保留了能引起人體免疫反應的表面抗原有效成分和部分的內(nèi)部抗原蛋白。在除菌過濾過后，我就有了一個新的身份：病毒原液。接下來我被按照一定的比例用注射用水進行稀釋，并加入適量的鹽分，形成了疫苗半成品 21 不過我要變成可以供人類直接使用的疫苗還要經(jīng)過非常嚴格的分裝和包裝程序。由于我比較脆弱，需要在的溫度下避光保存。接下來的兩三周時間里，我還要經(jīng)過兩道考核關(guān)：生產(chǎn)廠家和中國藥品生物制品檢定所會隨機抽取一部分已經(jīng)完成全部包裝的我再進行嚴格的體檢。通過企業(yè)自檢和國家復檢后，中國藥品生物制品檢定所才會給每一批疫苗頒發(fā)一個合格證書，也就是說只有這個時候我才真正獲得了我的合法“戶口”，

10、馬上就可以投入到抗擊流感的戰(zhàn)斗中去啦。 22二、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造 用于制苗用的種毒應經(jīng)毒力、最小免疫量、安全性、無菌檢定合格，通常為凍干品，由國家指定的苗毒種保藏部門檢定分發(fā)。 領(lǐng)取的種毒應按規(guī)定在細胞繼代培養(yǎng)適應后用作毒種，制苗用毒種應按規(guī)定控制在一定代數(shù)以內(nèi)，或為濕毒毒種，或為凍干毒種。 細胞培養(yǎng)疫苗有細胞培養(yǎng)滅活疫苗和細胞培養(yǎng)活疫苗兩類，前者多以強毒毒株培養(yǎng)增殖制造，后者則用弱毒毒株增殖生產(chǎn)，兩者的制造程序既有相同之處，又有區(qū)別。由于病毒不同與疫苗性質(zhì)不同，所采用的細胞及細胞培養(yǎng)方法也有所不同（一）種毒與毒種繼代接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細胞制備23 制造疫苗用的細胞大體為原代細

11、胞和傳代細胞兩類，根據(jù)病毒種類、疫苗性質(zhì)與工藝流程選擇不同的細胞。 選擇的依據(jù)包括：病毒的適應性高、毒價高、細胞來源方便、制備簡單、生命力強。 如脊髓灰質(zhì)炎活疫苗選擇vero細胞；狂犬病弱毒細胞適應疫苗采取BHK21細胞增殖病毒豬瘟兔化弱毒牛睪丸細胞疫苗采用犢牛睪丸原代細胞；等。（三）細胞制備 接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細胞制備二、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造 培養(yǎng)細胞和增殖病毒用的營養(yǎng)液又稱培養(yǎng)液，通常分為細胞培養(yǎng)用的生長液和病毒增殖用的維持液，兩者不同的之處通常只是生長液內(nèi)含有5%-10%的血清；維持液血清濃度為2%-5%。 不同細胞所需的營養(yǎng)成分和生長條件不盡相同。 目前常用的細胞培養(yǎng)方法為

12、靜止培養(yǎng)和轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)，至于微載體培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)在我國尚處于試驗之中。 24（四）接毒與收獲 病毒接種培養(yǎng)有同步與異步之分，前者在細胞分裝同時或不久接種毒種，進行培養(yǎng)，如貓、犬傳染性腸炎疫苗(細小病毒)；后者在細胞形成單層后接種毒種，如流行性乙型腦炎細胞培養(yǎng)疫苗。通常在細胞形成單層后傾去培養(yǎng)液，按1%-2%量接種毒種，經(jīng)吸附后加入維持液繼續(xù)進行培養(yǎng)，待出現(xiàn)70%-85%以上細胞病變時即可收獲。 病毒培養(yǎng)液收獲時間和方法依疫苗性質(zhì)而定，可將培養(yǎng)瓶凍融數(shù)次后收集；或加入EDTA-胰蛋白酶液消化分散收?。换蛟诓《驹鲋撑囵B(yǎng)過程中可收獲5-7次毒液，細胞毒液經(jīng)無菌檢驗、毒價測定合格后供配苗用。 接毒與收獲種

13、毒與毒種繼代配苗細胞制備二、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造25（五）配 苗 1滅活疫苗 不同滅活劑對不同病毒的作用也不同。向細胞毒液內(nèi)按規(guī)定加入滅活劑，在一定的溫度下作用一定的時間，有的滅活劑還需加入阻斷劑中止滅活。滅活疫苗配置通常都需加入佐劑，充分混合、分裝，制成滅活疫苗。2凍干苗 細胞毒液內(nèi)按比例加入保護劑或穩(wěn)定劑，充分混合、分裝，進行冷凍真空干燥制成凍于疫苗。 接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細胞制備二、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造26流程圖3病毒性細胞疫苗制造工藝流程動物或胚胎組 織毒 株種 毒滅活病毒消化鑒定培育培養(yǎng)檢驗檢驗配制原 料佐 劑傳代細胞配 苗（混勻、乳化）滅活疫苗細胞懸液生長細胞配 苗活疫

14、苗保護劑原 苗分裝、凍干分 裝滅活原 料原 料細胞培養(yǎng)液配制剪碎種 子鑒定擴增收獲配制滅菌2728三、病毒性動物組織疫苗制造 病毒在易感動物體內(nèi)可大量增殖，但在各器官組織、部位中增殖病毒的量卻有很大的差異，利用病毒增殖迅速、含毒量高的組織制造的疫苗稱為組織疫苗(tissue vaccine)。 動物組織疫苗包括動物組織滅活疫苗和動物組織弱毒活苗兩類，前者多數(shù)由強毒株制造，如豬瘟結(jié)晶紫疫苗、狂犬病羊腦組織疫苗；后者均以弱毒株生產(chǎn)，如豬瘟兔化弱毒乳兔組織疫苗、牛瘟兔化弱毒組織疫苗等。 動物質(zhì)量直接影響到組織疫苗的質(zhì)量，特別是對疫苗的安全性和效力有著決定性的作用，動物必須符合下列標準： (1)應該是

15、清潔級(二級)以上的等級實驗動物，即無規(guī)定的人獸共患性病原體動物； (2)應是對所接種病毒易感性高的動物，即在品種、年齡和體重方面合乎要求的實驗動物。 （一）動物選擇觀察與收獲動物選擇配苗種毒與接種29 種毒既可用抗原性優(yōu)良、致死力強的自然毒株臟器組織毒或強毒株增殖培養(yǎng)物，也可用弱毒株組織毒種。無論何種種毒都須經(jīng)純粹、抗原性和免疫原性檢查合格后使用。 接種途徑依病毒性質(zhì)和目的而異，例如豬瘟結(jié)晶紫苗，采取豬肌肉注射血液毒種；牛瘟兔化弱毒疫苗，以兔耳靜脈注射脾淋毒種；狂犬病疫苗，用兔腦毒種接種綿羊腦內(nèi)途徑感染。 幾種動物常用的接種途徑如下： 1. 腦內(nèi)注射：顱前后中線5mm平行線與瞳孔橫線交叉處。

16、 2. 靜脈注射：家兔由耳靜脈注入；雞自翅下肢靜脈注入。 3. 肌肉注射：選擇腿部、胸部、臀部等肌肉豐滿處注射。 4. 皮下注射：家兔和豚鼠可選擇在腹部或后腿內(nèi)注射。 5. 腹腔注射：家兔與豚鼠可選腹股溝處刺入腹腔。 （二）種毒與接種三、病毒性動物組織疫苗制造 觀察與收獲動物選擇配苗種毒與接種30 動物在接種感染后應每天觀察和檢查規(guī)定的各項指標，指標或項目因不同病毒而異。常規(guī)觀察、檢查的項目如食欲、精神和活動狀態(tài)、體溫、糞便、尿和血液變化等。 根據(jù)觀察的征象和檢查的結(jié)果選出符合要求的發(fā)病動物按規(guī)定方式剖殺，采取收集含毒量高的器官組織。如豬瘟結(jié)晶紫疫苗采取發(fā)病豬的血液制備；兔出血癥組織滅活疫苗采

17、集病兔肝臟生產(chǎn)；狂犬病疫苗利用發(fā)病羊的羊腦組織制造。（三）觀察與收獲三、病毒性動物組織疫苗制造 觀察與收獲動物選擇配苗種毒與接種311組織滅活疫苗 采取收獲的組織經(jīng)無菌檢驗及毒價測定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液和滅活劑（甲醛、酚、結(jié)晶紫等）制成勻漿，然后按不同病毒的滅活溫度、時間進行滅活。如狂犬病疫苗配制按腦組織1:4加入含有甘油及1%酚蒸餾水，于360.5C滅活7天制成；豬瘟結(jié)晶紫疫苗配制，按血毒4份，結(jié)晶紫甘油溶液1份混合，于37C38C滅活68天。2. 弱毒組織疫苗 在無菌操作下剔除臟器上的脂肪與結(jié)締組織等，稱重后剪碎，加入適最保護劑制成勻漿，然后濾過扣除殘渣量，再按濾液中的實際組織量計

18、算稀釋倍數(shù)，加入余量保護劑和青鏈霉素5001000U(g/ml)，充分搖勻后置04C冷暗處處理一定時間后作無菌檢驗與毒價測定。合格者進行分裝，冷凍真空干燥制成凍干疫苗。 （四）制 苗三、病毒性動物組織疫苗制造 觀察與收獲動物選擇配苗種毒與接種32流程圖2病毒性組織疫苗制造工藝流程動 物感染動物毒 株種 毒滅活病毒液鑒定培育檢驗檢驗配制原 料佐 劑配苗、乳化滅活疫苗含病毒組織含病毒懸液配 苗活疫苗保護劑分裝、凍干分 裝滅活原 料種 子擴增收獲配制純化病毒懸液接種33項目二細菌性活疫苗制造34弱毒菌種多系凍干品，由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、保存與分發(fā)，少數(shù)由國家指定單位鑒定

19、、保存與供給。菌種使用前應按規(guī)程規(guī)定進行復壯、挑選，并作形態(tài)、特性、抗原性和免疫原性鑒定，符合標準后方可用于制苗。將檢定合格的菌種接種子于規(guī)定的培養(yǎng)基，按規(guī)定的條件增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查及有關(guān)的檢查合格者即可作為種子液。種子液通常在04C可保存2個月，在保存期內(nèi)可作為菌苗生產(chǎn)的批量種子使用。 細菌性活疫苗多指弱毒菌苗，盡管種類與苗型甚多，但基本制造程序相同。（一）菌種與種子二、細菌性活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)濃縮配苗35按1%3%量將種子液接種于培養(yǎng)基，然后依不同菌苗要求進行培養(yǎng)。如豬丹毒弱毒菌須在在深層通氣培養(yǎng)中加入適當植物油作消泡劑，通入過濾除菌的熱空氣進行培養(yǎng)制造菌液如人用炭疽活疫苗、卡

20、介苗經(jīng)固體表面培養(yǎng)完成后須按規(guī)定要求將菌苔洗下制成菌液菌液于04C暗處保存，待抽樣經(jīng)純粹、活菌數(shù)等檢查合格后使用。（二）菌液培養(yǎng)二、細菌性活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)濃縮配苗36 經(jīng)檢驗合格的菌液，按規(guī)定比例加入保護劑配苗，充分搖勻后隨即進行分裝，分裝量必須準確。 分裝好的菌苗迅速送入凍干柜進行預凍、真空干燥，凍于完畢后立即加塞、抽空、封口，移入冷庫保存，并由質(zhì)檢部門抽樣檢驗。 （四）配苗與凍干 為提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可進行濃縮，以提高單位活菌數(shù)，常用的依縮方法有吸附劑吸附沉降法、離心沉降法等，如于豬丹毒菌液內(nèi)加入0.2% 0.25%羧甲基纖維素(CMC)進行濃縮，也可用離心沉淀濃縮。

21、濃縮菌液應抽樣作純粹、活菌數(shù)等檢查。（三）濃縮二、細菌性活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)濃縮配苗37流程圖1細菌疫苗制造工藝流程蛋白質(zhì)、肉浸液等原料培養(yǎng)基細菌分離菌 種弱毒菌種配置、滅菌鑒定減毒檢驗配制滅菌檢驗配制滅菌原 料佐 劑滅活菌液配苗、乳化滅活疫苗培 養(yǎng)菌苗原液配 苗活疫苗保護劑菌 液分裝、凍干分 裝滅活原 料活化種子38示例皮上劃痕人用炭疽活菌苗制造 1菌種1.1 菌種來源：為無莢膜，水腫型，具有一定殘余毒力，免疫原性較好的A16R菌株。由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。1.2菌種保存：應以凍干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每35年應全面檢定其培養(yǎng)特性、殘余毒力、安全性及免疫力

22、，建立種子批。生產(chǎn)前只檢查菌形，培養(yǎng)特性及噬菌體特異性。1.3菌種檢定1.3.1 培養(yǎng)及生化特性在牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基上生長，菌落為灰白色，不透明，呈卷發(fā)狀。為革蘭氏陽性大桿菌，呈鏈狀排列。無運動力。能夠形成芽胞。液體培養(yǎng)呈絮狀發(fā)育，在血清培養(yǎng)基上不形成莢膜。能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，不分解水楊苷。1.3.2 殘余毒力試驗用體重350400g健康豚鼠5只，各皮下注射0.5億/ml的牙包懸液1ml。另用體重1820g小白鼠5只，各皮下注射0.5億/ml的芽胞懸液0.1ml。觀察10天，3只以上動物應出現(xiàn)水腫，可有特異死亡。但臟器涂片只應找到無莢膜的本菌。若全部動物不出現(xiàn)水腫，應重

23、試。重試仍無水腫，菌種不得用于生產(chǎn)。391.3.3 安全試驗用體重2.02.5kg分健康家兔10只，各皮下注射2.5億/ml的芽胞懸液1ml，觀察10天，在注射部位可出現(xiàn)水腫，全部動物應活存。如有死亡，應用同數(shù)動物重試，重試仍有死亡，菌種不得用于生產(chǎn)。1.3.4 免疫力試驗上述安全試驗動物于注射后1820天，用炭疽毒菌攻擊，各皮下注射20個MLD。同時用同體重的健康家兔3只，各皮下注射1個MLD作為對照。觀察10天，對照動物死亡3只。試驗組保護60%；對照組死亡2只，試驗組保護80%為合格。對照動物死亡1只或無死亡，為對照不成立，應重試。402制造菌種：接種牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基，

24、于34培育1820小時，經(jīng)檢查為純菌者，保存于28，在2周內(nèi)供作生產(chǎn)種子用。培養(yǎng)基：用pH7.27.4牛肉消化液瓊脂或其他培養(yǎng)基。種子：將供制造用菌種，移種于牛肉消化液中。于34培育2024小時，檢查其生長特性、菌形及純度，應符合要求。接種：經(jīng)檢查合格之種子培養(yǎng)物，接種于牛肉消化液瓊脂上，置3334培育。成熟的典型芽胞達至80%以上、無雜菌者采集。采集：將培養(yǎng)物刮入50%（ml/ml）甘油蒸餾水原液瓶內(nèi)，振搖使成均勻懸液。每瓶取樣按生物制品無菌試驗規(guī)程進行純菌試驗。合并：將純菌試驗合格之原液進行合并分批，取樣做純菌試驗、濃度測定及活菌計數(shù)。稀釋分裝用滅菌的50%甘油蒸餾水將原液稀釋成每ml含芽

25、胞40億個，即為皮上劃痕用菌苗。分裝按20人份/ml分裝。規(guī)格為每安瓿1或2ml，抽樣進行成品檢定。制造菌苗的工作室及設備應當專用，不得與其他細菌工作混用。生產(chǎn)中應嚴格執(zhí)行無菌操作41項目二細菌性滅活疫苗制造42滅活細菌疫苗通用制造程序 菌種的選擇 菌液培養(yǎng) 滅活 配苗 濃縮 菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗細菌性滅活疫苗簡稱滅活菌苗，種類、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。 一、細菌性滅活疫苗制造43一、細菌性滅活疫苗制造（一）菌種與種子 1.菌種 制苗用菌種多數(shù)為毒力強、免疫原性優(yōu)良的菌株，通常使用1-3個品系，均由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、凍干保存和供應。 各種用

26、于制造菌苗的菌種應按規(guī)定定期復壯，并進行形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌型、抗原性和免疫原性鑒定，合格菌種準許用于制苗。 2.種子培養(yǎng) 將經(jīng)鑒定符合標準的菌種接種于菌苗生產(chǎn)規(guī)程中所規(guī)定的培養(yǎng)基進行增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查、活菌計數(shù)達到標準后即為種子液，用于菌苗生產(chǎn)。 種子液通常保存于2-8C冷暗處，不得超過規(guī)程規(guī)定的使用期限。 菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗44（二）菌液培養(yǎng) 大量生產(chǎn)的細菌培養(yǎng)方法甚多，既有手工式的，也有機械化或自動化的培養(yǎng)方式。 機械化或自動化的培養(yǎng)方式通稱為反應缸培養(yǎng)法，可供選擇的菌液培養(yǎng)法有：液體靜置培養(yǎng)法、液體深層通氣培養(yǎng)法、透析培養(yǎng)法及連續(xù)培養(yǎng)法等。 菌液培養(yǎng)也可采用固體培養(yǎng)法，該方法易獲得高濃度的細菌懸液，易稀釋成不同濃度，且含培養(yǎng)基的成分較少，所以比較適用于制備診斷用的抗原。 一、細菌性滅活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗45（三）滅 活 滅活菌苗通常根據(jù)細菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當?shù)臏缁顥l件進行，幾種滅活菌苗的滅活方法如表所示。 表 幾種滅活菌苗的滅活方法 一、細菌性滅活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗46（四）濃 縮 為提高某些滅活菌苗的免疫力，在培養(yǎng)過程中采取提高菌數(shù)的基礎上，再通過濃縮方法達到目的。