醫(yī)概第二章3血液檢驗(yàn)

1、第二章血液一般檢驗(yàn)血涂片制備與染色血涂片制備載玻片要求血涂片制備方法血涂片的染色染料堿性染料酸性染料復(fù)合染料染色方法Wright染色法Giemsa染色法Wright- Giemsa染色法血球計(jì)數(shù)板血球計(jì)數(shù)板基本原理計(jì)數(shù)方法構(gòu)造將經(jīng)過適當(dāng)?shù)娜芤合♂尩难悍湃胗?jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)（血球計(jì)數(shù)板載玻片與蓋玻片之間的計(jì)數(shù)室中），在顯微鏡下計(jì)算一定容積血液稀釋液中的血細(xì)胞個(gè)數(shù)，再將所得結(jié)果換算為1mm3血液中的血細(xì)胞個(gè)數(shù)。白細(xì)胞數(shù)四角4個(gè)大方格,紅細(xì)胞數(shù)中間5個(gè)中方格，“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則紅細(xì)胞檢查顯微鏡法血液分析儀法紅細(xì)胞計(jì)數(shù)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法紅細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差技術(shù)誤差儀器誤差分布誤差血紅蛋白測定生理性

2、變化病理性變化增多減少藥物臨床意義紅細(xì)胞形態(tài)檢查原理臨床意義輕度貧血中度貧血重度貧血極重度貧血四、血細(xì)胞比容測定血細(xì)胞比容（HCT）：1、貧血、真性紅細(xì)胞增多癥和紅細(xì)胞增多的診斷2、血液稀釋和血液濃縮變化的測定3、紅細(xì)胞平均體積和紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度的計(jì)算等。 HCT高低與紅細(xì)胞數(shù)量、平均體積及血漿量有關(guān)，主要用于：是紅細(xì)胞在全血標(biāo)本中所占體積的比值。測定方法離心法溫氏法 Wintrobe法微量法 microhematocrit法血液分析儀法檢測原理1、離心法： 是將抗凝血置于孔徑統(tǒng)一的溫氏管或毛細(xì)玻管中，以一定轉(zhuǎn)速離心一定時(shí)間后，計(jì)算紅細(xì)胞層占全血的體積比。2、血液分析儀法： 當(dāng)細(xì)胞通過計(jì)

3、數(shù)小孔時(shí)，形成相應(yīng)的脈沖，脈沖的多少即為細(xì)胞數(shù)量，脈沖高度代表細(xì)胞體積，通過紅細(xì)胞平均體積（MCV）和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）即求得血細(xì)胞比容，HCT=MCVRBC。方法學(xué)評價(jià)溫氏法： 采用中速離心，不能完全排除紅細(xì)胞間殘留血漿，測定結(jié)果偏高，已屬淘汰。微量法： 采用高速離心，細(xì)胞間殘留血漿比溫氏法少，樣本用量小且操作簡便 。WHO推薦常規(guī)方法，CLSI推薦的參考標(biāo)準(zhǔn)。血液分析儀法： 目前常用方法。儀器法應(yīng)注意紅細(xì)胞增多癥或血漿滲透壓異常時(shí)會出現(xiàn)誤差。放射性核素法 準(zhǔn)確性最高。ICSH曾推薦為參考方法。溫氏法操作方法:1、靜脈血2ml加入抗凝管中，充分混勻。 2、用毛細(xì)滴管吸取混勻的抗凝血，從溫氏

4、管底部徐徐注入，隨血液平面上升而漸漸向上提起毛細(xì)滴管，直至刻度“10”處。注意切勿產(chǎn)生氣泡。 3、將溫氏管置入水平離心機(jī)中，3000rmin，離心30min，讀數(shù)。 4、讀出紅細(xì)胞層柱高的毫米數(shù)，乘以0.01，即為血細(xì)胞比容測定值。溫氏管微量法操作方法： 1、取抗凝全血或末梢血，充入一次性毛細(xì)玻管的23（50mm）處，封口。 2、水平式毛細(xì)管HCT離心機(jī)以12000rmin，離心5min。 3、用專用讀數(shù)板或刻度尺，讀取還原紅細(xì)胞層和全層長度，計(jì)算Hct值。 讀數(shù)層質(zhì)量保證1、操作規(guī)范化 避免操作誤差，如抗凝量不準(zhǔn)，混勻不充分，離心速度不均等。 假性增高：紅細(xì)胞形態(tài)異常和紅細(xì)胞增多網(wǎng)織紅細(xì)胞增

5、多、白細(xì)胞增多； 假性降低：體外溶血、自身凝集等。 2、注意干擾因素【參考區(qū)間】一、成年：男性：0.400.50； 女性：0.370.48。二、新生兒:0.470.67。三、兒童：0.330.42?！九R床意義】 HCT的臨床意義與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相似。 一、 HCT增加可因紅細(xì)胞數(shù)量絕對增加或血漿量減少所致； 二、HCT減低是診斷貧血的指標(biāo)，若紅細(xì)胞數(shù)量正常，血漿量增加，為假性貧血。1臨床補(bǔ)液量的參考2真性紅細(xì)胞增多癥診斷指標(biāo)當(dāng)HCT大于0.7，RBC為(710)X1012L, Hb大于180gL3計(jì)算紅細(xì)胞平均指數(shù)的基礎(chǔ)紅細(xì)胞平均體積（mean corpuscular volume,MCV） 紅細(xì)

6、胞平均血紅蛋白量（mean corpuscular hemoglobin,MCH） 紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC） 五、紅細(xì)胞平均指數(shù)一、手工法： 紅細(xì)胞平均指數(shù)由RBC、HGB、HCT測定后計(jì)算而來，因此，必須采用同一抗凝血標(biāo)本，且所檢測的結(jié)果必須準(zhǔn)確。二、儀器法： 紅細(xì)胞平均指數(shù)的測定同樣依賴于RBC、HGB和MCV測定的準(zhǔn)確性。紅細(xì)胞平均指數(shù)有助于深入認(rèn)識紅細(xì)胞特征，為貧血的鑒別診斷提供線索，可用于貧血形態(tài)學(xué)分類及提示貧血的可能原因。但它僅反映了紅細(xì)胞群體平均情況，無法闡明紅細(xì)胞彼此之間的差異。六、網(wǎng)

7、織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞（Ret）： 是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡細(xì)胞（是晚幼紅脫核后到完全成熟紅細(xì)胞間的過渡細(xì)胞），略大于成熟紅細(xì)胞，其胞質(zhì)中殘存的嗜堿性物質(zhì)RNA經(jīng)堿性染料活體染色后，形成藍(lán)色或紫色的點(diǎn)粒狀或絲網(wǎng)狀沉淀物。紅細(xì)胞發(fā)育過程 原紅 早幼紅 中幼紅 晚幼紅 網(wǎng)織紅 紅細(xì)胞形態(tài)與分型型：絲球型 外周血中無 型：網(wǎng) 型 外周血少見型：破網(wǎng)型 外周血可見 型：點(diǎn)粒型 外周血多見 網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測的方法、目的1、普通顯微鏡法2、血液分析儀法檢測的方法目的1、鑒別貧血的類型（增生性、非增生性、增生增高性）；2、檢查骨髓的功能；3、檢測貧血的治療效果；4、評估骨髓移植后、再生障礙性貧血

8、細(xì)胞毒藥物誘導(dǎo)治療后或EPO治療后的紅細(xì)胞造血情況。玻片法1、染液1滴置玻片一端，自然干燥備用。2、取血1滴至干燥的染料上，將兩玻片粘合。3、510 min后，推血片。 4、油鏡下計(jì)數(shù)至少1000個(gè)RBC中的Ret數(shù)。方法評價(jià)： 水分易蒸發(fā)，不易涂片； 染色時(shí)間短，結(jié)果偏低。試管法1.染液2滴加入小試管，加血2滴，混勻。 2.室溫下染色1520 min。3.混勻，取1小滴制薄血片，干后計(jì)數(shù)。 方法評價(jià)：水分不易蒸發(fā)； 染色時(shí)間長；可重復(fù)推片復(fù)查。注意事項(xiàng) 1、玻片法中，應(yīng)待玻片上煌焦油藍(lán)乙醇液中乙醇完全揮發(fā)后才能加血。 2、染色時(shí)間必須充分。 3、計(jì)數(shù)區(qū)域一般選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位，兼顧邊緣

9、和尾部。 4、試管法染液與血液以1：1為宜。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法： 1、Miller窺盤法：ICSH及我國衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心推薦使用。 計(jì)數(shù)小正方形中的紅細(xì)胞數(shù)A 計(jì)數(shù)大正方形中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)BRet% 100A格內(nèi)的RBC數(shù)9B格內(nèi)的Ret數(shù)前提：紅細(xì)胞散在且均勻分布作用：提高計(jì)數(shù)的速度和精度2、直接計(jì)數(shù)法：Ret% 100 多個(gè)視野內(nèi)的RBC數(shù)多個(gè)視野內(nèi)的Ret數(shù)注意：RBC總數(shù)1000【參考區(qū)間】一、成人、兒童： 0.51.5二、新生兒： 2.06.0三、成人絕對值： （2484）109/L臨床意義1、評價(jià)骨髓增生能力，判斷貧血類型: 再障時(shí)，明顯降低。絕對值低于5109/L可做為急性再障

10、的輔助診斷指標(biāo)。失血、多數(shù)溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯高于正常。營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細(xì)胞可保持正常、輕度升高或降低。2、評價(jià)療效 網(wǎng)織紅細(xì)胞反應(yīng)：IDA或巨幼細(xì)胞貧血分別給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療23d后，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值開始上升，710d達(dá)到最高(10%左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細(xì)胞、血紅蛋白開始升高。 骨髓移植、EPO治療后：若骨髓開始恢復(fù)造血功能，RMI升高，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值上升。高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR）中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（MFR）醫(yī)學(xué)整理網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）RMI（MFRHFR）/LFR100）3、放、化療監(jiān)測 機(jī)

11、體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才檢測到網(wǎng)織紅細(xì)胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復(fù)后，又見上述指標(biāo)依次上升?？芍笇?dǎo)臨床醫(yī)師適時(shí)調(diào)整治療方案，避免造成嚴(yán)重的骨髓抑制。七、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞是不完全成熟的紅細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)殘存的核酸變性、聚集形成顆粒，經(jīng)堿性染料（如亞甲藍(lán)）染色后，細(xì)胞內(nèi)可見到深染的顆粒；若以Wright染色，則在粉紅色的胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)黑色顆粒，故名嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞?！緳z測原理】制備血涂片，甲醇固定，亞甲藍(lán)染色: 選擇細(xì)胞分布均勻的區(qū)域，油鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞的數(shù)量，或油鏡下計(jì)數(shù)50個(gè)視野中的嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞，同時(shí)計(jì)數(shù)5個(gè)視野中的正常紅細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算百分率?！緟⒖紖^(qū)間、臨床意義】【參考區(qū)間】 0.03%?！九R床意義】嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)增高主要見于鉛、汞、銀、鉍等重金屬及硝基苯、苯胺中毒，對慢性重金屬中毒具有輔助診斷價(jià)值。溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、白血病、惡性腫瘤時(shí)也可見嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞增高。八、紅細(xì)胞沉降率測定 紅細(xì)胞沉降率（ESR）簡稱血沉，是指在規(guī)定條件下，離體抗凝全血中的紅細(xì)胞自然下沉的速率。1、魏氏法：2、自動血沉儀法測定方法傳統(tǒng)方法，為國內(nèi)規(guī)范方法【參考區(qū)間、臨床意義】【參考區(qū)間】 魏氏法：男性015mm/h