培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化

1、 培養(yǎng)液中酵母菌 種群數(shù)量的變化探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化目的要求目的要求1、學(xué)習(xí)利用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物計數(shù)的方法、學(xué)習(xí)利用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物計數(shù)的方法2、實驗探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化、實驗探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化3、注意樣方法的應(yīng)用、注意樣方法的應(yīng)用4、體會影響種群數(shù)量變化的因素、體會影響種群數(shù)量變化的因素1、酵母菌的繁殖方式主要是、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是、酵母菌的呼吸方式是:兼性厭氧兼性厭氧(可進(jìn)行有氧呼吸和無氧呼吸可進(jìn)行有氧呼吸和無氧呼吸)回顧思考回顧思考: :出芽生殖出芽生殖3、酵母菌的培養(yǎng)條件要注意

2、那些問題、酵母菌的培養(yǎng)條件要注意那些問題?比如要用適宜的溫度培養(yǎng)比如要用適宜的溫度培養(yǎng),調(diào)節(jié)好調(diào)節(jié)好PH值值,溶氧溶氧量的控制等。量的控制等。一、血球計數(shù)板1、血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu) 血球計數(shù)板是一種專門用于計算較大血球計數(shù)板是一種專門用于計算較大單細(xì)胞微生物數(shù)量的儀器，由一塊比普單細(xì)胞微生物數(shù)量的儀器，由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的玻片中有通載玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四條下凹的槽，構(gòu)成三個平臺。中間的四條下凹的槽，構(gòu)成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面刻有一個半，每半邊上面刻有一個方格網(wǎng)方格網(wǎng)。 大方格中方格小方格 方格網(wǎng)

3、上刻有方格網(wǎng)上刻有9個個大方格，其中只有大方格，其中只有中間的一個大方格中間的一個大方格為為計數(shù)室計數(shù)室，供微生，供微生物計數(shù)用物計數(shù)用。 大方格的長和寬各為大方格的長和寬各為1mm，深度，深度為為0.1mm，即，即1mm1mm0.1mm，其容積為其容積為0.1mm3； 大方格的長和寬各為大方格的長和寬各為2mm，深度為，深度為0.1mm，即，即2mm2mm0.1mm，其，其容積為容積為0.4mm3計數(shù)室通常也有兩種規(guī)格計數(shù)室通常也有兩種規(guī)格1625型： 即大方格內(nèi)分為16中格，每一中格又分為25小格2516型： 即大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格。 不管計數(shù)室是哪一種構(gòu)造，其每一

4、大方格都是由1625=2516=400個小方格組成。 2、計數(shù)1625型： 一般取四角的一般取四角的四個中方格（四個中方格（100個小方格）計數(shù)個小方格）計數(shù)2516型： 一般計數(shù)四個角一般計數(shù)四個角和中央的五個中方和中央的五個中方格（格（80個小方格）個小方格）的細(xì)胞數(shù)。的細(xì)胞數(shù)。 3、計算 以以1mm1mm0.1mm型為例型為例 計數(shù)室容積為0.1mm3，則每個小方格的容積，則每個小方格的容積為為1/4000 mm3 。100個小方格細(xì)胞總數(shù)個小方格細(xì)胞總數(shù)/ 100 40010000稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 酵母細(xì)胞個數(shù)酵母細(xì)胞個數(shù)1mL =80個小方格細(xì)胞總數(shù)個小方格細(xì)胞總數(shù)/ 80 4001

5、0000稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 例1 通常用血球計數(shù)板對培養(yǎng)液中酵母菌進(jìn)行計數(shù)，若計數(shù)室為1mm1mm0.1mm方格，由400個小方格組成。若多次重復(fù)計數(shù)后，算得每個小方格中平均有5個酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有 個。2108例2 檢測員將1 mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍(lán)藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數(shù)室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數(shù)室由2516400個小格組成，容納液體的總體積為01 mm3。 現(xiàn)觀察到圖中該計數(shù)室所示a、b、c、d、e 5個中格80個小格內(nèi)共有藍(lán)藻n個，則上述水樣中約有藍(lán)藻 個mL。 5n1054、血球計

6、數(shù)板的使用方法步驟 計數(shù)：計數(shù)： 稍待片刻（約稍待片刻（約5min），待酵母菌細(xì)胞全部沉降），待酵母菌細(xì)胞全部沉降到計數(shù)室底部后，將計數(shù)板放在載物臺的中央，先在到計數(shù)室底部后，將計數(shù)板放在載物臺的中央，先在低倍鏡下找到計數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、低倍鏡下找到計數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、計數(shù)并記錄。計數(shù)并記錄。 鏡檢計數(shù)室：鏡檢計數(shù)室： 在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計數(shù)。有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計數(shù)。 加樣品：加樣品： 將清潔干燥的血球計數(shù)板的計數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，將清潔干燥的血球計數(shù)

7、板的計數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣，讓培，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，一次性充滿計數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，養(yǎng)液自行緩緩滲入，一次性充滿計數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，充入細(xì)胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與蓋玻片之間的矩充入細(xì)胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與蓋玻片之間的矩形邊緣為宜形邊緣為宜。多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去。多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去。5、血球計數(shù)板的使用注意事項 從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前，要將試管從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前，要將試管輕輕輕輕震蕩震蕩幾下，這樣使酵母菌分布均勻，防止酵幾下，這樣使酵母菌分布均勻，防止酵母凝聚

8、沉淀，提高計數(shù)的代表性和準(zhǔn)確性，求得母凝聚沉淀，提高計數(shù)的代表性和準(zhǔn)確性，求得的培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量誤差小。的培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量誤差小。 如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對培如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對培養(yǎng)液進(jìn)行養(yǎng)液進(jìn)行稀釋稀釋以便于酵母菌的計數(shù)。具體方法是：搖勻以便于酵母菌的計數(shù)。具體方法是：搖勻試管，取試管，取1mL酵母菌培養(yǎng)液，加入成倍的無菌水稀釋，酵母菌培養(yǎng)液，加入成倍的無菌水稀釋，稀釋稀釋n倍后，再用血球計數(shù)板計數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍后，再用血球計數(shù)板計數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有45個酵母細(xì)胞為宜。特別是個酵母細(xì)胞為宜

9、。特別是在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計數(shù)。在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計數(shù)。 對于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當(dāng)計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊對于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當(dāng)計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的菌體數(shù)，一般可采取上的菌體數(shù)，一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線數(shù)右線”的原則處理，另兩邊不計數(shù)。的原則處理，另兩邊不計數(shù)。 對每個樣品可計數(shù)三次，再對每個樣品可計數(shù)三次，再取其平均值。取其平均值。 計數(shù)時應(yīng)不時計數(shù)時應(yīng)不時調(diào)節(jié)焦距調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的菌體。，才能觀察到不同深度的菌體。 血球計數(shù)板使用后，用自來水沖洗，血球計數(shù)板使用后，用自來水沖洗，切切勿用硬物洗刷勿用硬物洗刷，以免損

10、壞網(wǎng)格。，以免損壞網(wǎng)格。 1 1、研究過程研究過程測定測定定期取樣定期取樣測細(xì)胞數(shù)目測細(xì)胞數(shù)目2 2、測定方法測定方法測重量測重量濕重濕重干重干重（一）研究方法（一）研究方法二、微生物的種群數(shù)量變化在恒定容積液體在恒定容積液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)時間時間01234細(xì)菌的生長曲線細(xì)菌的生長曲線（二）種群數(shù)量變化規(guī)律（二）種群數(shù)量變化規(guī)律1：調(diào)整期調(diào)整期2：對數(shù)期對數(shù)期3：穩(wěn)定期穩(wěn)定期4：衰亡期衰亡期細(xì)菌細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)數(shù)目的對數(shù)時間時間01234細(xì)菌的細(xì)菌的生長速率生長速率時間時間01234細(xì)菌生長曲線細(xì)菌生長曲線細(xì)菌生長速率細(xì)菌生長速率曲線該怎樣畫曲線該怎樣畫呢？

11、呢？ 目的：使微生物的生長較長時間的維持在穩(wěn)定期。目的：使微生物的生長較長時間的維持在穩(wěn)定期。 優(yōu)點(diǎn)：縮短了培養(yǎng)周期優(yōu)點(diǎn)：縮短了培養(yǎng)周期,提高設(shè)備利用率提高設(shè)備利用率,便于自動便于自動化管理?；芾?。連續(xù)培養(yǎng)例例2 2 （0808江蘇卷）為研究酵母菌種群密度的動態(tài)變化，江蘇卷）為研究酵母菌種群密度的動態(tài)變化，某同學(xué)按下表所列條件進(jìn)行了某同學(xué)按下表所列條件進(jìn)行了A A、B B、C C和和D D 共共4 4組實驗，組實驗，用用1 000mL1 000mL錐形瓶作為培養(yǎng)器皿，棉塞封口，在錐形瓶作為培養(yǎng)器皿，棉塞封口，在2525下靜下靜置培養(yǎng)，其他實驗條件均相同，定時用血球計數(shù)板計數(shù)。置培養(yǎng)，其他實驗

12、條件均相同，定時用血球計數(shù)板計數(shù)。根據(jù)實驗結(jié)果繪出的酵母菌種群密度變化曲線圖如下，根據(jù)實驗結(jié)果繪出的酵母菌種群密度變化曲線圖如下，請分析回答以下問題。請分析回答以下問題。1）圖中曲線）圖中曲線、和和分別是分別是_組、組、_組和組和_組的結(jié)果。組的結(jié)果。D BA2）B組和組和A組的實驗結(jié)果不同的原因組的實驗結(jié)果不同的原因是是B組組_。培養(yǎng)液較多，與空氣接觸面積較小，故供氧較少培養(yǎng)液較多，與空氣接觸面積較小，故供氧較少 3）D組和組和B組的實驗結(jié)果不同的原因是組的實驗結(jié)果不同的原因是D組組_。葡萄糖濃度較低，故營養(yǎng)物供應(yīng)較少葡萄糖濃度較低，故營養(yǎng)物供應(yīng)較少 4）在整個實驗過程中，直接從靜置的培養(yǎng)瓶

13、中取培養(yǎng)原）在整個實驗過程中，直接從靜置的培養(yǎng)瓶中取培養(yǎng)原液計數(shù)的做法是錯誤的，正確的方法是液計數(shù)的做法是錯誤的，正確的方法是 和和 。搖勻培養(yǎng)液后再取樣搖勻培養(yǎng)液后再取樣 培養(yǎng)后期的樣液稀釋后再計數(shù)培養(yǎng)后期的樣液稀釋后再計數(shù) 5）實驗結(jié)束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數(shù)板）實驗結(jié)束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數(shù)板的做法是錯誤的，正確的方法是的做法是錯誤的，正確的方法是 浸泡和沖洗浸泡和沖洗 細(xì)菌細(xì)胞數(shù)目的測定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)目的測定待測樣品待測樣品等量的已知含等量的已知含量的紅細(xì)胞量的紅細(xì)胞 混勻混勻涂抹涂抹紅細(xì)胞紅細(xì)胞細(xì)菌細(xì)菌測定：測定：紅細(xì)胞數(shù)目紅細(xì)胞數(shù)目細(xì)菌數(shù)目細(xì)菌數(shù)目計算單位體積計算單位

14、體積內(nèi)的細(xì)菌數(shù)目內(nèi)的細(xì)菌數(shù)目細(xì)菌重量的測定細(xì)菌重量的測定取樣：取一定體積的培養(yǎng)液取樣：取一定體積的培養(yǎng)液離心分離、反復(fù)洗滌離心分離、反復(fù)洗滌稱濕重稱濕重烘干稱干重烘干稱干重 1、調(diào)整期采用對數(shù)期的菌體作為菌種、采用對數(shù)期的菌體作為菌種、增加接種量、增加接種量、代謝活躍；體積增大；分裂遲緩。代謝活躍；體積增大；分裂遲緩。適應(yīng)新環(huán)境適應(yīng)新環(huán)境1）主要特征：）主要特征：2）原因：）原因：3）人工控制（縮短調(diào)整期）：）人工控制（縮短調(diào)整期）：個體：代謝旺盛；分裂最快；個體形態(tài)和個體：代謝旺盛；分裂最快；個體形態(tài)和 生理特征穩(wěn)定。生理特征穩(wěn)定。群體：繁殖死亡群體：繁殖死亡1）主要特征：）主要特征：2）應(yīng)用：）應(yīng)用：作生產(chǎn)菌種，科研材料。作生產(chǎn)菌種，科研材料。2、對數(shù)期3、穩(wěn)定期個體：積累有害代謝產(chǎn)物；有些出現(xiàn)芽孢。個體：積累有害代謝產(chǎn)物；有些出現(xiàn)芽孢。群體：活菌數(shù)量最多；繁殖死亡群體：活菌數(shù)量最多；繁殖死亡1）主要特征：）主要特征：2）原因：）原因：生存條件相對惡化：營養(yǎng)物質(zhì)消耗；有害生存條件相對惡化：營養(yǎng)物質(zhì)消耗；有害代謝產(chǎn)物積累；代謝產(chǎn)物積累；PHPH改變改變種內(nèi)斗爭最激烈。種內(nèi)斗爭最激烈。個體：細(xì)胞形態(tài)多樣個體：細(xì)胞形態(tài)多樣群體：活菌數(shù)急劇下降；繁殖死亡群體：活菌數(shù)急劇下降；繁殖死亡1）主要特征）主要特征：2）原因）原因：生存環(huán)境極度惡