基質(zhì)金屬蛋白酶MMP

1、基質(zhì)金屬卵白酶MMP彭惠,洪蘇玲,陶永賢,彭彥,姜蓉【關(guān)鍵詞】糖尿病視網(wǎng)膜病變；RTExpressinfatrixetallprtEinase2RNAinretinafdiabetihaster【Keyrds】diabetiretinpathy；RTPR；atrixetallprteinases；diabetihaster【摘要】目的：探究基質(zhì)金屬卵白酶(P2)在糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)產(chǎn)生生長(zhǎng)中的作用及其機(jī)制.要領(lǐng)：用鏈脲佐菌素STZ誘導(dǎo)蒼鼠糖尿病模子，提取視網(wǎng)膜中總RNA，半定量RTPR不雅察視網(wǎng)膜中P2RNA表達(dá)環(huán)境，HE染色不雅察光鏡下視網(wǎng)膜的形態(tài)特性及變革，血清學(xué)檢測(cè)蒼鼠血清甘油三酯

2、(TG)，總膽固醇(T)和電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)胰島素水同等變革.效果：糖尿病蒼鼠不但表現(xiàn)為高血糖,還表現(xiàn)為高TG血癥.視網(wǎng)膜中P2RNA表達(dá)呈升高趨勢(shì),與正常比擬組比擬于造模后16k末時(shí)即差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05).結(jié)論：此為研究基質(zhì)金屬卵白酶到場(chǎng)DR的發(fā)病機(jī)制提供了根據(jù).【關(guān)鍵詞】糖尿病視網(wǎng)膜病變；RTPR；基質(zhì)金屬卵白酶；糖尿病蒼鼠0弁言糖尿病視網(wǎng)膜病變diabetiretinpathy,DR的產(chǎn)生氣制至今尚未完全闡發(fā)，細(xì)胞外基質(zhì)E，包羅基底膜的代謝非常被以為是產(chǎn)生DR時(shí)血管成效停滯的病理學(xué)底子.基質(zhì)金屬卵白酶Ps是一類(lèi)Zn2+依靠的卵白水解酶，到場(chǎng)E的落解代謝.本研究應(yīng)用鏈脲佐菌素st

3、reptztin,STZ誘導(dǎo)蒼鼠糖尿病模子，不雅察視網(wǎng)膜中P2表達(dá)環(huán)境，為研究其在DR中的作用提供根據(jù).1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1STZ誘導(dǎo)蒼鼠糖尿病模子8k雄性倉(cāng)鼠,體質(zhì)量110130g,禁食12h后,腹腔注射STZ溶液40g/kg體質(zhì)量,一連3d.德國(guó)拜耳公司快速血糖儀測(cè)定尾尖血空服血糖(氧化酶試紙法),血糖不變7d后,選用血糖13.5l/L的倉(cāng)鼠為糖尿病(D)倉(cāng)鼠(13只).實(shí)行一連16k,每2k測(cè)倉(cāng)鼠體質(zhì)量,血糖.正常比擬組(N)倉(cāng)鼠(10只)予腹腔注射等體積檸檬酸鈉檸檬酸緩沖液.1.2白臘切片HE染色與不雅察取眼球結(jié)實(shí)后標(biāo)本通例脫水，白臘包埋，做5一連切片，按HE染色通例操縱舉行，不雅察每組

4、視網(wǎng)膜在光鏡下的形態(tài)特性及其變革.1.3血清學(xué)檢測(cè)全主動(dòng)生化闡發(fā)儀測(cè)定倉(cāng)鼠靜脈血血清甘油三酯(TG)和總膽固醇(T).電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)胰島素程度.1.4視網(wǎng)膜中總RNA制備實(shí)行動(dòng)物于16k在測(cè)體質(zhì)量及空腹血糖后摘除眼球，剝離視網(wǎng)膜，液氮保存.Trizl美國(guó)Invitrgen公司提取總RNA，測(cè)定純度和含量，10g/L甲醛變性凝膠電泳測(cè)其完備性.1.5半定量RTPR總RNA5g用逆轉(zhuǎn)錄酶SupersriptT11RT美國(guó)Invitrgen公司合成DNA第一鏈:P2上游和卑劣引物為5TGATTGAAGAAA3和5GGATATATGTT3;肌動(dòng)卵白上游和卑劣引物為5GTGGGGGGGAA3和5TTT

5、AATGTAGAGATTT3.擴(kuò)增條件為：P294預(yù)變性5in，941in,4950s,7245s共27個(gè)循環(huán)，72延伸5in，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為169bp；肌動(dòng)卵白引物在擴(kuò)增5個(gè)循環(huán)后參加，長(zhǎng)度為500bp.15g/L瓊脂糖凝膠電泳，BiRAD凝膠成像體系照相，SXiage軟件闡發(fā)，P2RNA含量用P2與肌動(dòng)卵白吸光度面積的比值表現(xiàn).統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰：本研究數(shù)據(jù)以xs表現(xiàn)，接納兩樣本均數(shù)比力的t查驗(yàn)舉行統(tǒng)計(jì)學(xué)闡發(fā).2效果2.1兩組血糖及體質(zhì)量的變革實(shí)行開(kāi)始時(shí),N組和D組倉(cāng)鼠體質(zhì)量別離為(1236)g和(1255)g,兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05).實(shí)行竣事時(shí),N組體質(zhì)量(13310)g與實(shí)行開(kāi)

6、始時(shí)無(wú)明顯變革(P0.05),而D組倉(cāng)鼠體質(zhì)量在實(shí)行第16k時(shí)落至(9815)g,前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01).實(shí)行開(kāi)始和竣事時(shí),D組血糖水均勻顯著高于N組(P0.01);實(shí)行16k時(shí)胰島素程度明顯低于N組(P0.01，表1).表1正常比擬組和糖尿病蒼鼠組的體質(zhì)量、胰島素和血糖程度(略).2.2正常比擬組和糖尿病鼠視網(wǎng)膜在光鏡下的形態(tài)特性和變革見(jiàn)圖13.2.3倉(cāng)鼠血脂變革正常比擬組TG，T程度別離為(1.770.21)，(3.560.37)l/L;糖尿病組TG為6.542.04,顯著高于正常比擬組(P0.01);而T程度(5.212.07)l/L與正常比擬組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05

7、).3討論DR是糖尿病的嚴(yán)峻并發(fā)癥之一，表現(xiàn)為微循環(huán)布局及成效上的紊亂，終極新生血管的形成.而在血管內(nèi)皮細(xì)胞遷徙和增殖歷程中，內(nèi)皮細(xì)胞四周的E必需有選擇地落解，操縱這一運(yùn)動(dòng)重要的就是Ps家屬.Ps是一族到場(chǎng)E落解、其活性依靠金屬離子Zn2+的龐大卵白酶家系.重要分為4大類(lèi)：膠原酶：包羅P1和神經(jīng)膠原P8，作用基質(zhì)為纖維性膠原I，II和III；明膠酶：重要包羅P2和P9，是血管內(nèi)皮下基質(zhì)IV型膠原落解的關(guān)鍵卵白水解酶，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的游走起緊張作用；基質(zhì)溶解素：P3和P7，作用底物普及包羅卵白多糖、層粘卵白、彈性卵白、明膠和前膠原前肽；膜型基質(zhì)卵白酶：TP3.它的重要成效是：落解細(xì)胞外基質(zhì)膜有用

8、身分、調(diào)治粘著、作用于細(xì)胞外組分其他卵白身分而啟動(dòng)埋伏的生物學(xué)成效、直接或間接到場(chǎng)胚胎發(fā)育、構(gòu)造模子再塑及創(chuàng)傷修復(fù)等正常生理歷程.顯然本實(shí)行效果可以證明P2到場(chǎng)了早期糖尿病模子視網(wǎng)膜布局的重塑，對(duì)新生血管的產(chǎn)生大概有緊張作用.DRPs表達(dá)隨病程希望升高，這大概是由于隨著視網(wǎng)膜毛細(xì)血管基底膜的不竭增厚，可致視網(wǎng)膜毛細(xì)血管大量局促乃至閉塞，導(dǎo)致視網(wǎng)膜缺血、缺氧，由于缺氧可促使血管內(nèi)皮細(xì)胞在局部開(kāi)釋細(xì)胞因子(如TNF，IL1)和血管活性物質(zhì)(VEGF)誘導(dǎo)了Ps的表達(dá)升高，使視網(wǎng)膜毛細(xì)血管基底膜的加快落解，容許內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生遷徙，隨著增殖的內(nèi)皮細(xì)胞打仗新的E大概產(chǎn)生的Ps的范例和或程度也就會(huì)差異了4-

9、5.如今外洋的研究多會(huì)合于對(duì)DR晚期階段(prliferativediabetiretinpathy,PDR)已形成的新生血管膜舉行闡發(fā)，而在此時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)的運(yùn)動(dòng)性生長(zhǎng)和重塑早已啟動(dòng).這重要是由于新生血管的形成包羅毛細(xì)血管內(nèi)皮層下基底膜落解，內(nèi)皮細(xì)胞遷徙和增殖，新生血管形成和新的基底膜形成等一系列歷程.視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的基底膜增厚及壁內(nèi)周細(xì)胞的喪失是險(xiǎn)些全部的DR早期構(gòu)造學(xué)改變的一個(gè)標(biāo)記，基底膜的增厚能影響很多成效如血管通透性，細(xì)胞粘附、增殖分化及基因表達(dá)等，其身分的改變一定引起血管成效非常8.在形成細(xì)胞外基質(zhì)的兩大部門(mén)即基底膜和間質(zhì)中以IV型膠原為重要身分的基底膜組成一道停滯屏蔽，IV

10、型膠原酶P2)可以作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的“開(kāi)路前鋒落解基底膜.體外實(shí)行研究也證明了IV型膠原酶到場(chǎng)微血管基底膜的落解代謝歷程6.因此Bishp7就指出假設(shè)我們能加深對(duì)IV型膠原即基底膜膠原的落解等血管形成的早期運(yùn)動(dòng)的明白將會(huì)更有大概給我們提示以尋到新的治療要領(lǐng).【參考文獻(xiàn)】1KernTS,EngeranRL.parisnfretinallesinsinallxandiabetiratsandgalatsefedratsJ.urrEyeRes，1994,13:863-867.2Siinesu,PpvD,SiaA,etal.Pathbiheistrybineddiabetesandatherslers

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