SpectrumLivingImage40軟件操作流程

1、SpectrumLivingImage4.0軟件操作流程本流程主要介紹Spectrum的LivingImage4.0軟件的應(yīng)用，包括參數(shù)介紹、生物發(fā)光、熒光二維及三維成像的圖像獲取及數(shù)據(jù)分析1、控制面板參數(shù)介紹關(guān)鍵參數(shù)，決定靈敏度Lllll已呂匚EFi匚F已scent整個(gè)圖像的獲取過程都通過該控制J面板操作，其中曝光時(shí)冋、bin值及光圈大小是最為關(guān)鍵Structure的參數(shù)，直接影響圖像獲取的質(zhì)量。Im.旳inciModeBlPhotographOverlayLightsAlignmentGrid曝光時(shí)間（exposuretime）曝光時(shí)間決定了信號(hào)強(qiáng)度，曝光時(shí)間越長，信號(hào)強(qiáng)度越高，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)根

2、據(jù)實(shí)際情況設(shè)定適當(dāng)?shù)钠毓鈺r(shí)間，初次實(shí)驗(yàn)若不知道合適曝光時(shí)間，可選擇Auto曝光，儀器會(huì)自動(dòng)檢測一個(gè)合適的曝光時(shí)間以成像，當(dāng)信號(hào)較弱時(shí)可適當(dāng)增加曝光時(shí)間以獲取較佳信號(hào)。注：生物發(fā)光成像的曝光時(shí)間為分鐘（min）級(jí)別，而熒光成像的曝光時(shí)間為秒（sec）級(jí)別，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意參數(shù)設(shè)定。Bin值(Binning)Bin值表述的是將多少像素作為感光單元，bin值越大則表示應(yīng)用更多的像素作為一個(gè)感光單元，因此，bin值越大則靈敏度越高，而分辨率會(huì)有所犧牲，當(dāng)信號(hào)強(qiáng)度較弱時(shí)可適當(dāng)增加bin值以獲取信號(hào)。MediumBinning(8)SmallBinning(4)inning(16)光圈大小決定了光的透過量，光

3、圈越大,穿過光圈到達(dá)CCD的光越多，面板中的數(shù)字為F/stop中的分母數(shù)字，因此，數(shù)字越小代表光圈孔徑越大，透過的光越多，當(dāng)信號(hào)較弱時(shí)可通過增大光圈（減小數(shù)字）而增強(qiáng)信號(hào)探測能力。f/1視野范圍(FiledofView)視野范圍用于調(diào)節(jié)觀測的視野大小，共有A/B/C/D四檔可選，分別代表不同大小的視野范圍，實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)一次觀察小鼠個(gè)數(shù)選擇合適的視野范圍進(jìn)行成像。ID6.5cmImagingModeExposureTimeBinningOpenOVA:4.0cmLumines匚已itJFluores匚已ntFhotoqrdphnnStructureF/5tupExLitatiunFilterEmi

4、ssiunFilter1V|Block曲IVISAcquisitionControlPanelMediumV8VF-lediumOverlayLightsAlignmentGrid成像的聚焦包含自動(dòng)聚焦和手動(dòng)聚焦功能，在用小鼠進(jìn)行成像時(shí)，一般默認(rèn)成像對(duì)象的高度為1.5cm,儀器會(huì)自動(dòng)完成聚焦，在用其他對(duì)象進(jìn)行成像時(shí)（如大鼠），可調(diào)節(jié)Subjectheight參數(shù)，設(shè)定合適的聚焦高度，也可在Focus下拉選項(xiàng)中選擇聚焦設(shè)定2、生物發(fā)光二維成像的圖像獲取勾選Luminescent、Photograph及overlay選項(xiàng)，設(shè)置好曝光時(shí)間（生物發(fā)光曝光時(shí)間為分鐘級(jí)別）、bin值、光圈大小及視野范圍等

5、參數(shù)（軟件有默認(rèn)參數(shù)，可按照默認(rèn)參數(shù)成像，若效果不佳，則再調(diào)整各參數(shù)，調(diào)整的次序按照曝光時(shí)間bin值光圈大小順序調(diào)整），EmissionFilter選項(xiàng)設(shè)置為open，Photograph選項(xiàng)的參數(shù)一般情況無需調(diào)整，所有參數(shù)設(shè)定完畢后點(diǎn)擊Acquire按鈕即可開始成像。成像完成后，在得到結(jié)果圖的同時(shí)會(huì)彈出實(shí)驗(yàn)信息記錄對(duì)話框（下圖右框），可輸入相關(guān)實(shí)驗(yàn)信息以記錄實(shí)驗(yàn)情況，一次可最多同時(shí)選擇5個(gè)選項(xiàng)進(jìn)行記錄，記錄完成后，記錄的相關(guān)信息會(huì)反映在結(jié)果圖中，點(diǎn)擊結(jié)果圖中的info按鈕即可看見。測EditImageLabelsUserID:DwvLabelset:IXenogenUniversalChec

6、kany15Fie：Idsfordisplay.3、熒光二維成像的圖像獲取熒光二維成像與生物發(fā)光二維成像的操作流程基本類似，只是多了一些參數(shù)的設(shè)定，另外對(duì)于需要扣除背景的成像，需應(yīng)用到熒光光譜分離技術(shù)，該技術(shù)的操作流程將在第4節(jié)中詳細(xì)說明，本節(jié)主要介紹獲取單張熒光二維圖片的操作流程。熒光二維成像可選擇使用反射照明或透射照明進(jìn)行熒光激發(fā)，當(dāng)信號(hào)在皮下等較淺部位時(shí)可選擇反射照明成像，而當(dāng)信號(hào)位于肝臟等較深部位時(shí)可選擇透射照明（Transillumination）進(jìn)行成像。對(duì)于反射照明成像具體步驟如下：勾選Fluorescent、Photograph及overlay選項(xiàng)，設(shè)置好曝光時(shí)間（熒光曝光時(shí)間

7、為秒級(jí)別）、bin值、光圈大小及視野范圍等參數(shù)（軟件有默認(rèn)參數(shù),可按照默認(rèn)參數(shù)成像，若效果不佳，則再調(diào)整各參數(shù)，調(diào)整的次序按照曝光時(shí)間bin值光圈大小順序調(diào)整）,根據(jù)標(biāo)記所用探針的激發(fā)光及發(fā)射光波長,選擇合適的激發(fā)光（Excitatio）及發(fā)射光（Emission）濾片，Photograph選項(xiàng)的參數(shù)一般情況無需調(diào)整，所有參數(shù)設(shè)定完畢后點(diǎn)擊Acquire按鈕即可開始成像。選擇熒光成像模式透射照明選擇濾光片23=IdlecmModeExposureTimeMediumv1535secFlu已s匚已itMediumFieldofView:CSvstermStatusService冷Sequence

8、SetupFocus:usesubjectheightvInitialize620640660jllIStructureSubjectheight:1.50$jcmfl冋PhotographTemperatine:jLockedF/StnpExcitationFilterz-issionFilter|pdC-Clluminescentl，00ZEQFvIOpenLamPLevel；日爲(wèi);500520540560580600IIOverlayLightsAlignmentGrid曲IVISAcquisitionControlPanel對(duì)于透射照明成像，其他步驟與反射照明成像相同，只是需要選擇Tr

9、ansillumination選項(xiàng)，點(diǎn)擊Setup按鈕進(jìn)行透射點(diǎn)的選擇，對(duì)于單張圖片的獲取只需選擇一個(gè)點(diǎn)。4TiavriBBpdNrtiHrirlnp-El啤疊H曲4、熒光光譜分離SpectralUnmixing是一種將背景熒光信號(hào)與熒光探針信號(hào)分離的光譜分離方法。其應(yīng)用主要包括兩方面：1、將特異性熒光信號(hào)從組織自發(fā)熒光中分離出來；2、將不同的探針信號(hào)分開，用于多種探針同時(shí)成像。這里以反射熒光成像為例，詳細(xì)介紹應(yīng)用LivingImage4.0進(jìn)行SpectralUnmixing的具體步驟。更詳細(xì)的說明請(qǐng)參見UserGuide。點(diǎn)擊SequenceSetup按鈕，進(jìn)行序列圖的成像設(shè)定，可點(diǎn)擊Ad

10、d按鈕手動(dòng)添加并設(shè)定多圖成像參數(shù)，但這樣比較復(fù)雜，目前的軟件都已具有ImagingWizard功能，該功能相當(dāng)于一個(gè)參數(shù)設(shè)定向?qū)?，可引?dǎo)使用者進(jìn)行包括unmixing在內(nèi)的多種功能的完成(如下圖)：點(diǎn)擊ImagingWizard按鈕，進(jìn)入設(shè)置向?qū)1flImagingWizardImagingModeBioluminescenceImagingIJ生物發(fā)光成像熒光成像NamerijABiixiamtion5car擇不同發(fā)射光Filb波長成像選擇Spectrumunmixing10.50-800A金悄HfrhTFFTrm15iii7Ell!jIft*SLfiJfflE：-ffMmorirw頁eI

11、30In3nrlrnTr-irrsiumimmsl&選定探針后，軟件會(huì)自動(dòng)給出相應(yīng)的光譜圖，藍(lán)0.50-獲取的原始序列圖，將基于這些序列圖進(jìn)行光譜分離根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象，選擇正確的Subject其他參數(shù)設(shè)定與控制面板中參數(shù)設(shè)定相同Imagini：rlouseF呂it匚巳itFiedorViewFieol-ViewL-lJcmC-13.4cmFocusFocusMediumv580LllllE!5匚EltFUDr呂生匚呂itAutuMUtOMUtOwutoPharitom-XFr-lWeP.ateOtherControlPaneliIniagiExdosl-Fluorescence-SpecUnmix

12、/FilterpImagingWizard-FluorescenceSpecUnmix/FilterScanIm曰ginciSubiect:F-louseExposureParametersPhoto口記匚|1Photo口舊phSubjectH已iciht:SubjectH已iciht:options點(diǎn)擊Next按鈕后，設(shè)定好的序列圖參數(shù)會(huì)自動(dòng)顯示在下Total仃umberorseqments:1,:IVISAcquisition1廳|詢口口ModeExposureTimeBinningAuto|seclx|ITrnsillumi門日杠匚鼻MediumVv535LampLevel:High:回

13、ReuselingWizardII副囲口ModeExposureBinn在圖像分析工具欄中點(diǎn)擊展開SpectralUnmixing工具條，選擇進(jìn)行光譜分離的波長，點(diǎn)擊StartUnmixing按鈕選擇需要進(jìn)行光譜分離的區(qū)域，可通過滑動(dòng)條改變區(qū)域大小，紫色表示已選定區(qū)域，通常使用軟件默認(rèn)選擇的紫色區(qū)域即可選擇需要進(jìn)行光譜分離的成分顯示光譜分離2種成分，分別是探針信號(hào)和組織自發(fā)熒光信號(hào)ICG2QA13QImm甘TIT紳鏡丸酮詞柑）_EQflSpectralUnmixingWizard匚jQMfEM點(diǎn)擊左圖中的Spectra按鈕，可顯示線性光譜圖,MO1TD麗NijjTiberoiponentsto

14、1jiutiik:QlSBquNwanwXij時(shí)羽矗沖詳細(xì)顯示背景光譜圖及探針信號(hào)光譜圖ChoosethmnuiTiberofcomponent弓tomiiTiix.Fickthmsignific：=ltltbackgi-mutliI弓ignalwfirststhenaddthe：probeinformaticmtothmtableifiti弓notlistmd.IfyouarmurLcle：=Lt-aboutthe：probeoritisnotinthelibr：=Lry3chooseUrLkTLCiwn.Backgi_ouiidSignale0TissueA_ut0fluorescence

15、FoodSigrL：al団MatchProbeLal.E団UseConEtrain分析操作將在下列早節(jié)介紹ChoosethecomponentstounmixImagingSubjectMouseQHo-MkMdQORd5hffcSpKOGLrltlProbeInformaticm+X顯示光譜分離結(jié)果，左上圖為分離得到的背景光信號(hào)，右上圖為分離得到的特異性探針信號(hào)，左下圖為用兩種假色表示的合成圖，發(fā)表文章需要的為右上圖的探針信號(hào)圖，后續(xù)的定性定量分析均選擇此圖進(jìn)行，雙擊此圖后便可開始后續(xù)分析,5、二維結(jié)果定量分析活體可見光系統(tǒng)測定的二維信號(hào)均為體表發(fā)出的信號(hào)值，對(duì)于信號(hào)的定量均使用工具欄中的R

16、OITools定量分析工具條，下面介紹如何應(yīng)用ROI進(jìn)行定量分析。點(diǎn)擊展開ROITools工具條，定量所有操作均在此工具條中完成共有4中ROI圈選方式對(duì)信號(hào)進(jìn)行圈選定量，點(diǎn)擊每種圈選方式下拉列表，都可選擇一定數(shù)量的ROI（如右上圖同時(shí)圈共有4中ROI圈選方式對(duì)信號(hào)進(jìn)行圈選定量，點(diǎn)擊每種圈選方式下拉列表，都可選擇一定數(shù)量的ROI（如右上圖同時(shí)圈選2個(gè)ROI）,也可選擇Auto,讓軟件根據(jù)信號(hào)自動(dòng)繪制ROI，還可選擇FreeDraw自行繪制ROI，一般以圓圈繪制ROI比較多，另外，利用柵格圖形可對(duì)微孔板進(jìn)行ROI圈選，有多種微孔板類型可選擇（右下圖）Measurements200703221009

17、48001CK2007032210094800ROI圈選完成后點(diǎn)擊如左上圖所示的Measurement按鈕,定量數(shù)據(jù)將會(huì)出現(xiàn)在右圖中的ROI上方，同時(shí)會(huì)給出右上圖所示的定量數(shù)據(jù)表艮日|：1由I匚ECustomized已匚tions啊已35Uei已itsTypes:Radiance(Photons)vDisplay:OverlaynoTTApplytorype:MeasuSaveROIslarne:R0I_DeleteMeasurements3斗68ImageNumberR.呂diEiri匚e(PhntonsjConfigure.TotalFluxP/SAvqRadianf：7.006e+083

18、.822e+071數(shù)據(jù)表中數(shù)據(jù)可選定后直接copy至excel表中，進(jìn)行后續(xù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，也可點(diǎn)擊Export按鈕txt文本形式將數(shù)據(jù)輸出保存，點(diǎn)擊Configure按鈕，可選擇添加或刪除顯示在數(shù)據(jù)表中的選項(xiàng)(p.iseL.icm.isr)ROI定量的單位可在Units中選擇，通常有Counts和Radiance(Photons)兩種單位，通常選擇Radiance(p/sec/cm2/sr)這個(gè)單位作為定量單位，反應(yīng)的是單位弧度、單位面積、單位時(shí)間從體表發(fā)出的光子數(shù)，這個(gè)定量單位是不隨拍攝參數(shù)(如曝光時(shí)間等)的改變而改變的，因此準(zhǔn)確度和可信度非常高，可以滿足用戶進(jìn)行不同時(shí)間、不同拍攝參數(shù)、不同

19、儀器間所得的定量數(shù)據(jù)的比較。在Display選項(xiàng)中，可選擇不同的圖像顯示模式，如選擇Overlay,即表示所顯示圖像為明場信號(hào)和暗場信號(hào)的疊加圖，如只選擇Photograph，則在結(jié)果圖中將只顯示明場老鼠圖，而不顯示生物發(fā)光或熒光信號(hào)。rCK20070322100948001回因Units:Radiance(Photons)vDisplay:OverlaytInfoROI1ROILabelROI1LockPositionIILockSizeWidth(cm)1.31873ROIProperties因言號(hào)的強(qiáng)弱以左圖中的假色條表示，如圖中的假色條，藍(lán)色表示信號(hào)弱，紅色表示信號(hào)強(qiáng)，假色條上均有數(shù)值

20、標(biāo)尺,下方顯示定量單位Height(cm)1.40806在定量分析的時(shí)候，有時(shí)涉及到不同老鼠間同一部位的信號(hào)ROI定LineSize2只老鼠同一位置的信號(hào)ROI定量分析，圈選大LineSize量分析或LineColor這些情況同小的一致性，有如下方式保證ROI圈上，單擊鼠標(biāo)右鍵將出現(xiàn)上圖藍(lán)色框選的一致：r將鼠標(biāo)移至圈線中的對(duì)話框，可以copy已有ROI，然后粘貼至其他信號(hào)處即可保證ROI一致；2、將鼠標(biāo)移至圈線上，雙擊鼠標(biāo)左鍵將出現(xiàn)上圖紫色框中的對(duì)話框，在其中綠色框中可以數(shù)字形式設(shè)置ROI的精確大小，之后每個(gè)ROI都可按同樣的數(shù)值設(shè)定；3、在一個(gè)圖上圈定ROI后,可在工具條中保存ROI的圈選(

21、如右圖)，之后可在打開其它拍攝圖后在同樣的位置Load已保存的ROI，即可保證ROI的一致。ImaggInfurmdtionO口班色躊X審Y審*llApph/toSequence6、生物發(fā)光及熒光三維成像生物發(fā)光及熒光三維成像均是基于不同波長光的光譜特性而進(jìn)行的，因此操作時(shí)均需進(jìn)行多個(gè)波長的多圖成像。無論是生物發(fā)光還是熒光，在對(duì)光信號(hào)進(jìn)行三維重組之前，均需進(jìn)行小鼠體表的表面拓?fù)涑上瘢笤龠M(jìn)行光信號(hào)的三維重組，以下分為幾個(gè)步驟來介紹三維成像的操作流程：6.1利用ImagingWizard進(jìn)行三維成像序列圖的設(shè)定如同SpectrumUnmixing一樣，對(duì)于三維成像的多個(gè)波長的序列圖設(shè)定我們依然

22、借助Wizard向?qū)нM(jìn)行設(shè)置，步驟如下：點(diǎn)擊ImagingWizard按鈕，進(jìn)入向?qū)magingModeBioluminescenceImaging紅框所示的DLITNextmforimagingfluores匚mntproteinSj,InFTMlfllTiIDQtleMCGKWjf3E5!?)第Oji誡iJCV町a(chǎn)rticlesinthewavelengthrangeof進(jìn)行熒光三維成像點(diǎn)擊Fluorescenc并選擇下圖紅框所示的FLIT1(frombelowmodesareavailable.選擇標(biāo)記所用探針探針選定后，軟件會(huì)自動(dòng)給出對(duì)應(yīng)波長，對(duì)于生物發(fā)光成像，軟件會(huì)自動(dòng)給出要進(jìn)行成

23、像的波段，如左上圖虛框所圈波段，對(duì)于熒光成像，還需在下面步驟選擇透射點(diǎn)以進(jìn)行多圖成像對(duì)于生物發(fā)光成像，在下圖界面設(shè)置好其他相應(yīng)參數(shù)后，點(diǎn)擊Next即可對(duì)于熒光成像，在下圖界面設(shè)置好其他相應(yīng)參數(shù)后，點(diǎn)擊TransilluminationSetup后，進(jìn)行透射點(diǎn)的選擇aipImagingWizard-Bioluminescence-DLITImagingWizard-Fluorescence-FLITImagingSubject:MouseImagingSubject:r-louseExposureParametersAutoSettingsManuExposureP-srametersAutoS

24、ettingsManualSettingsFocusSubjectHeight:1.50CjcmOptionsPHTimeSeriesStudyTotalnumberofsegments:jU|Delaybetweensegments:dOFvlins對(duì)于生物發(fā)光，點(diǎn)擊Next之后，序列圖將呈現(xiàn)在下圖中Fo匚us:cmFluorescent|0PhotographOptionsP|TimeSeriesStudyTotalnumberofsegments:Delaybetweensegments:FluorescenceIIPJormdlizedTransillumiridtionSetup口H

25、alite叭住NhsiWL:4nlSndlEMiTaUplNoTrans-IlluiFieldofViewFo匚us:usesubjectheightvhoMnNudv1Itai!s*wu_-C.Iff.(I蟲進(jìn)行透射成像的點(diǎn)，綠色代表催僵B1J0點(diǎn)已選上，選擇完畢后，所設(shè)減昭B11置序列圖將在下圖中顯示Lumines匚亡仃tHEFluorescentPhotographNormalizedMediumStructureFadsmuft544杲應(yīng)昌序列nnBMediumV2OverlayL；Lights.AlignmentGndssssNumb13序列圖獲取完畢后，各單張結(jié)果將顯示在如下所示的

26、對(duì)話框中，左圖為生物發(fā)光，右圖為熒光，接下來將進(jìn)行表面拓?fù)涑上褚约靶盘?hào)的三維重建13131IK拉;n（通過UseSavedColorsSurface22.08e84.u4e9lle93.示背E出已iI|_hIuikjhji中口hr;AiMlyihtPYhwKur1)KlomrphyAnalyitirlrh(idToolPaletteImageAdjustROIToolsPlanarSpectralImagingVSurfaceTopographySurfaceR已匚口口盤門匚tionR已匚匚instructOrientation:Surfa匚已SmoothingLevel:LowSaveRes

27、ultsName:SURFACE1DeleteSaveSpectralUnmiHing20357337DLIT3DReconstructionSmoothRestoreCciun乜VQSequen匚已ViewSpectraNudeMouseVDorsalV5ubject:表面拓?fù)浣Y(jié)果圖hTToolPalette6.3生物發(fā)光信號(hào)三維重建ToolPalette”ROIToolsPlanarSpectralImagingSurfaceTopography點(diǎn)擊展開DLIT3DReconstruction工具條，在Analyze選項(xiàng)中以不同波長顯示所得序列圖中的每一張圖，若勾選則代表將用此波長圖進(jìn)行光

28、學(xué)三維重建，一般可將所有波長均選上，若某一個(gè)波長拍攝圖像效果不好，則可不選，點(diǎn)擊Start按鈕將出現(xiàn)下圖對(duì)話框ReconstructionPropertiesResults/ROITools”PlanarSp亡ctrmlImaging”呂urFat亡Topography/DLIT3DAnalyzeTissueProperties:MuseSourceSpectrum:Firefly3DTools匚巴CK20000申e:AftjfftjfeSource:FefiySelectFilters:Plot:SourceSpectrumLuminescentCalibration:Databasenot

29、found道具體位置則選擇默認(rèn)的Muscle，通過Source在Properties選項(xiàng)中，通過TissueProperties下拉歹U表選擇信號(hào)所在組織，若不NormalizedAmplitudeSpectrum下拉列表選擇標(biāo)記所用探針（如圖示的Firefly)二CK200703221OO948SEQQSequenceViewA3DViewDataPreview金CK2OO7O3221OO94B_SEQL.Jj.SequenceView2QD城訥400500_6&_7_S0_0Wfewelengthnin”3DTools勾.選電*Recon：吉果見生物發(fā)光三維重建結(jié)果圖，在給出結(jié)果的同時(shí)，在

30、工具欄的Coronal(z=14.9)Sagittal(x=-O.S)|1JResults選項(xiàng)中也同時(shí)給出一些數(shù)據(jù)結(jié)果，對(duì)于結(jié)果的分析將訃Lab在下面章節(jié)做詳細(xì)介紹Transaxial(y=20.2)|plectallct，軟件|信號(hào)的重建,，點(diǎn)擊I將自動(dòng)完成6.4熒光信號(hào)三維重建如同生物發(fā)光三維重建一樣，在Analyze中勾選進(jìn)行重建需要的不同位置點(diǎn)，若有些位置點(diǎn)的信號(hào)不好,則可不勾選，點(diǎn)擊Start按鈕將出現(xiàn)下圖對(duì)話框ToolPaletteSurfaceTopographypReconstruction/ROIToolsSerfience:HA2007080211S32_SEQTiKue:

31、M/mfeSource:LfnknownSelectImageSources:017458005.5027458005.1037458005.2匸沖7458005.1057458005.2067458005.4077458005.2087458005.2097458005.3ExWLEmWLThreshold%l|StartHA20070802115324_SEQToolPalette”ROIToolsAnalyzeFluores匚已ntQuantiFi匚3tioi:SurfaceTopographyVFLIT3ITRTissueProperties:Muscle如同生物發(fā)光三維重建一樣,在P

32、roperties選項(xiàng)中，通過TissueProperties下拉QSequenceView乙3DViewDataPreview熒光三維重建結(jié)果給出結(jié)果的同時(shí)，欄的Results選項(xiàng)中給出一些數(shù)據(jù)結(jié)果，對(duì)于結(jié)果的分析將在下面章節(jié)做詳細(xì)介紹圖，在晶age也同時(shí)DatabaserwtfoundTissuePropertiesPlot:列表選擇信號(hào)所在組織，若不知道具體位置則選擇默認(rèn)的Muscle叵勾選Selectall，點(diǎn)擊econstruct軟件將自動(dòng)完成熒光三維信號(hào)的重建，結(jié)果見下圖QSequence爐巴|比3DView|，HA20070802115324SEQSagittal(x=0.4)-

33、6.5三維結(jié)果分析生物發(fā)光或熒光三維結(jié)果的分析過程一樣，以下以生物發(fā)光三維結(jié)果為例，介紹三維結(jié)果的分析操作。3D瀏覽工具條坐標(biāo)軸線坐標(biāo)軸面立體圈選框柵格圈選框伽丫對(duì)象歸位、放大旋轉(zhuǎn)、放大等功能點(diǎn)擊后可在結(jié)果圖中顯示X/Y/Z坐標(biāo)軸線點(diǎn)擊后可在結(jié)果圖中顯示X/Y/Z坐標(biāo)軸面點(diǎn)擊后整個(gè)鼠體將會(huì)被一個(gè)立體框圈定，可手動(dòng)移動(dòng)、旋轉(zhuǎn)整個(gè)鼠體點(diǎn)擊后鼠體的中心面將會(huì)被一個(gè)柵格平面圈定，可手動(dòng)移動(dòng)、旋轉(zhuǎn)整個(gè)鼠體選擇下拉列表，可對(duì)鼠體進(jìn)行歸位及放大處理旋轉(zhuǎn)點(diǎn)擊后整個(gè)鼠體可以逆時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)距離測量O4定量測定點(diǎn)擊后將在左邊三個(gè)側(cè)面圖中出現(xiàn)測量線標(biāo)，通過測量線標(biāo)可測量3D信號(hào)距離不同位置的距離信息,測定的數(shù)據(jù)將直接

34、出現(xiàn)在測量線上方點(diǎn)擊后拖動(dòng)鼠標(biāo)圈選3D信號(hào)，在ToolPalette工具欄中的3DTools工具條中的Source選項(xiàng)中的最下方的MeasuredSources中，數(shù)據(jù)信息包括3D信號(hào)的發(fā)光強(qiáng)度、體積等點(diǎn)擊后選定3D信號(hào)，可copy該3D信號(hào)的定量信息點(diǎn)擊后可以圖片的形式保存3D結(jié)果除了上述3D瀏覽工具條之外，3DTools工具條是另一個(gè)分析工具條，包括4個(gè)模塊，Surface模塊主要對(duì)圖像的表觀信息進(jìn)行調(diào)整，Source模塊主要調(diào)節(jié)信號(hào)的表觀并顯示定量數(shù)據(jù)，Registration模塊用于加載器官模擬圖，Animate模塊用于制作3D效果演示flash，各功能的詳細(xì)說明請(qǐng)參見軟件的UserG

35、uide。對(duì)位工具，實(shí)現(xiàn)器官圖與小鼠的準(zhǔn)確對(duì)位選擇老鼠模型及擺放形式后選擇需要疊加的模擬器官圖IILog5匚呂1已Quantification:0,00photo回exp7|DisplayVoxelsSurfa匚已11Di呂匚bour匚已burF3匚巳TooPaletteROITookDLIT3DReconstructionupacity：1gradation:toxesize:Gr已已nFinkVbume:MeasuredSourcesrhreshoiColorTabPlanarSpectralImagingSurraceTopography3DTools0.31v41Displayvoxe

36、lsas:5x5vITCubesVeSmoothing:HostOrgan:UnknownCenterctMass:氏他氏他000顯示定量結(jié)果7、結(jié)果的保存和調(diào)出7.1結(jié)果的保存對(duì)于結(jié)果的保存，有如下圖所示幾種方式，其中第1、2、3中方式保存的為整個(gè)數(shù)據(jù)文件夾包含圖像獲取的所有信息，保存后的文件必須用本軟件打開，而第4中方式以圖片格式保存，可直接用Windows操作系統(tǒng)中安裝的圖像處理軟件打開。2、通過點(diǎn)擊存盤按鈕進(jìn)行保存syaaCK200703221009480017.2驢為O髦Eyl冒著Units:Radiance(Photons)vApplytoallCK200703221009480011、點(diǎn)擊File下拉列表，通過Save或Saveas方式保存3、點(diǎn)擊關(guān)閉按鈕,lvingImage4.0軟件會(huì)自動(dòng)彈出保存提示框，點(diǎn)擊確定進(jìn)行保存Units:Rddiance(Photons)vDisplay:Overlay4、點(diǎn)擊圖片保存按鈕進(jìn)行保存，此種方式保