75%乙醇、0.1%新潔爾滅消毒效果驗證方案

1、75%乙醇、0.1%新潔爾滅消毒效果驗證方案驗證編號：QC-VAL-535-01蘇州萬慶藥業(yè)有限公司2010年月驗證方案確定報告確定部門姓名簽名日期起草QC復(fù)核QC審核QCQA批準QualityDirector目錄TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark10 驗證方案介紹、目的、范圍、相關(guān)文件1 HYPERLINK l bookmark12 驗證準備.1 HYPERLINK l bookmark14 驗證內(nèi)容3 HYPERLINK l bookmark16 變更與偏差7 HYPERLINK l bookmark18 5驗證結(jié)論8 HYPERLINK l bookma

2、rk20 附件8 HYPERLINK l bookmark22 參考文獻8蘇州萬慶藥業(yè)有限公司QC-VAL-535-01蘇州萬慶藥業(yè)有限公司QC-VAL-535-01第 頁共8頁第 頁共8頁驗證方案簡介、目的、范圍、相關(guān)文件1.1驗證方案簡介：本驗證共分三部分：第一部分是對驗證方案的介紹，包括驗證目的、范圍以及相關(guān)驗證、文件的介紹。第二部分是驗證的相關(guān)內(nèi)容：75%乙醇及0.1%新潔爾滅的噴灑消毒效果試驗。驗證在微生物實驗室陽性菌對照室完成。第三部分是驗證結(jié)論及再驗證。1.2目的通過噴灑消毒的方法驗證75%乙醇及0.1%新潔爾滅在實驗室條件下對各種載體上已知菌的消毒效果，為其正確使用提供保障。范

3、圍本驗證方案適用于本公司微生物實驗室及其他潔凈環(huán)境需要外表面清潔消毒的物料。1.4驗證相關(guān)文件序號文件名稱文件號執(zhí)行日期1微生物實驗室管理規(guī)程QC546-012007-11-262菌種菌液的制備、儲存、使用操作規(guī)程QC505-012007-11-263潔凈區(qū)空氣潔凈度監(jiān)測操作規(guī)程QC510-042010-11-014培養(yǎng)基緩沖液配及無菌包裝棉拭子管理規(guī)程QC506-022010-11-065微生物實驗室潔凈區(qū)清潔消毒規(guī)程QC548-012007-12-28驗證準備2.1試驗儀器和設(shè)備設(shè)備型號編號校驗有效期至生化培養(yǎng)箱(3035C)霉菌培養(yǎng)箱(2025C)精密移液器生物安全柜咼壓蒸汽火菌柜2.2

4、試驗用品試驗用品批號來源有效期至尢菌塑料吸頭（1.0ml）無菌空平皿（90mm）大豆胰蛋白瓊脂（TSA）大豆胰蛋白肉湯（TSB）薩布羅瓊脂（SDA）薩布羅肉湯（SDB）TSA培養(yǎng)皿表面接觸性培養(yǎng)皿pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液2.3菌種及菌液菌種名稱菌種代號菌種批號菌液批號金黃色匍萄球菌(Staphylococcusaureus)大腸埃希菌(Escherichiacol)銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginos)枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis)白色念珠菌(Candidaalbicans)黑曲霉(Aspergill

5、usniger人表皮匍萄球(Staphylocococcushominis)2.4消毒劑名稱來源原始批號有效期至配制濃度配制批號自制消毒劑效期75%乙醇0.1%新潔爾滅2.5載體軟塑料（自封袋、取樣袋），硬質(zhì)塑料（桶、校驗儀器外殼、噴壺、計算器、寫字板），不銹鋼（桶、盒、器具），紙張（標示卡），玻璃（玻璃瓶），潔凈服面料（布袋），橡膠（橡膠手套），鋁合金。驗證內(nèi)容3.1菌液制備：3.1.1將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌接種至大豆胰蛋白肉湯培養(yǎng)基（TSB）中，在3035C培養(yǎng)1824小時；枯草芽抱桿菌劃線接種至大豆胰蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上,在3035C培養(yǎng)1824小時后洗脫瓊脂表

6、面菌苔；白色念珠菌接種于薩布羅葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（SDB）中，在2025C培養(yǎng)4872小時；黑曲霉菌劃線接種至薩布羅葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）上,在2025C培養(yǎng)57天，洗脫瓊脂表面抱子；吸取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌增菌后的培養(yǎng)物各1ml加入到9mlpH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中，充分混勻后作為10-1稀釋級，依次10倍稀釋至10-7稀釋級計數(shù)確認菌數(shù)，同時預(yù)留10-2稀釋級作為菌片制備使用；吸取白色念珠菌增菌后的培養(yǎng)物及黑曲霉抱子液各1ml加入到9mlpH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中，充分混勻后作為10-1稀釋級，依次10倍稀釋至10-5稀釋級計數(shù)確認菌數(shù)，同時預(yù)留

7、濃菌液作為菌片制備使用。3.1.2菌液計數(shù)：吸取1ml上述菌液置無菌空平皿中，傾倒溫度不超過45C的TSA或SDA培養(yǎng)基，平行傾到2個平板，細菌用TSA培養(yǎng)基在30-35C培養(yǎng)72h后觀察最終結(jié)果，真菌用SDA培養(yǎng)基在20-25C培養(yǎng)5天后觀察最終結(jié)果。3.1.3菌液計數(shù)結(jié)果：試驗菌稀釋級計數(shù)結(jié)果cfu/皿平均值濃菌液菌數(shù)cfu/ml金黃色匍萄球菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉3.2菌片的制備：3.2.1試驗中使用的菌片是以菌懸液滴加于載體上制成。載體是根據(jù)消毒對象選擇常用材質(zhì)如軟塑料（自封袋、取樣袋），硬質(zhì)塑料（桶、校驗儀器外殼、噴壺、計算器、寫字板），不銹鋼（桶、盒、器

8、具），紙張（標示卡），玻璃（玻璃瓶），潔凈服面料（布袋），橡膠（橡膠手套），鋁合金，規(guī)格均為5X5cm；3.2.2所用載體于染菌前，應(yīng)進行脫脂處理。脫脂方法如下：將載體放在含肥皂的水中煮沸30min；而后以自來水洗凈；用純化水煮沸10min；用純化水漂洗；晾干備用。3.2.3載體經(jīng)壓力蒸汽滅菌（耐濕熱滅菌載體）或用75%乙醇浸泡消毒后晾干（不耐濕熱滅菌載體），統(tǒng)一使用滴染法：將經(jīng)滅菌的載體片平鋪于無菌平皿內(nèi)，逐片滴加菌液。菌液滴加量每片為0.1ml，細菌選擇10-2稀釋級，真菌選擇原菌液。用精密移液器接無菌吸頭，滴染菌液，并用接種環(huán)涂勻整個載體表面。滴染菌液后置室溫下自然陰干后再使用。每種菌對

9、應(yīng)的一種載體制備4片。注：菌片含菌量應(yīng)為5x103-fu/片。3.3菌片菌數(shù)確定：3.3.1取一片已制備好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、人表皮葡萄球菌菌片，完全浸泡于100mlpH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中反復(fù)蕩洗15分鐘，將此蕩洗液作為10-2稀釋級，然后吸取1ml蕩洗液加入到9mlpH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中，混勻作為10-3稀釋級，同法再進行10倍至10-5稀釋級，吸取1ml置無菌空平皿中，傾倒融化的溫度不超過45C的TSA培養(yǎng)基，平行傾到2個平板，先置于在20-25C培養(yǎng)3天，再置于30-35C培養(yǎng)2天，觀察最終結(jié)果；取一片已制備好的白色念珠菌菌片，完全浸

10、泡于100mlpH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中反復(fù)蕩洗15分鐘，將此蕩洗液作為10-2稀釋級，然后吸取1ml蕩洗液加入到9mlpH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中，混勻作為10-3稀釋級，同法再進行10倍至10-4稀釋級，吸取1ml置無菌空平皿中，傾倒融化的溫度不超過45C的TSA培養(yǎng)基，平行傾到2個平板，先置于在20-25C培養(yǎng)3天，再置于30-35C培養(yǎng)2天，觀察最終結(jié)果；取一片已制備好的黑曲霉菌片，完全浸泡于100ml含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中反復(fù)蕩洗15分鐘，將此蕩洗液作為10-2稀釋級，然后吸取1ml蕩洗液加入到9ml含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉蛋

11、白胨緩沖液中，充分混勻后作為10-3稀釋級，吸取1ml置無菌空平皿中，傾倒融化的溫度不超過45C的TSA培養(yǎng)基，平行傾到2個平板，先置于在20-25C培養(yǎng)3天，再置于30-35C培養(yǎng)2天，觀察最終結(jié)果。3.3.2菌片菌數(shù)確定結(jié)果：試驗菌載體結(jié)果金黃色葡萄球菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念株菌黑曲霉表皮匍萄球菌軟塑料細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌數(shù)硬質(zhì)塑料細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌數(shù)不銹鋼細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌數(shù)紙張細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌數(shù)玻璃細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均

12、菌片菌數(shù)試驗菌載體結(jié)果金黃色葡萄球菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念株菌黑曲霉表皮匍萄球菌潔凈服面料細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌數(shù)橡膠細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌數(shù)鋁合金細菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌數(shù)3.3.3合格標準：回收菌片的含菌量應(yīng)應(yīng)不小于105cfu/片。3.4載體噴灑消毒殺菌效力試驗：3.4.1選擇常用于噴灑消毒的物料材質(zhì)進行試驗。3.4.2每種菌所染菌片應(yīng)分開進行試驗，試驗時，每種載體菌片各取1片，每次噴霧量于實際試驗操作要求一致且距離和壓力保持相同，使噴到物料載體上的霧粒大小和數(shù)量一致。3.4.3待噴灑載體

13、表面充分揮發(fā)至干。3.4.4按照QC510-04潔凈區(qū)表面的微生物監(jiān)測程序?qū)ζ秸饣谋砻孢M行接觸碟取樣。3.4.5接觸碟取樣：取樣時打開碟蓋，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣表面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板確保全部瓊脂表面與取樣點表面均勻接觸10秒鐘左右，再蓋上碟蓋，做好標記；接觸碟先在2025C培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，然后在3035C培養(yǎng)箱培養(yǎng)2天，觀察最終結(jié)果。3.4.6試驗重復(fù)3次，計數(shù)各組的活菌量（cfu/片），計算殺滅對數(shù)值。（結(jié)果保留到小數(shù)點后兩位）殺滅對數(shù)值=試驗前菌片活菌濃度的對數(shù)值一試驗后菌片活菌濃度的對數(shù)值3.4.7合格標準：要求各次試驗的殺滅對數(shù)值均三3，可判定消毒合格。3.4.8載體擦

14、拭消毒殺菌效力試驗結(jié)果：（載體：軟塑料，硬質(zhì)塑料，不銹鋼，紙張，玻璃，潔凈服面料，橡膠，鋁合金。）、結(jié)果試驗菌f消毒劑批號載體結(jié)果cfu/皿殺滅對數(shù)值陰性對照結(jié)論金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus大腸埃希菌Escherichiacoli銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginosa枯草芽抱桿菌Bacillussubtilis白色念珠菌Candidaalbicans黑曲霉Aspergillusniger表皮匍萄球菌Staphylocococcushominis變更與偏差4.1在執(zhí)行驗證過程中，檢測人員需要及時記錄出現(xiàn)的任何偏差，并按照相關(guān)操作規(guī)程處理。4.2本驗證方案批準實施之后，任何的變更需要按照相關(guān)操作規(guī)定，由申請人提出書面申請，交由驗證小組審核，批準之后，方能執(zhí)行變更。驗證結(jié)論5.1驗證完成之后，匯總所有檢測數(shù)據(jù)，進行統(tǒng)計分析。由驗證部門起草驗證報告，總結(jié)驗證結(jié)論，并交由相關(guān)部門審核，批準。5.2當檢測數(shù)據(jù)滿足下列規(guī)定時，方可認為驗證合格：5.3統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明所有的檢測數(shù)據(jù)均在規(guī)定的范圍內(nèi)；5.4如果檢測數(shù)據(jù)不符合規(guī)定標準，經(jīng)偏差調(diào)查發(fā)現(xiàn)是由與驗證人員無關(guān)的因素造成的，并經(jīng)審核批準。附件6.1原始記錄1菌液制備；6.2原始記錄2載體制備；6.3原始記