自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑課件

1、廣東藥學(xué)院藥理系自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑周四桂1貓?jiān)S咕廢遂汝巫坐和抨夢(mèng)圈天肺孕亨節(jié)甲劫句戴蕉擦槽邵琺恫鍘絡(luò)詞碘遣自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑 鐵器在空氣中暴露日久會(huì)生銹，潔白的銀器也會(huì)由于氧化變黑。人的機(jī)體與金屬一樣也會(huì)受到氧化而導(dǎo)致“生銹”，罪魁就是自由基。2砒憐喝賒錯(cuò)俗蹬琢橢鴉急陌司促鑷喬集誰(shuí)憎降籽桌牧咬捂陶揖幽梁蔓護(hù)恫自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑 1956 年英國(guó)分子生物學(xué)家Harman 首次提出： “氧化應(yīng)激決定壽命”，即自由基衰老學(xué)說(shuō)， 認(rèn)為衰老是自由基引起的組織隨機(jī)毒害的結(jié)果。 Harman, D. J. Gerontol. 1956; 11

2、: 298-300 氧化應(yīng)激是由于氧自由基過(guò)量生成和(或)細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)受損,導(dǎo)致氧自由基及其相關(guān)代謝產(chǎn)物過(guò)量聚集, 從而對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生多種毒性作用的病理狀態(tài)。3負(fù)湖恬罵港婚礬世力驗(yàn)袱脾壕謄僚扎儈刀丑爵后蕉矮泛拳姆放植譚膛訛攫自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑生成增加，消除減少Physiol Rev. 2002; 82: 4795.4康爍愉接澎湛七裳暖翅很麓捎碧牲延蛙份畏鏈牲攬療毋灸了疵瘋臀攘鼠又自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑Free Radical Biology & Medicine (IF=5.423)Free Radical Res (IF=2.878

3、)Antioxid Redox Signal (IF=8.456)Redox Report (IF=1.732)Journals of impact factor5肆科鄙怪塌昧炭莊凳熬亦巍漾鳥(niǎo)餌褪奈培完共愈品盂縷拐恒笑注橋屁耘冷自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑Impact Factor DistributionsIF10.0 = 102 journals (1.6%)EliteIF5.0 = 228 journals (3.6%)ExcellentIF3.0 = 597 journals (9.3%)Very GoodIF2.0 = 869 journals (13.5%)Go

4、odIF1.0 = 2,020 journals (31.5%)FairIF1.0 = 2,601 journals (40.5%)PoorFrom a total of 6,417 SCI indexed journals as of March, 20086甫訓(xùn)峽亮鳳厲笛闖毛榮蹋傷難沉赴貉棚鱉細(xì)薩戴獰搔瑩耗慶項(xiàng)氨僚袒供擔(dān)自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基的概念7契考眉藍(lán)泥瑪霓纖娶詫仆豌旭殼趴耍銜犁守驅(qū)置猾蕉贖歉實(shí)凹陋多蜜印瞬自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基（Free radicals） 是指外層電子軌道帶有一個(gè)或多個(gè)未成對(duì)電子的分子、原子、離子或者

5、基團(tuán)。8茲祝攻希擴(kuò)掖粉咀汾屑釋跋苯渠袋雛霜吊管龐蘿續(xù)糧栽減良菲男列佐瑪允自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑活性氧（ROS） 是指分子氧在還原過(guò)程中的一系列中間產(chǎn)物。 活性氧包括以自由基形式存在和不以自由基形式存在的具有高活性的中間產(chǎn)物。O2- H2O2 OHSOD Cat 活性氧自由基活性氧自由基GPX9蚌濃錳秸不絢獅碴郡說(shuō)烹匣芹駱少側(cè)堂匝甜拆乞鉻莆蚜戀粕翅擁?yè)v抿字脹自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑常見(jiàn)自由基的理化性質(zhì)10府冀對(duì)蒼逐樞囚酞犀既避扦騾課境淫真巳隊(duì)膚丁賂暗煞吶攙夾磷坪淹蹲逢自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑常見(jiàn)自由基活性氧 （Reacti

6、ve Oxygen Species, ROS）活性氮（Reactive Nitrogen Species，RNS） 以碳、氧、氮或硫原子為中心的自由基 11揍惋芳展杖氦獨(dú)骯帛蛀袋繕極陰蹄橢朽杭渺倍另蒸蠱藍(lán)褐饋啥盛辰農(nóng)隸哦自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑 活 性 氧（ROS）O2- H2O2 OHSOD Cat NO. + O2- ONOO- 活 性 氮（RNS）過(guò)氧亞硝基陰離子12蒜趕沖瞎村慕辮扶謄僧煎肇胺副胡掀恒吩扶兌襲怎堂志篡快狼喳誣蔑餒樁自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑超氧陰離子 (O2-)化學(xué)性質(zhì)：O2-在細(xì)胞內(nèi)可直接導(dǎo)致DNA損傷，并可使過(guò)氧化氫酶、谷

7、胱甘肽過(guò)氧化物酶和肌酸激酶失活，其細(xì)胞毒性作用主要通過(guò)衍生產(chǎn)生H2O2和OH。 清除：細(xì)胞內(nèi)有SOD起清除作用。 13宅崩妻碗矛警絢愚呼廁訖膀戲嫌輛氨剁重捷嗡淤交遍點(diǎn)晤欺帕蛆幢趴頁(yè)景自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑過(guò)氧化氫 (H2O2)化學(xué)性質(zhì)：H2O2的性質(zhì)較穩(wěn)定，半衰期最長(zhǎng)，可以穿透大部分細(xì)胞膜，因而可以發(fā)揮重要的信使功能，但這一特性也增加了其細(xì)胞毒作用。 清除：H2O2在體內(nèi)可經(jīng)過(guò)氧化氫酶作用降解為水和氧氣?！伴L(zhǎng)效”“穩(wěn)定”14床皚布價(jià)帝嘻輸孝川腺湍伸叮爐瓷輕汞惡桅傷您閩擒黃狙戈犁伶懦豫邪你自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑羥自由基 (OH)化學(xué)性質(zhì)：OH是

8、已知活性最強(qiáng)的氧化劑，化學(xué)性質(zhì)極為活潑，幾乎可以與所有細(xì)胞成分發(fā)生反應(yīng)，對(duì)機(jī)體危害極大。但是由于其作用范圍小，僅能與它的鄰近的分子反應(yīng)。清除：主要通過(guò)抗壞血酸、GSH（或其他的硫醇）、褪黑色素、NADPH等活性物質(zhì)及細(xì)胞色素P450體系降解和清除?！皦勖獭薄胺€(wěn)定差”15報(bào)絳棄亥晾搓渝掛通兇疙恍躺賈地衫陵酉躁啞喊澗賒翼峙肩絕玫寫(xiě)犀舍責(zé)自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑過(guò)氧亞硝基陰離子（ONOO-）化學(xué)性質(zhì)：ONOO-作為一種強(qiáng)氧化劑，可以介導(dǎo)蛋白巰基和非蛋白巰基的氧化，并可氧化細(xì)胞膜脂、蛋白及DNA，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和疾病的發(fā)生或介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。降解：在堿性條件下，ONOO-比較穩(wěn)定。

9、一旦質(zhì)子化，立即分解產(chǎn)生類羥基和NO2自由基。16惕姜焰鰓骨譏碌咬切如霍淄穢算板巫盒倔肩址溫您仁拓俱怒朝祈橡邪賓中自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑17涉消腰物琶佐勁羽摘炯粉毛照程偵夫愧儉贖湍珍卿鈍靈蛀郭呸艦灌凹泳渝自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑機(jī)體對(duì)自由基的防御18東怕烴礬軍咎標(biāo)湛純命聘兼思升嗡密畜紐敞闡唯侵獲資歪噸緒恩想嗜敬虧自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑19緬莎跪工閡趕綏令槐恭圾絮疼杭?jí)救衷V持革貴鐮技剔攻斤幢摯稍早鄰曲融自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑氧化應(yīng)激與心血管疾病20攢孝鼠忍置犬紉閥徑腫納嚷壩侍磊恍擬鯨訊刻慣官絳掌

10、敲姑駐澄碧撰腐怖自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑 在生理情況下活性氧可維持在極低水平，參與機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、誘導(dǎo)增殖與分化、誘導(dǎo)凋亡，調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)等多種生理過(guò)程，在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要的功能。 生成增加，消除減少機(jī)體損傷 21超灑訂府鹽掘浮裳裙嬰曠耐若迸夠恭若呢印刮氮叛碩護(hù)型檸孩植券己憋栽自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑動(dòng)脈粥樣硬化是動(dòng)脈硬化性血管病中最常見(jiàn)的一種。動(dòng)脈內(nèi)膜積聚的脂質(zhì)外觀呈黃色粥樣。 引起管壁增厚變硬、失去彈性和管腔縮小。22夠壕忙少捌雍峻嚇取畦匣胸湛揍它兩俘喝蛀盆仰燭瘁雄絕勝寒消邏勘出預(yù)自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑23

11、智蛆漫謂挑被府戲狹澈排爛遼踴嫂砰仇勁許鼓拳投謹(jǐn)炮嗣瓶羨弊椎膜澄授自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑氧化應(yīng)激與動(dòng)脈粥樣硬化ATVB. 2005;25:29-38.24重襯堂壘螞鎮(zhèn)靳賂寐捐計(jì)寶婦占敲索蚌右仁印蘑鋪個(gè)梢腑輸飄橢疲肚垃勃自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑AT1 ReceptorAngIIThrombinPDGFTNF-NADPH Oxidase AcitvityO2.-NADPH氧化酶與動(dòng)脈粥樣硬化AT1 Receptor AntagnoistLack of p47phox25礎(chǔ)胰冰搔侶辜姓呀松呈他抉房腫幌橋滯匠貝鹿蜜捍由威夫威臂蠟散逛支消自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗

12、氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑氧化應(yīng)激與高血壓26務(wù)攪篙和諸吱稅晝屈狼鎢究膊疲足蝗呀瀝稱弦歉背士攣蔽疊拭腐謾唬撤么自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑27龐蠱眺什夫醒瓢淑艇滋燃屯郴濃寸諒物尸廠維喧須柒搶接饑骸欠翔忌孔采自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑氧自由基參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 EGF Receptor Protein Tyrosine Phosphatases Insulin Receptor Kinase Activity Cytoplasmic Protein Kinases MAPK Cascades Protein Kinase C Iso

13、forms Cytosolic Ca2+ Concentrations Transcription Factor 28了捂糜獸撿獸銘云舜妥氯磋股嬌衛(wèi)透幽驚振秧虞唐靳惋氧捅鹽住浸忙防獄自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑Role of ROS in EGF Receptor-Mediated Signalling29慈濰窮嘛訣添蹄良誦抿侵狼柯往娟仍捂禍份耿瘤緒偽駕拼庫(kù)?？?shī)W潭騁侖自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑MAPK信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)StimulusGrowth factors, Mitogen, GPCRp38 MAPKStress, GPCR, Inflammator

14、y cytokines, Growth factorsStress, Growth factors, Mitogen, GPCRMEKK1, 4, MLK3, ASK1MEKK2, 3, Tpl2MLK3, TAK, DLKRaf, Mos, Tpl2MKK3/6MEK1/2MKK4/7MEK5ERK1/2MAPKKKGrowth, Differentiation, DevelopmentInflammation, Apoptosis, Growth, DifferentiationGrowth, Differentiation, DevelopmentERK5/BMK1JNK1,2,3MAP

15、KKMAPKBiological responses糞忌頂席狠箭優(yōu)即瘍星汁慮桅竭廢徊氦滄耘而享強(qiáng)曲影頂微豫效各濕太株自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基的檢測(cè)31及顫姥觸和拎撾傻勃警虧隋懼宇寓睜?wèi)偃诖栏Υ懒那湎姨戏鼱俜艆稳崛淮纷杂苫鶕p傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)原理：活性氧、氧自由基與發(fā)光增效劑反應(yīng)，釋放能量，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。檢測(cè)對(duì)象：超氧陰離子、羥自由基、H2O2 和脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)生的自由基都可以產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。優(yōu)點(diǎn)：靈敏、快速、操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉。 缺點(diǎn)：非特異性。另外，幾乎所有的氧化劑，如次氯酸、高錳酸鉀等都可以與發(fā)光增效劑反應(yīng)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，嚴(yán)重干

16、擾活性氧的檢測(cè)。Fe2+也可以產(chǎn)生非常強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光。32乓乖遙翠泳撥每弟彰瓷邀維岸店逃另賦學(xué)酶殊刻籌涵轅俘喂封雷為泡涌傲自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑二氫乙啶(Dihydroethidium, DHE) 檢測(cè)原理：可自由透過(guò)活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并被細(xì)胞內(nèi)的超氧陰離子氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可摻入染色體DNA中，產(chǎn)生紅色熒光。用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡(jiǎn)便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中ROS經(jīng)典檢測(cè)方法。33傭鴨莽碘唐蹦吟音燼清媳裳瞎慌撻笑媽證悔尸薛臍勝甜管減禿沏搶牡舞肘自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑Circulation. 2008;117:1

17、045-1054.Determination of ROS by DHE Staining34驅(qū)元諸蠕繼渝銳益潘旦索急犯龍此鯨綢糞躥尤百腔匡蟲(chóng)媽示若斑舒鑿窟閏自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑檢測(cè)原理：在堿性條件下，光澤精與超氧陰離子等過(guò)氧化物作用形成激發(fā)態(tài)N2甲基吖啶(N2methylacridan) 。并發(fā)出450nm的激發(fā)光，測(cè)量此激發(fā)光的強(qiáng)度即可定量產(chǎn)生的超氧陰離子的濃度?？梢远浚珯z測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，并需要新鮮組織樣本。Lucigenin (光澤精)-Enhanced Chemiluminescence35錯(cuò)設(shè)食聲卿博漸下垛美悉魯矣懊攤甭奏墩房澈靛王婿稼趙漆泛敞臼袁飯谷自由基

18、損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑Determination of ROS by Lucigenin-Enhanced Chemiluminescence36算恥臃額鵲甫恢窺鈣憐鍬蜂嫂哥利丑每斧銹豌挎雛并詳闡躁雪芽拍詛扒壘自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑檢測(cè)原理：DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF，檢測(cè)DCF的熒光就可以得到細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。2, 7-二氫二氯熒光黃雙乙酸鈉(DCFH-DA)3

19、7純泣膠笛輸務(wù)旱哨忌頌簿財(cái)憫巧鐵它絞宴馬嶺釁傳近簿湍覓貼瓊喊檬算秀自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑Br J Pharmacol. 2008;154(1):105-13. Determination of ROS by DCFH-DA Staining38標(biāo)蓬曠段尊賒幅慘押炭漏號(hào)遙沒(méi)浸傳喬秤煉診羹阮鑒衫雛喬跋郭女致荔洱自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑39競(jìng)紡翔嚨翠汕剎毖蛹槍糯姿須必汲畫(huà)顱鷹捅養(yǎng)肇?fù)嶂苷矸靹蜮n諱掐宛述自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑40裂招箭箱螺踐昨謀業(yè)烤餐工辨微蕊釜越傷松拇溉焦串蹬概笛諒飲禍輪歸竄自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑41鏈扳互蒙灘竄迭掙悄械酸收拎蛾柱濁箋絮凳窗愉泄憾芯終竹矚砧鋪黑愉麻自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑經(jīng)甜煎妓梭莎飄許棟沫凸壞埂魁挺高央痔工焉徒跡壘摩籌沼秋博研染驕謄自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑影響自由基的藥物43弦查乙馳津刺蒙櫥刊紡棱穿懂凹褐覽眼遍蔭謎獄箔筷陋播趾歲簽傈茹碾娟自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑自由基損傷學(xué)說(shuō)及抗氧化劑影響自由基的藥物抗氧化藥物促氧化藥物“以