免疫實(shí)驗(yàn)課：實(shí)驗(yàn)十四 血小板計(jì)數(shù)

1、實(shí)驗(yàn)十四 血小板計(jì)數(shù)【目的】掌握血小板的顯微鏡計(jì)數(shù)方法?！驹怼垦航?jīng)一定比例稀釋和破壞紅細(xì)胞后，滴入計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)量，經(jīng)換算求出每升血液中血小板的數(shù)量。【器材】1.試管、試管架2.吸管、吸耳球3.微量吸管、膠吸頭、干脫脂棉玻棒計(jì)數(shù)板、蓋玻片、綢布【試劑】草酸銨稀釋液草酸銨：溶血EDTANa2：抗凝、防Plat聚集【標(biāo)本】 EDTAK2抗凝靜脈血或末梢血?！静僮鳌?. 加稀釋液：0.38ml2. 取外周血：20ul3. 稀釋血液：擦凈插入打出沖洗混勻靜置10min 4. 充液：擦凈蓋上混勻充入靜置10-15min5. 計(jì)數(shù) 放大倍數(shù)：高倍（40） 范圍：中央大方格內(nèi)

2、四角及中央共五個(gè)中方格 順序、壓線細(xì)胞計(jì)數(shù)原則：同WBC6. 計(jì)算：PLT/L=N51020106/L =N109/L 7. 報(bào)告：PLT/L= 109/L鏡下Plat待征：無(wú)色，柔和折光性的圓、橢圓小體，針尖大小WBC未溶解RBC血小板放大400倍放大200倍：未溶解紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板【注意事項(xiàng)】1.穿刺深度（23）mm,吸血及注入稀釋液動(dòng)作應(yīng)快2.靜置15min，Plat完全下沉后計(jì)數(shù)3.所用器材清潔、無(wú)灰塵及斑點(diǎn)4.計(jì)數(shù)時(shí)用暗光，注意與雜質(zhì)區(qū)別：Plat：圓、橢圓，柔和折光，（1/31/5）RBC；雜質(zhì)：形態(tài)、大小、折光性不一致5.采血后1小時(shí)內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，否則Plat減少【參考值 】（1

3、00 300） 109/L實(shí)驗(yàn)十五凝血酶原時(shí)間測(cè)定【目的】掌握凝血酶原時(shí)間測(cè)定（PT）的試管法?！驹怼吭谘獫{中加入過(guò)量的組織凝血活酶和鈣離子，使凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，后者使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。測(cè)定從加入鈣離子到血漿開始凝固所需時(shí)間，即為PT?！酒鞑摹?.水浴箱2.試管、試管架3.吸樣槍、吸頭4.離心機(jī)5.秒表【試劑】PT試劑盒1.PT試劑（內(nèi)含腦粉提取物、緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑）,ISI=1.222.PT緩沖液【標(biāo)本】109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝的靜脈血（血液與抗凝劑之比為9：1）【操作】1.分離乏血小板血漿 3000r/min離心10min2.平衡溫度 參比血漿、PT試劑置室溫15

4、min3. 試劑的配制 PT試劑+2ml緩沖液. 4.溫浴 參比血漿、 待測(cè)血漿、配好的PT試劑37水浴5min5.測(cè)定參比血漿的PT (1)參比血漿0.1ml 37水浴30s,加入預(yù)溫的PT試劑0.2ml，立即混勻并啟動(dòng)秒表。(2)終止計(jì)時(shí) 傾斜試管，記錄至液體停止流動(dòng)所需的時(shí)間。（3）重復(fù)測(cè)定2-3次，取平均值即為PT值。6.測(cè)定待檢血漿的PT值 同步驟57.報(bào)告方式 PT= 秒 PTR= INR= 【參考值】 PT:成人11-13s,新生兒延長(zhǎng)2-3s,早產(chǎn)兒延長(zhǎng)3-5s PTR:0.85-1.15 INR:將INR2-4作為口服抗凝劑治療 的適用范圍【注意事項(xiàng)】1.采血要順利，否則可激

5、活凝血因子。采血后應(yīng)仔細(xì)觀察標(biāo)本有無(wú)溶血、黃疸、脂血和血凝塊。2.血液與抗凝劑要充分混勻，血液與抗凝劑比例9：1要準(zhǔn)確。3.采血后應(yīng)在1h內(nèi)完成測(cè)定。4.分離血漿時(shí)離心條件要確保3000r/min離心10min,以獲得乏血小板的血漿。5.水浴溫度要控制在（37.00.5），溫度過(guò)高或過(guò)低都可影響測(cè)定結(jié)果。實(shí)驗(yàn)十六活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定【目的】掌握活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定（APTT）的試管法。【原理】在37.0條件下，以白陶土（激活劑）激活因子，以腦磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供的催化表面，再加入適量的Ca2+即可滿足內(nèi)源性凝血的全部條件。測(cè)定從加入Ca2+到血漿凝固所需的時(shí)間即為APTT

6、?！驹噭緼PTT試劑盒1.APTT試劑即鞣花酸 (內(nèi)含腦磷脂、鞣花酸穩(wěn)定劑、防腐劑)2. 25mmol/LCaCl2 (內(nèi)含氯化鈣、防腐劑)【標(biāo)本】109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝的靜脈血（血液與抗凝劑之比為9：1）【器材】1.水浴箱2.試管、試管架3.吸樣槍、吸頭4.離心機(jī)5.秒表【操作】1.分離乏血小板血漿 3000r/min離心10min2.平衡溫度 用蒸餾水溶解正常人參比血漿，置室溫15min，混勻。3.溫浴 將25mmol/LCaCl2溶液于37水浴3min4.測(cè)定參比血漿的APTT (1)溫浴活化 參比血漿0.1ml+APTT試劑0.1ml,混勻， 37水浴30min。(2)計(jì)時(shí) 加入溫浴的25mmol/LCaCl2溶液0.1ml，立即混勻并計(jì)時(shí)。傾斜試管，記錄至液體停止流動(dòng)所需的